一种从植物中分离熊果酸和齐墩果酸的方法技术

一种从植物中分离熊果酸和齐墩果酸的方法，所述方法为：在分液漏斗中加入正己烷、二氯甲烷、甲醇和水组成的混合溶剂体系，充分振摇后静置分层，取上相加入酸性物质作为固定相，下相加入碱性物质作为流动相；取植物的粗提物用固定相和未碱化的下相的混合溶液溶解，得到样品溶液；取固定相注满逆流色谱仪的分离柱，随后注入样品溶液，待进样完成后，开启速度控制器，使分离柱正转，持续注入流动相，紫外检测器检测，用自动部分收集器收集洗脱液，合并含目标物质的洗脱液，减压蒸除溶剂并干燥，得到目标产物；本发明专利技术通过pH区带精制逆流色谱分离熊果酸和齐墩果酸，工艺简单，回收率高。

A method of separating ursolic acid and oleanolic acid from plants

A method for separating ursolic acid and oleanolic acid from plants is described as follows: a mixed solvent system composed of n-hexane, dichloromethane, methanol and water is added into the separating funnel, after full shaking, the mixture is placed and stratified, the upper phase is added with acid substance as the fixed phase, and the lower phase is added with alkaline substance as the mobile phase; the crude extract of plants is mixed with the fixed phase and the non alkaline lower phase Dissolve the combined solution to obtain the sample solution; fill the fixed phase with the separation column of the countercurrent chromatograph, and then inject the sample solution. After the injection is completed, turn on the speed controller to make the separation column rotate forward and continuously inject the mobile phase. Detect with the UV detector, collect the eluate with the automatic partial collector, combine the eluate containing the target substance, evaporate the solvent under reduced pressure and dry it to obtain the target Product: the invention can separate ursolic acid and oleanolic acid by countercurrent chromatography with pH zone refining, the process is simple and the recovery rate is high.

