一种不同产地裸花紫珠药材的鉴别方法技术

本发明专利技术涉及药物分析技术领域，具体为一种不同产地裸花紫珠药材的鉴别方法。本发明专利技术采用超高效液相色谱法建立裸花紫珠药材特征图谱，并采用具有监督模式的PLS‑DA方法，对裸花紫珠样品的UPLC特征图谱进行分析得到的载荷图，对VIP值进行分析，筛选出VIP值大于1.0的成分，这些成分在特征图谱作为区分裸花紫珠产地的标志物，通过这些差异性成分对不同产地的裸花紫珠药材进行区分和鉴别。本发明专利技术通过裸花紫珠产地的标志物可以快速精准鉴别来源于不同产地裸花紫珠药材，可实现裸花紫珠道地药材快速评价。

A method for identification of gymnospermum from different habitats

The invention relates to the technical field of drug analysis, in particular to a identification method of naked flower Purple Pearl medicine from different producing areas. In the invention, the ultra-high performance liquid chromatography method is used to establish the characteristic map of the naked flower Purple Pearl medicine, and the PLS \u2011 DA method with the supervision mode is used to analyze the load map obtained from the UPLC characteristic map of the naked flower Purple Pearl sample, analyze the VIP value, and select the components whose VIP value is greater than 1.0. These components are used as the marker to distinguish the origin of the naked flower purple pearl in the characteristic map, through these differences Sexual components were used to distinguish and identify the raw materials from different areas. The invention can quickly and accurately identify the raw materials from different producing areas through the marks of the producing areas of the naked flower purple pearl, and can realize the rapid evaluation of the raw materials of the naked flower purple pearl.

