一种方格星虫水提取物在创伤修复中的应用制造技术

本发明专利技术提供一种方格星虫水提取物在创伤修复中的应用，所述方格星虫水提取物具有修复皮肤创伤的新用途；所述方格星虫水提取物的制备方法包括以下步骤：方格星虫虫体冲洗后打碎，按照料液比1:1‑1:3加水，调节pH为6.0‑8.0，置于50‑65℃恒温搅拌水浴锅，提取3‑6h，100℃灭菌，6000‑10000RPM离心10‑20min，冷冻干燥得方格星虫水提取物。本发明专利技术提供了一种方格星虫水提取物在修复皮肤烧伤、创伤、灼伤、烫伤等皮肤创伤药物的新用途，其效果明显优于现有技术的药物，伤口修复快，且不留疤痕，促创伤修复效果更明显。

Application of a kind of water extract of Astragalus rhamnoides in wound repair

The invention provides an application of water extract of Astragalus rhamnoides in wound repair. The water extract of Astragalus rhamnoides has a new purpose of repairing skin wound. The preparation method of the water extract of Astragalus rhamnoides includes the following steps: washing and breaking the body of Astragalus rhamnoides, adding water according to the material liquid ratio of 1:1-1:3, adjusting the pH to 6.0-8.0, stirring the water bath at a constant temperature of 50-65 \u2103, extracting 3 Six hours, 100 \u2103 sterilization, 6000 \u2011 10000rpm centrifugation for 10 \u2011 20min, freeze-drying to obtain the water extract of Astragalus rhamnoides. The invention provides a new use of water extract of Astragalus cheloni in repairing skin burns, wounds, burns, scalds and other skin trauma drugs, the effect of which is obviously superior to the medicine of the prior art, the wound repair is fast, and there is no scar left, and the effect of promoting wound repair is more obvious.

