从华顿氏胶获得的用于治疗脓毒症的间充质干细胞制造技术

本发明专利技术涉及来自华顿氏胶的人间充质干细胞、其制备方法以及其治疗用途，特别是用于治疗脓毒症。

Mesenchymal stem cells derived from Wharton's glue for the treatment of sepsis

The invention relates to a human mesenchymal stem cell from Wharton's glue, a preparation method thereof and a therapeutic use thereof, in particular for the treatment of sepsis.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】从华顿氏胶获得的用于治疗脓毒症的间充质干细胞专利
本专利技术涉及来自华顿氏胶(Wharton’sjelly)的人间充质干细胞、其制备方法及其治疗用途，特别是用于治疗脓毒症。专利技术背景尽管通常鲜为人知，但脓毒性休克与心肌梗塞一起是全世界第十一大死亡原因。作为非冠状动脉复苏室入住和死亡的主要原因，它的发病率为每100,000居民50至100例，并且近年来在持续增长(Dombrovskiyetal.,2007)。预期寿命的增加、多药耐药细菌数量的增加以及更频繁的诊断都是这种现象的根源。脓毒性休克的病理生理学特别复杂(Iskanderetal.,2013)，同时涉及促炎和抗炎细胞因子以及免疫麻痹。由于常规药物分子不能同时在炎症方面和抗炎方面发挥作用，同时增强免疫系统，因此对脓毒性休克没有特异性治疗。然而，许多使用内毒素血症和腹膜炎小鼠模型的研究揭示，间充质干细胞(MSC)能够降低IL6、IL1β、IL12、IL2和IL17的血浆水平(Chaoetal.,2014a；Kimetal.,2014；Luoetal.,2014；Pedrazzaetal.,2014)并降低肺、肝脏和肠(Gonzalez-Reyetal.,2009)或支气管肺泡液(Meietal.,2010a)中TNFα、IL6、IL1β、IL12的组织浓度。MSC限制嗜中性粒细胞组织迁移的能力有助于减轻炎症对组织的有害作用(Rojasetal.,2014)。通过盲肠结扎和穿刺(CLP)经历多种微生物脓毒症或通过内毒素血症经历脓毒症的小鼠的组织学切片研究显示，当用MSC治疗时肺和肾脏组织的炎症减少(Krasnodembskayaetal.,2010)。类似地，这些小鼠出现功能性器官的生物标志，如淀粉酶(l'amylasémie)、肌酸酐(lacréatininémie)、胆红素(labilirubinémie)、天冬氨酸氨基转移酶(ASAT)和丙氨酸氨基转移酶(ALAT)，其显著优于用盐水溶液治疗的小鼠(Luoetal.,2014；Pedrazzaetal.,2014)。除了它们的限制组织改变的能力之外，MSC还能够提高脓毒性休克期间的细菌清除率。确实，几个研究小组已经证明，将MSC注射到脓毒症小鼠中不仅通过增加单核细胞、巨噬细胞和嗜中性粒细胞的吞噬活性而且还通过MSC自身合成并分泌抗菌肽如LL-37和铁调素(hepcidin)而减少了菌血症(Alcayaga-Mirandaetal.,2015；Devaneyetal.,2015；Gonzalez-Reyetal.,2009；Halletal.,2013；Krasnodembskayaetal.,2010；Meietal.,2010b)。此外，MSC表现出内在的“归巢(homing)”特性，这使得它们倾向于沿趋化因子梯度向受损器官如肝脏、肾脏和肺部迁移。在器官衰竭病理学如脓毒性休克的情况下，这种到达受损组织的能力是MSC特别令人关注的特性(Wannemuehleretal.,2012)。最后，通过在严重脓毒症的小鼠模型中注射MSC来减少组织损伤导致了存活率的增加。许多研究揭示，在脓毒症前或脓毒症后通过MSC治疗的动物的死亡率显著降低(Alcayaga-Mirandaetal.,2015；Devaneyetal.,2015；Gonzalez-Reyetal.,2009；Krasnodembskayaetal.,2012；Luoetal.,2014；Némethetal.,2009)。因此，通过它们调节过度炎症和减轻组织损伤的能力，MSC似乎能够显著改善脓毒性休克后存活率。MSC有三种主要来源：骨髓(BM)、脂肪组织和脐带的华顿氏胶(WG)。与来自BM的MSC相比，在无需麻醉的情况下以简单、非侵入性方式获得的来自WG的MSC通过克服与BM收集相关的风险，可以更广泛地应用MSC捐赠。然而，虽然已经在脓毒性休克动物模型中研究了来自BM的MSC或来自脂肪组织的MSC，但是对来自华顿氏胶的MSC在这方面的潜力的文献记载仍然很少。迄今为止，只有五篇出版物通过使用CLP小鼠模型分析了WG-MSC对脓毒性休克的治疗潜力(Chaoetal.,2014a；Condoretal.,2016；Wuetal.,2015；Zhaoetal.,2014)。然而，这些研究中使用的细胞是新鲜细胞。迄今为止公布的研究均未涉及在脓毒性休克适应症中解冻WG-MSC，这可能是由于冷冻和解冻对干细胞的药理学和免疫调节潜力的影响的一般知识(etal.,Cytotherapy,2012.14(2):147-52；Chinnaduraietal.,2016；Molletal.,2016)。此外，Mezey和Nemeth(2015)描述了后期注射MSC时其抗菌性能降低。因此，目前，这些技术限制阻碍了在临床条件下使用WG-MSC进行治疗性治疗。出乎所有人的意料，本专利技术的专利技术人首次表明解冻的WG-MSC保持其治疗潜力并可用于治疗脓毒症。专利技术概述本专利技术涉及解冻的来自华顿氏胶的人间充质干细胞(MSC)，用于治疗脓毒症，特别是脓毒性休克。在一个实施方案中，本专利技术的解冻的来自华顿氏胶的人MSC的特征在于，选自CD90、CD73、CD105、CD29、CD44、CD146、CD166、HLA-ABC的至少一种标志物的表达水平比相同标志物在新鲜的来自华顿氏胶的人MSC中的表达水平低至少10％。在一个实施方案中，本专利技术的解冻的来自华顿氏胶的人MSC的特征在于，标志物CD90的表达水平比标志物CD90在新鲜的来自华顿氏胶的人MSC中的表达水平低至少10％。在一个实施方案中，本专利技术的解冻的来自华顿氏胶的人MSC的特征在于，所述MSC表达选自包含以下的组的至少一种蛋白质：ACTB、ANXA1、CAPZB、LASP1、PRDX2、PRDX3、PSA3、RS12和SYWC。在一个实施方案中，本专利技术的解冻的来自华顿氏胶的人MSC的特征在于，所述MSC基本上不表达选自包含以下的组的至少一种蛋白质：ACTS、AL1B1、ANX10、GBB1、GBB2、GPRIN1、DTNA、MIPO1、PSB3和PSDE。在一个实施方案中，本专利技术的解冻的来自华顿氏胶的人MSC的特征在于，所述MSC在体外条件下和/或在非炎性条件下分泌选自以下的至少一种生长因子：BMP-7、IGFBP-1、胰岛素、FGF-7、NT-4和VEGF-D。在一个实施方案中，本专利技术的解冻的来自华顿氏胶的人MSC的特征在于，所述MSC在体内条件下和/或在炎性条件下分泌选自BMP-7和TGFβ3的至少一种生长因子。在一个实施方案中，本专利技术的解冻的来自华顿氏胶的人MSC的特征在于，所述MSC在体内条件下和/或在炎性条件下基本上不分泌IGFBP-1。在一个实施方案中，本专利技术的解冻的来自华顿氏胶的人MSC的特征在于，所述MSC分泌的VEGF比新鲜的来自华顿氏胶的人MSC多至少1.2倍。在一个实施方案中，本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.解冻的来自华顿氏胶的人间充质干细胞(MSC)，用于治疗脓毒症，特别是脓毒性休克。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170228 FR 17516491.解冻的来自华顿氏胶的人间充质干细胞(MSC)，用于治疗脓毒症，特别是脓毒性休克。