【技术实现步骤摘要】
一种不同产地裸花紫珠药材的鉴别方法
本专利技术涉及中药药物分析
，具体为一种不同产地裸花紫珠药材的鉴别方法。
技术介绍
所谓道地药材，又称地道药材，是优质纯真药材的专用名词，它是指历史悠久、产地适宜、品种优良、产量宏丰、炮制考究、疗效突出、带有地域特点的药材，道地药材以外其它各地所处的地理环境十分复杂，水土、气候、日照、生物分布都不完全相同，因此，药物本身的质量，也即其治疗作用有着显著的差异。所以古今医家都喜欢使用道地药材。中药材具有多基原、多产地的属性,导致其产品质量差异悬殊。除此以外,外在因素方面包括品种、栽培种植及产地生态环境、采收加工、炮制加工、运输贮藏条件、提取纯化过程等均会对质量造成影响(郝敏，陆兔林，毛春琴，等.基于中药质量标志物的饮片质量控制研究[J].中草药,2017,48(9),1699-1708.)。刘昌孝等根据目前中药质量标准中存在的问题,首次提出了“中药质量标志物”的新概念,即Q-marker(刘昌孝,陈士林,肖小河,等.中药质量标志物(Q-Marker):中药产品质量控制的新概念[J].中草药,2016,47(9):1443-1457.)，在行业内引起了强烈反响。此后，他又提出基于中药质量标志物的中药质量追溯系统建设，通过从药材源头到成品全过程的质量、标准和控制研究,构建全程可溯源的控制和基于中药质量标志物的中药产品质量追溯系统,是保证中药质量和产业过程全程控制的关键(刘昌孝.基于中药质量标志物的中药质量追溯系统建设[J].中草药,2017,48(18):3669-3676.)。裸花紫珠CallicarpanudifloraHook.etArn.是马鞭草科紫珠属CallicarpaL.植物。药用部位为干燥叶片,全年皆可采收。具有抗菌止血、消炎解毒、散瘀消肿、祛风祛湿功效、跌打肿痛、风湿肿痛、肺结核咳血、胃肠出血等症。《中国药典》1977年版曾收录裸花紫珠，2015年版新增中药品种中再次收录了该药材。其化学成分主要包括苯丙素类、黄酮类、三萜类、二萜类、环烯醚萜类、酚酸类及其苷和甾醇等成分。历代本草记载的混乱、植物形态细微差别以及引用错误等多种原因造成了现今裸花紫珠药材品种复杂,来源较为混乱，其同物异名、同名异物现象较为严重。近年来,随着裸花紫珠研究与开发进程的不断推进,其多种药理活性被广泛应用于临床,而在裸花紫珠日渐重要的市场价值影响之下,出现了较多的裸花紫珠混淆品,尽管其中大部分与裸花紫珠同属紫珠属,但其功效不尽相同。我们采用了UPLC活性特征指纹色谱的方法，结合化学计量学手段，可实现裸花紫珠与其它紫珠属药材的精准区分，快速鉴别裸花紫珠药材(杨义芳等.裸花紫珠药材的活性特征指纹色谱的构建和色谱/质谱在线快速鉴别的方法.CN.1019-05-)。有助于裸花紫珠与其混淆品进行区别归类,确保其临床用药安全有效,促进其资源的合理开发与应用。裸花紫珠是海南大宗道地药材,是一种常用的海南传统民族药材，因主要生长在海南黎族地区，黎族疗伤圣药，也被称为黎药，在中国广东、广西、海南以及东南亚的印度、越南、新加坡等地均有分布，其中以海南五指山产的为上品，具有明显地域特点的药材，其它各地所处的地理环境十分复杂，水土、气候、日照、生物分布都不完全相同，因此，药物本身的质量，也即其治疗作用有着显著的差异。为此对裸花紫珠道地药材的快速评价方法亟待解决。同时提高药材鉴定水平，完善其质量标准是主流医药市场对于其品种的需要。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是为了解决不同产地裸花紫珠中药材无法进行快速有效区分鉴别，缺少裸花紫珠道地药材快速评价方法的技术问题，而提供了一种产地标志物对不同产地裸花紫珠药材进行鉴别的新方法。本专利技术提供了一种不同产地裸花紫珠药材的鉴别方法，其包含下列步骤：色谱条件：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，柱温15～50℃；检测波长210nm；流动相B为乙腈，流动相A为0.1％～0.5％的磷酸水溶液，流速0.2～0.5mL/min；梯度洗脱；洗脱梯度如下所示：供试品溶液的制备:将裸花紫珠药材粉碎，过30～60目筛，裸花紫珠药材粉末与体积质量比10～80倍量的60％～95％的甲醇水溶液混合，超声提取30～60min，提取后，冷却，用微孔滤膜过滤，即可。对照品溶液的制备：取对照品适量，加甲醇溶解至一定浓度，用微孔滤膜过滤，即可。对照品包括毛蕊花糖苷、连翘酯苷B、木犀草苷、咖啡酸、熊果酸、木犀草素-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、木犀草素-3′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、木犀草素、藿香黄酮醇。检测：精密吸取供试品溶液1～20uL，注入超高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得裸花紫珠特征图谱。对照特征图谱生成：构建的10批次以上的裸花紫珠超高效液相色谱特征图谱，采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件，选择分离度良好、峰面积百分比大于0.5％的共有峰作为指纹峰，生成由42个共有峰构成的裸花紫珠裸花紫珠超高效液相色谱对照特征图谱。裸花紫珠样品的差异性成分分析：采用具有监督模式的PLS-DA(偏最小二乘法判别分析)方法，对裸花紫珠样品的UPLC特征图谱进行分析，寻找其中的差异标志物。由PLS-DA分析得到的载荷图。对VIP值(变量重要性投影值)进行分析，筛选出VIP值大于1.0的成分，它们明显偏离了主要化合物聚集区和原点，说明这些化合物对不同产地裸花紫珠药材的区分贡献较大。这些成分在特征图谱作为区分裸花紫珠产地的标志物，通过这些差异性成分对不同产地的裸花紫珠药材进行区分和鉴别。本专利技术中，所述色谱条件进一步优选为：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，柱温45℃；检测波长210nm；流动相B为乙腈，流动相A为0.1％的磷酸水溶液，流速0.3mL/min；梯度洗脱；洗脱梯度如下所示：所述供试品溶液的制备方法进一步优选为:将裸花紫珠药材粉碎，过30～60目筛，裸花紫珠药材粉末与体积质量比50倍量的80％的甲醇水溶液混合，超声提取45min，提取后，冷却，用微孔滤膜过滤，即可。所述检测方法进一步优选为:精密吸取供试品溶液2～5uL，注入超高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得裸花紫珠指纹图谱。本专利技术中，19批裸花紫珠药材(S1-S19)经江西普正制药有限公司吴永忠研究员鉴定为马鞭草科裸花紫珠CallicarpanudifloraHook.etArn.的干燥叶经密封保存于阴凉干燥处，药材信息如表1所示。表1裸花紫珠药材信息本专利技术中，对照品信息如表2所示表2对照品的信息本专利技术的有益效果：各地裸花紫珠药材所处的地理环境的复杂，水土、气候、日照、生物分布的不同，本质上是由于它们次生代谢成分的生物积累差异，从而从生物分子水平上阐明地域差别。本专利技术通过裸花紫珠产地的标志物可以快速精准鉴别来源于不同产地裸花紫珠药材，可实现裸花紫珠道地药材快速评价。附图说明图1为实施例1中不同紫外波长下裸花紫珠UPLC-UV色谱图本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种不同产地裸花紫珠药材的鉴别方法，其特征在于包含下列步骤：/n色谱条件：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，柱温15～50℃；检测波长210nm；流动相B为乙腈，流动相A为0.1％～0.5％的磷酸水溶液，流速0.2～0.5mL/min；梯度洗脱；洗脱梯度如下所示：/n

【技术特征摘要】
1.一种不同产地裸花紫珠药材的鉴别方法，其特征在于包含下列步骤：
色谱条件：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，柱温15～50℃；检测波长210nm；流动相B为乙腈，流动相A为0.1％～0.5％的磷酸水溶液，流速0.2～0.5mL/min；梯度洗脱；洗脱梯度如下所示：



供试品溶液的制备:将裸花紫珠药材粉碎，过30～60目筛，裸花紫珠药材粉末与体积质量比10～80倍量的60％～95％的甲醇水溶液混合，超声提取30～60min，提取后，冷却，用微孔滤膜过滤，即可。
对照品溶液的制备：取对照品适量，加甲醇溶解至一定浓度，用微孔滤膜过滤，即可。对照品包括毛蕊花糖苷、连翘酯苷B、木犀草苷、咖啡酸、熊果酸、木犀草素-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、木犀草素-3′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、木犀草素、藿香黄酮醇。
检测：精密吸取供试品溶液1～20uL，注入超高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得裸花紫珠特征图谱。
对照特征图谱生成：构建的10批次以上的裸花紫珠超高效液相色谱特征图谱，采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件，选择分离度良好、峰面积百分比大于0.5％的共有峰作为指纹峰，生成由42个共有峰构成的裸花紫珠裸花紫珠超高效液相色谱对...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨扬，康兴东，杨义芳，李小锋，邓杰仁，刘胜，章弘扬，刘辉辉，任昭洁，毛金娣，
申请(专利权)人：江西普正制药股份有限公司，上海药辰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江西;36