【技术实现步骤摘要】
一种方格星虫水提取物在创伤修复中的应用
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种方格星虫水提取物在创伤修复中的应用。
技术介绍
皮肤是人体最大的器官，其主要功能是隔绝机体和环境的保护屏障。在世界范围内，每年遭受皮肤创伤人数超过4000万，在中国，遭受皮肤急性创伤人数每年都超过1000万。如果受损的皮肤不能及时修复，创面很容易受到感染，演变成慢性伤口，严重的创伤甚至危及生命。良好的重塑效果会使皮肤瘢痕减小，甚至达到无痕愈合，重塑异常则会形成异常瘢痕或者瘢痕瘤，以至于留下疤痕，这将给患者的身心健康带来严重的影响。创伤愈合主要包含止血凝血期、炎症期、增殖期和组织重塑期四个时期。在机体遭受创伤后，在止血凝血期，血小板激活，分泌相关因子产生一系列级联反应，促使血液凝集成血栓，达到凝血作用，同时刺激机体产生炎症反应等。在炎症期，中性粒细胞和巨噬细胞等炎症细胞，吞噬组织碎片并杀灭入侵的细菌等环境中的污染物，同时分泌各种细胞因子，刺激成纤维细胞分裂、胶原合成和血管生成。增殖期时，成纤维细胞则产生胶原蛋白、纤连蛋白、透明质酸、蛋白多糖等各种细胞外基质(ExtracellularMatrix,ECM)成分，合成肉芽组织，同时分化成肌成纤维细胞，再分泌相关蛋白促进伤口收缩。内皮细胞会被征集到伤口促进血管生成和肉芽组织形成，为新合成组织提供营养和氧气。角质形成细胞则会迁移到真皮之上，分化形成鳞状上皮，愈合伤口。组织重塑期，胶原蛋白和纤连蛋白等在相关细胞因子和细胞的共同调节下，进行不断地合成和分解，达到一个平衡，进行不断地重塑，一直持续到1年或者更长时间。任何一个环节一旦完成必须以精确的顺序停止反应，以防过度或者延迟的反应。生物活性物质是研究药物、功能食品、生物制品的基本前提。海洋生物与陆生生物的生长环境的巨大差异，是开发结构想新颖天然活性物质的来源。方格星虫，是一种经济底栖生物，其肉质脆嫩，味道鲜美，营养丰富。方格星虫的蛋白占干重73.77%，总糖5.34%，粗脂肪0.67%，是名副其实的高蛋白低脂肪水产品。此外，方格星虫中富含多种氨基酸，以及富含锌、铜、锗、硒等7种微量元素。将海洋生物活性物质应用到促进创伤愈合和预防病理性瘢痕形成的药物，将会成为创伤领域关注的新焦点，具有很好的临床应用前景。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供一种方格星虫水提取物在创伤修复中的应用。本专利技术提供了一种方格星虫水提取物在修复皮肤烧伤、创伤、灼伤、烫伤等皮肤创伤药物的新用途，其效果明显优于现有技术的药物，伤口修复快，且不留疤痕，其主要治疗作用包括止血、抗菌、抗炎、调节细胞因子、促进伤口愈合和抑制瘢痕形成等活性，促创伤修复效果更明显。本专利技术的技术方案为：一种方格星虫水提取物在创伤修复中的应用，其特征在于，所述方格星虫水提取物具有修复皮肤创伤的新用途；所述方格星虫水提取物的制备方法包括以下步骤：方格星虫虫体冲洗后打碎，按照料液比1:1-1:3加水，调节pH为6.0-8.0，置于50-65℃恒温搅拌水浴锅，提取3-6h，100℃灭菌，6000-10000RPM离心10-20min，冷冻干燥得方格星虫水提取物（即为SNE）。进一步的，所述方格星虫水提取物在创伤修复中的应用，包括以下步骤：（1）建立小鼠全层皮损创伤模型；（2）对创伤模型的小鼠进行给药；（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。进一步的，所述步骤（1）中，小鼠全层皮损创伤模型方法为：采用5~6周龄雄性小鼠按动物保健和处理程序进行饲养，腹腔注射350mg/kg水合氯醛麻醉，背部皮肤脱毛消毒后，用直径8mm打孔器在鼠背部打一个圆孔，切取全层皮肤，深至筋膜，每只动物分笼饲养。进一步的，所述步骤（2）中，给药的方式为：取方格星虫水提取物100-200mg总氮含量/ml水(膏状)涂抹伤口，涂满为止，每天涂抹给药一次，采用无菌生理盐水为阴性对照组（即为NT），连续给药28天；阳性对照组（即为PC）采用同样方法。进一步的，所述止血活性评价采用小鼠断尾法测定，通过出血量和出血时间评价体表促凝血活性。具体为，取小鼠18只，体质量33-38g，随机分为3组。分别为空白组、方格星虫水提取物组和阳性对照组。将小鼠装进的特定容器中固定，露出尾巴，并使尾巴呈水平放置，在距尾端0.4cm处用消毒手术剪截断，用消毒棉签轻轻蘸取药物包裹鼠尾断面，用消毒棉签蘸取1g/kg剂量的方格星虫提取物或云南白药；空白组不予给药，开始计时,每隔约5s用滤纸轻轻吸取血滴,不可挤压伤口,滤纸不再粘有血迹为止，记下血液停止流出的时间。进一步的，所述抗菌活性评价的方法为：选用与感染相关的菌种，将活化好的菌液用无菌生理盐水稀释，在96孔板中加入50uL生理盐水为空白对照、加入50ul，20-70mg/mL样品，样品浓度以总氮含量计，，加入50ulTSB培养基和50uL稀释后的菌液，混匀，在550nm波长，记录为0h的OD值，37℃培养，分别测定8h和24h的OD值，分别计算抑菌率。具体的，所述抗菌活性评价的方法为：将大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、海藻希瓦氏菌、李斯特氏菌、铜绿假单胞菌、泥鳅嗜水汽菌、无乳链球菌等种于3%TSB液体培养基中进行活化，将溶藻弧菌、副溶血性弧菌利用3%TSB-3%NaCl培养基活化。将活化好的菌液用无菌生理盐水稀释至OD550值为0.1，在96孔板中加入50uL生理盐水为空白对照、加入50ul，20-70mg/mL样品（以总氮算）为样品组，各组均加入50ulTSB培养基和50uL稀释后的菌液，混匀，550nm测定吸光度，记录为0hOD值，然后放入37℃培养箱中培养8h测定一次OD值，24h测定一次OD值。分别计算抑菌率，公式如下(1)所示：。进一步的，所述伤口愈合率测定和掉痂时间测定的方法为：所述步骤（2）中涂抹给药后，从第0天开始，每2天在同一固定高度拍照记录伤口创面情况，用软件计算伤口愈合率、记录掉痂时间；伤口愈合率测定的公式（2）为：，公式中n是造模后天数，单位：天。进一步的，所述步骤（3）中，所述步骤（3）中，所述表皮生长因子测定和炎症因子测定中涉及的因子包括TNF-a、IL-1β、TGF-β1、COL1A1(I型胶原蛋白)mRNA、TGF-β1、a-SMA、TGF-BRII、Smad7中的任两种或以上。进一步的，所述步骤（3）中，表皮生长因子测定、炎症因子测定采用实时荧光定量PCR分析(RT-PCR)。具体方法为：使用RNAIsoPlus和匀浆器从伤口组织中提取总RNA。使用PrimeScriptTMRTreagentKitwithgDNAEraser(PerfectRealTime)试剂盒进行逆转录合成cDNA，用TBGreenTM本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种方格星虫水提取物在创伤修复中的应用，其特征在于，所述方格星虫水提取物具有修复皮肤创伤的新用途；/n所述方格星虫水提取物的制备方法包括以下步骤：方格星虫虫体冲洗后打碎，按照料液比1:1-1:3加水，调节pH为6.0-8.0，置于50-65℃恒温搅拌水浴锅，提取3-6h，100℃灭菌，6000-10000RPM离心10-20min，冷冻干燥得方格星虫水提取物。/n

