一种外泌体在治疗脱发的药物中的应用制造技术

技术编号:22749695 阅读:49 留言:0更新日期:2019-12-07 01:30
本发明专利技术提供了一种外泌体在治疗脱发的药物中的应用,该外泌体是将胶原蛋白转导入间充质干细胞外泌体中,试验证实,本发明专利技术提供的外泌体对脱发具有较好的效果。

Application of exosomes in the treatment of alopecia

The invention provides the application of exosomes in the medicine for treating hair loss. The exosomes is to transfer collagen into the exosomes of mesenchymal stem cells. The test proves that the exosomes provided by the invention have good effect on hair loss.

【技术实现步骤摘要】
一种外泌体在治疗脱发的药物中的应用
本专利技术涉及生物细胞
,特别涉及一种外泌体在治疗脱发的药物中的应用。
技术介绍
外泌体是一类细胞外小囊泡,大小在30-100nm之间,几乎存在于所有的真核生物的体液中,并具有促进一系列细胞功能的作用。它们将DNAs、RNA和蛋白质等遗传信号平行转移到其它临近和远处的细胞,从而改变靶细胞的功能,外泌体通过交换遗传信息来充当干细胞的旁分泌调节因子,在干细胞治疗方面扮演着十分重要的作用,研究发现,外泌体具有促进皮肤创伤愈合的能力,但其治疗脱发的功效还未被研究过。
技术实现思路
为了解决以上技术问题,本专利技术提供了一种外泌体在治疗脱发的药物中的应用。一种外泌体在治疗脱发的药物中的应用,该外泌体的制备方法是将胶原蛋白转导入间充质干细胞外泌体内。间充质干细胞外泌体包括人胎盘间充质干细胞外泌体、人脐带间充质干细胞外泌体和人羊水间充质干细胞外泌体中的一种或多种进一步的改进,该外泌体由以下步骤制备而成:(1)取间充质干细胞外泌体,均匀地溶解于PBS缓冲液中,制得A液;(2)将步骤(1)制得的A液与胶原蛋白分别加入到电穿孔皿中,采用电穿孔仪对其进行电穿孔转导,制得B液;(3)将步骤(2)制得的B液用PBS缓冲液进行洗涤,再用电转染缓冲液重悬沉淀,转染时的电压为240V-300V,电容为120μF-200μF,即得具有治疗脱发功效的外泌体。进一步的改进,电转染缓冲液包括RPMI-1640培养基和添加入RPMI-1640培养基中的氯化钾、脱氧核苷酸钠和HEPES,其中氯化钾在RPMI-1640培养基中的浓度为10-20mMol/L,脱氧核苷酸钠在RPMI-1640培养基中的浓度为5-7mMol/L,HEPES在RPMI-1640培养基中的浓度为30-50mMol/L。本专利技术通过具体限定电转染缓冲液,能够进一步地提高外泌体的功效;其中,HEPES为4-羟乙基哌嗪乙磺酸,RPMI-1640培养基的成分如下:本专利技术还提供了一种生发剂,所述生发剂包括质量比为1-3:50-80的外泌体与辅料,所述外泌体的制备方法是将胶原蛋白转导入间充质干细胞外泌体内。进一步地,外泌体在制备成生发剂前进行预处理制得外泌体纳米粒,所述预处理方法包括以下步骤:S1通过冷冻干燥技术将外泌体处理为外泌体粉末;S2取质量比为6-8:18-20的角鲨烷和碳酸二辛酯,混合均匀制得混合油相,将外泌体粉末加入混合油相中混合均匀,外泌体粉末在混合油相中的浓度为5-9mg/ml,制得油相溶液;S3将酚醚磷酸酯、甘草甜素、椰油酰胺基丙基甜菜碱溶于90℃-95℃的水中,酚醚磷酸酯、甘草甜素、椰油酰胺基丙基甜菜碱在水中的浓度分别为1-3mg/ml、8-10mg/ml、1-3mg/ml,制得水相溶液;S4将油相溶液加入水相溶液中,所述油相与所述水相的体积比为2-6:10-12,用高剪切乳化剂以1000-1500rpm的转速乳化20-40min,制得初乳;S5将初乳在40-50℃条件下高压乳匀,压力为500-1000bar,循环次数为3-5次,冷却至室温,干燥至粉末,即得外泌体纳米粒。根据大量的临床试验证明:冻干粉中的细胞外泌体活性成分在破皮导入的条件下能达到最大的应用效果,破皮导入的方法包括微针、滚针、电光以及CO2介导法来在肌肤上产生微小伤口,当干细胞外泌体直接涂抹在肌肤表面上的时候,由于表面肌肤的角质层的阻隔作用而进入不了肌肤内层的目标细胞,即表皮层的肌底细胞,因此只有用介导方法破皮之后,外泌体才可以直接顺着细胞通道直达肌底细胞,发挥功效,但该操作过于麻烦,且大部分使用者无法自己使用介导方法破皮,因此在将外泌体制备成生发剂时存在较大的技术障碍,本专利技术在研究过程中发现,先将外泌体冻干成粉末,再将该外泌体粉末制备成纳米粒,不但增加了外泌体的稳定性,还提高了其透皮率,无需使用者进行破皮,正常使用即可达到较高的透皮率。进一步地,辅料包括质量比为4-8:22-40:6-10:18-22的乳酸钠、维生素E、酪朊酸钠和水。进一步的改进,生发剂还包括天然玻璃酸钠、成纤维细胞生长因子、免疫调节因子和抗氧因子,外泌体纳米粒与天然玻璃酸钠、成纤维细胞生长因子、免疫调节因子和抗氧因子的质量比为1-3:6-10:1-2:12-16:8-10。其中,免疫调节因子包括转移因子、卡舒宁、胸腺肽、干扰素、白介素12、左旋咪唑中的一种或多种,抗氧因子包括超氧化物歧化酶、儿茶酚类、类黄酮中的一种或多种。本专利技术通过加入以上成分,各成分与外泌体纳米粒配合,能够进一步提高生发剂的清洁能力,去屑效果好。进一步的改进,生发剂的制备方法包括以下步骤:A.将规定质量比的外泌体纳米粒、乳酸钠、酪朊酸钠、水、天然玻璃酸钠、成纤维细胞生长因子、免疫调节因子和抗氧因子在10-12℃条件下搅拌18-22min,搅拌速度为300-400r/min,制得混合液;B.将维生素E加入步骤A制得的混合液中,常温下搅拌5-10min,搅拌速度为600-800r/min,升温至90-98℃继续搅拌40-50min,冷却至室温,即得生发剂。本专利技术提供的外泌体可用于制备具有治疗脱发的生发剂。本专利技术提供的外泌体对脱发具有较好的效果。具体实施方式实施例1本实施例提供了一种外泌体,该外泌体的制备方法是将胶原蛋白转导入间充质干细胞外泌体内,该外泌体通过如下方法培养获得:(1)取间充质干细胞外泌体,均匀地溶解于PBS缓冲液中,制得A液;(2)将步骤(1)制得的A液与胶原蛋白分别加入到电穿孔皿中,采用电穿孔仪对其进行电穿孔转导,制得B液;(3)将步骤(2)制得的B液用PBS缓冲液进行洗涤,再用电转染缓冲液重悬沉淀,转染时的电压为240V,电容为120μF,即得具有治疗脱发功效的外泌体;其中,电转染缓冲液包括RPMI-1640培养基和添加入RPMI-1640培养基中的氯化钾、脱氧核苷酸钠和HEPES,其中氯化钾在RPMI-1640培养基中的浓度为10mMol/L,脱氧核苷酸钠在RPMI-1640培养基中的浓度为5mMol/L,HEPES在RPMI-1640培养基中的浓度为30mMol/L;其中,间充质干细胞外泌体为人羊水间充质干细胞外泌体。实施例2本实施例提供了一种外泌体,该外泌体的制备方法是将胶原蛋白转导入间充质干细胞外泌体内,该外泌体通过如下方法培养获得:(1)取间充质干细胞外泌体,均匀地溶解于PBS缓冲液中,制得A液;(2)将步骤(1)制得的A液与胶原蛋白分别加入到电穿孔皿中,采用电穿孔仪对其进行电穿孔转导,制得B液;(3)将步骤(2)制得的B液用PBS缓冲液进行洗涤,再用电转染缓冲液重悬沉淀,转染时的电压为270V,电容为160μF,即得具有治疗脱发功效的外泌体;其中,电转染缓冲液包括RPMI-16本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种外泌体在治疗脱发的药物中的应用,其特征在于,所述外泌体的制备方法是将胶原蛋白转导入间充质干细胞外泌体内。/n