2.根据权利要求1所述的解冻的来自华顿氏胶的人MSC的用途，其特征在于，选自CD90、CD73、CD105、CD29、CD44、CD146、CD166、HLA-ABC的至少一种标志物的表达水平比相同标志物在新鲜的来自华顿氏胶的人MSC中的表达水平低至少10％。


3.根据权利要求1或2所述的解冻的来自华顿氏胶的人MSC的用途，其特征在于，标志物CD90的表达水平比标志物CD90在新鲜的来自华顿氏胶的人MSC中的表达水平低至少10％。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的解冻的来自华顿氏胶的人MSC的用途，其特征在于，所述MSC表达选自包含以下的组的至少一种蛋白质：ACTB、ANXA1、CAPZB、LASP1、PRDX2、PRDX3、PSA3、RS12和SYWC。


5.根据权利要求1至4中任一项所述的解冻的来自华顿氏胶的人MSC的用途，其特征在于，所述MSC基本上不表达选自包含以下的组的至少一种蛋白质：ACTS、AL1B1、ANX10、GBB1、GBB2、GPRIN1、DTNA、MIPO1、PSB3和PSDE。


6.根据权利要求1至5中任一项所述的解冻的来自华顿氏胶的人MSC的用途，其特征在于，所述MSC在体外条件下和/或在非炎性条件下分泌选自以下的至少一种生长因子：BMP-7、IGFBP-1、胰岛素、FGF-7、NT-4和VEGF-D。


7.根据权利要求1至6中任一项所述的解冻的来自华顿氏胶的人MSC的用途，其特征在于，所述MSC在体内条件和/或非炎性条件下分泌选自BMP-7和TGFβ3的至少一种生长因子。


8.根据权利要求1至7中任一项所述的解冻的来...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·邦苏桑，S·吉博，L·雷佩尔，C·拉瓦鲁，A·布芬泽，L·阿韦森克，C·胡塞尔斯泰因，
申请(专利权)人：洛林大学，南锡大学地区医疗中心，
类型：发明
国别省市：法国;FR