【技术特征摘要】
1.一种方格星虫水提取物在创伤修复中的应用，其特征在于，所述方格星虫水提取物具有修复皮肤创伤的新用途；
所述方格星虫水提取物的制备方法包括以下步骤：方格星虫虫体冲洗后打碎，按照料液比1:1-1:3加水，调节pH为6.0-8.0，置于50-65℃恒温搅拌水浴锅，提取3-6h，100℃灭菌，6000-10000RPM离心10-20min，冷冻干燥得方格星虫水提取物。


2.根据权利要求1所述的方格星虫水提取物在创伤修复中的应用，其特征在于，包括以下步骤：
（1）建立小鼠全层皮损创伤模型；
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。


3.根据权利要求2所述的方格星虫水提取物在创伤修复中的应用，其特征在于，所述步骤（2）中，给药的方式为：取方格星虫水提取物100-200mg总氮含量/ml水涂抹伤口，涂满为止，每天涂抹给药一次，采用无菌生理盐水为阴性对照组，连续给药28天。


4.根据权利要求3所述的方格星虫水提取物在创伤修复中的应用，其特征在于，所述止血活性评价采用小鼠断尾法测定，通过出血量和出血时间评价体表促凝血活性。


5.根据权利要求3所述的方格星虫水提取物在创伤修复中的应用，其特征在于，所述抗菌活性评价的方法为：选用与感染相关的菌种，将活化好的菌液用无菌生理盐水稀释，在96孔板中加入50uL生理盐水为空白对照、加入50ul，20-70mg/mL样品，样品浓度以总氮含量计，，加入50ulTSB培养基和50uL稀释后的菌液，混匀，在550nm波长，记录为0h的OD值，37℃培养，分别测定8h和24h的OD值，分别计算抑菌率。


6.根据权利要求3所述的方格星虫水提取物在创伤修复中的应用，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：章超桦，林海生，秦小明，曾少葵，郑志鸿，
申请(专利权)人：广东海洋大学，
类型：发明
国别省市：广东;44