【技术特征摘要】
1.一种外泌体在治疗脱发的药物中的应用,其特征在于,所述外泌体的制备方法是将胶原蛋白转导入间充质干细胞外泌体内。


2.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述间充质干细胞外泌体包括人胎盘间充质干细胞外泌体、人脐带间充质干细胞外泌体和人羊水间充质干细胞外泌体中的一种或多种。


3.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述外泌体由以下步骤制备而成:
(1)取间充质干细胞外泌体,均匀地溶解于PBS缓冲液中,制得A液;
(2)将步骤(1)制得的A液与胶原蛋白分别加入到电穿孔皿中,采用电穿孔仪对其进行电穿孔转导,制得B液;
(3)将步骤(2)制得的B液用PBS缓冲液进行洗涤,再用电转染缓冲液重悬沉淀,转染时的电压为240V-300V,电容为120μF-200μF,即得具有治疗脱发功效的外泌体。


4.如权利要求3所述的应用,其特征在于,所述电转染缓冲液包括RPMI-1640培养基和添加入所述RPMI-1640培养基中的氯化钾、脱氧核苷酸钠和HEPES,其中所述氯化钾在所述RPMI-1640培养基中的浓度为10-20mMol/L,所述脱氧核苷酸钠在所述RPMI-1640培养基中的浓度为5-7mMol/L,所述HEPES在所述RPMI-1640培养基中的浓度为30-50mMol/L。


5.一种生发剂,其特征在于,所述生发剂包括质量比为1-3:50-80的外泌体与辅料,所述外泌体的制备方法是将胶原蛋白转导入间充质干细胞外泌体内。


6.如权利要求5所述的生发剂,其特征在于,所述外泌体在制备成生发剂前进行预处理制得外泌体纳米粒,所述外泌体纳米粒包括外泌体、角鲨烷、碳酸二辛酯、酚醚磷酸酯、甘草甜素、椰油酰胺基丙基甜菜碱,所述预处理方法包括以下步骤:
S1通过冷冻干燥技术将外泌体处理为外泌体粉末;
S2取质量比为6-8:18-20...

【专利技术属性】
技术研发人员:曹毓琳白志惠
申请(专利权)人:北京臻惠康生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:北京;11

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