【技术实现步骤摘要】
一种从植物中分离熊果酸和齐墩果酸的方法(一)
本专利技术涉及一种从植物中分离熊果酸和齐墩果酸的方法。(二)
技术介绍
熊果酸是存在于天然植物中的一种三萜类化合物，具有镇静、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖等多种生物学效应，熊果酸还具有明显的抗氧化功能，因而被广泛地用作医药和化妆品原料。熊果酸临床表现有显著而迅速降低谷丙转氨酶、血清转氨酶、消退黄疽、增进食欲、抗纤维化和恢复肝功能的作用，具有见效快、疗程短、效果稳定的特点。齐墩果酸在植物中存在很广泛，一般含量0.2％～2％，为广谱抗菌药，临床上用于护肝降酶，治疗支气管炎、肺炎、急性扁桃体炎、牙周炎、菌痢、急性肠胃炎、泌尿系统感染。另外，临床上还用于治疗急性肝炎。楤木(Araliachinensis)，是伞形目五加科植物，具有祛风除湿，利尿消肿，活血止痛等作用，能用于肝炎，淋巴结肿大，肾炎水肿，糖尿病，胃痛，风湿关节痛，腰腿痛，跌打损伤等疾病的治疗。苹果皮是蔷薇科苹果属植物苹果(Malusdomestica)的果皮，苹果皮中含有丰富的抗氧化成分及生物活性物质，吃苹果皮对健康有益。枇杷叶为蔷薇科枇杷属植物枇杷(EriobotryajaponicaThunb.)的干燥叶有清肺止咳，和胃利尿，止渴的功效以及有治疗肺热痰嗽，咳血，衄血，胃热呕哕作用。齐墩果酸是楤木中的主要活性成分，熊果酸与齐墩果酸为苹果皮和枇杷叶中重要的活性成分。楤木全国分布广泛，作为药材早被各地民间采用，楤木中齐墩果酸的含量非常高，在西部大开发、退耕还林、荒山造林中，应积极开发这一资源。我国是世界最大的苹果生产国和消费国，在日常消费和加工苹果时，会产生大量的苹果皮。苹果皮如果不处理好，将产生严重的环境污染问题。熊果酸是苹果皮中含量最丰富的五环三萜类化合物，近年来成为研究热点。中国是世界上最主要的枇杷叶生产国，在长江以南的各省皆有种植，因此枇杷叶资源非常丰富。然而，大多数枇杷叶仍作为垃圾处理，如果处理不当，如焚烧，还会污染环境。枇杷叶中熊果酸和齐墩果酸的含量较高，通过对枇杷叶的有效活性成分的深加工提取纯化研究使其“变废为宝”，那么其市场前景必然非常乐观。因此，大力开发富含熊果酸以及齐墩果酸的植物，将具有良好的经济效益和社会意义。目前，熊果酸和齐墩果酸的提取主要通过硅胶柱层析，硅胶柱层析操作繁琐，步骤较多，过程缓慢增加生产周期，得到目标物熊果酸和齐墩果酸耗时长，成本高，难以得到广泛应用。pH区带精制逆流色谱(pH-zone-refiningcountercurrentchromatography)是由普通逆流色谱发展而来的一种特殊分离技术，具有进样量大(达到克级)、分离纯度高、分离时间短等优点。该技术突出的特点是在固定相中加入了保留酸或碱，在流动相中加入了洗脱碱或酸，根据分离物质的解离常数(pKa)及疏水性的差异而实现分离，目标组分以矩形峰被洗脱出来，而杂质则被富集在矩形峰边缘，并且不同组分被洗脱出来伴随着pH值的变化。主要应用于有机酸碱衍生物、多肽类、有机染料、生物碱、同分异构体、游离肽等制备性分离。(三)
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种制备性分离熊果酸和齐墩果酸的方法，快速地将熊果酸和齐墩果酸两种物质从植物中分离出来，工艺简单，具有更强的目的性，快捷高效。本专利技术的技术方案如下：一种从植物中分离熊果酸和齐墩果酸的方法，所述方法为：(1)在分液漏斗中加入正己烷、二氯甲烷、甲醇和水组成的混合溶剂体系，充分振摇后静置分层，取上相加入酸性物质作为固定相，下相加入碱性物质作为流动相；所述混合溶剂体系中，正己烷、二氯甲烷、甲醇、水的体积份数分别为6～8份、3～5份、2～4份、6～8份，优选分别为7份、3份、2份、8份；所述酸性物质优选为三氟乙酸或醋酸，最优选三氟乙酸，所述酸性物质在固定相中的浓度为5～20mM，优选10mM；所述碱性物质优选为氨水(25～28wt％NH3)或三乙胺，最优选氨水，所述碱性物质在流动相中的浓度为5～20mM，优选10mM；(2)取植物的粗提物用固定相和未碱化的下相的混合溶液溶解，得到样品溶液；所述植物例如为：楤木、苹果皮、枇杷叶；所述固定相和未碱化的下相的体积比为1：1；所述固定相和未碱化的下相的混合溶液的体积用量以植物的粗提物的质量计为0.1mL/mg；(3)取固定相注满逆流色谱仪的分离柱，随后注入样品溶液，待进样完成后，开启速度控制器，使分离柱正转，在550～850r/min(优选600r/min)转速下，以1～2mL/min(优选1.5mL/min)的流速持续注入流动相，以波长200～254nm的紫外检测器检测，用自动部分收集器收集洗脱液，合并含目标物质的洗脱液，减压蒸除溶剂并干燥，得到目标产物；所述样品溶液可通过进样圈注入或通过泵泵入逆流色谱仪；所述样品溶液的进样体积通常小于分离柱柱体积的30％，优选5％～10％；所述目标物质可通过薄层层析或高效液相色谱进行监测，合并与熊果酸和齐墩果酸标准品Rf值或保留时间相同的含熊果酸和齐墩果酸的洗脱液；所述薄层层析的展开剂为环己烷、乙酸乙酯和冰醋酸体积比10：3：0.5的混合溶剂；所述高效液相色谱的检测条件为：Agilent5HC-C18(2)column(4.6×250mm，5μm)；柱温25℃；流动相为乙腈-甲醇-0.5％醋酸铵溶液(67：12：21，v/v/v)，等度洗脱模式；流速：1mL/min；检测波长：210nm；进样量：20μL。本专利技术中，所述植物的粗提物的制备方法例举如下：楤木的粗提物按如下方法制得：取楤木根粉，用体积分数95％乙醇水溶液回流提取2次，每次1小时，提取液蒸除溶剂成稠浸膏状，稠膏物加10wt％H2SO4水溶液，于100℃下冷凝回流水解5h，水解完成后，将水解沉淀物过滤，再反复用水将沉淀物洗至中性，沉淀物加10wt％NaOH水溶液，调pH至8～9，加热至70℃，趁热过滤，滤液加10wt％HCl水溶液调pH至1，静置8～12h，抽滤，滤出的沉淀物烘干得到楤木的粗提物。苹果皮的粗提物按如下方法制得：将苹果皮粉末加到100℃水中煎煮10min，重复煎煮5～7次，直到过滤的水变澄清，将煎煮后的苹果皮粉末放在空气烘箱(40℃)干燥，随后用体积分数95％乙醇水溶液回流提取2～3次，每次1小时，提取液浓缩后，加入10wt％HCl水溶液，调pH至3，静置8～12h，抽滤，滤饼用石油醚洗涤，烘干得到苹果皮的粗提物。枇杷叶的粗提物按如下方法制得：将干燥枇杷叶粉碎，过20目筛，称取枇杷叶细粉，加体积分数95％乙醇水溶液冷凝回流提取1h，过滤，滤渣重复回流提取2～3次，合并提取液，加入活性炭升温至70℃，振荡脱色20min，过滤，滤液减压浓缩至干，得到枇杷叶的粗提物。本专利技术的有益效果在于：通过pH区带精制逆流色谱分离熊果酸和齐墩果酸，工艺简单，回收率高，为熊果酸和齐墩果酸的分离纯化提供了新思路。(四)附图说明图1：实本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从植物中分离熊果酸和齐墩果酸的方法，其特征在于，所述方法为：/n(1)在分液漏斗中加入正己烷、二氯甲烷、甲醇和水组成的混合溶剂体系，充分振摇后静置分层，取上相加入酸性物质作为固定相，下相加入碱性物质作为流动相；/n所述混合溶剂体系中，正己烷、二氯甲烷、甲醇、水的体积份数分别为6～8份、3～5份、2～4份、6～8份；/n所述酸性物质为三氟乙酸或醋酸，所述酸性物质在固定相中的浓度为5～20mM；/n所述碱性物质为氨水或三乙胺，所述碱性物质在流动相中的浓度为5～20mM；/n(2)取植物的粗提物用固定相和未碱化的下相的混合溶液溶解，得到样品溶液；/n(3)取固定相注满逆流色谱仪的分离柱，随后注入样品溶液，待进样完成后，开启速度控制器，使分离柱正转，在550～850r/min转速下，以1～2mL/min的流速持续注入流动相，以波长200～254nm的紫外检测器检测，用自动部分收集器收集洗脱液，合并含目标物质的洗脱液，减压蒸除溶剂并干燥，得到目标产物。/n

【技术特征摘要】
1.一种从植物中分离熊果酸和齐墩果酸的方法，其特征在于，所述方法为：
(1)在分液漏斗中加入正己烷、二氯甲烷、甲醇和水组成的混合溶剂体系，充分振摇后静置分层，取上相加入酸性物质作为固定相，下相加入碱性物质作为流动相；
所述混合溶剂体系中，正己烷、二氯甲烷、甲醇、水的体积份数分别为6～8份、3～5份、2～4份、6～8份；
所述酸性物质为三氟乙酸或醋酸，所述酸性物质在固定相中的浓度为5～20mM；
所述碱性物质为氨水或三乙胺，所述碱性物质在流动相中的浓度为5～20mM；
(2)取植物的粗提物用固定相和未碱化的下相的混合溶液溶解，得到样品溶液；
(3)取固定相注满逆流色谱仪的分离柱，随后注入样品溶液，待进样完成后，开启速度控制器，使分离柱正转，在550～850r/min转速下，以1～2mL/min的流速持续注入流动相，以波长200～254nm的紫外检测器检测，用自动部分收集器收集洗脱液，合并含目标物质的洗脱液，减压蒸除溶剂并干燥，得到目标产物。


2.如权利要求1所述的从植物中分离熊果酸和齐墩果酸的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述混合溶剂体系中，正己烷、二氯甲烷、甲醇、水的体积份数分别为7份、3份、2份、8份。


3.如权利要求1所述的从植物中分离熊果酸和齐墩果酸的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述植物为：楤木、苹果皮、枇杷叶。


4.如权利要求1所述的从植物中分离熊果酸和齐墩果酸的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述固定相和未碱化的下相的体积比为1：1。


5.如权利要求1所述的从植物中分离熊果酸和齐墩果酸的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述固定相和未碱化的下相的混合溶液的体积用量以植物的粗提物的质量计为0.1mL/mg。


6.如权利要求1所述的从植物中分离熊果酸和齐墩果酸的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述样品溶液通过进样圈注入或通过泵泵入逆流色谱仪。


7.如权利要求1所述的从植物中分离熊果酸和齐墩果酸的方法，其特征在于，步骤(3)中...

【专利技术属性】
技术研发人员：童胜强，王超越，王香，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33