一种EMSA试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种EMSA试剂盒及其应用，所述试剂盒包括荧光标记探针；所述荧光标记包括Cy2、Cy3、Cy5、Cy5.5、Cy7、Alexa Fluor 488或FITC中的任意一种或至少两种的组合。本发明专利技术采用荧光基团替代放射性P

An EMSA kit and its application

The invention provides an EMSA kit and its application, the kit includes a fluorescent labeling probe, and the fluorescent labeling includes any one or at least two combinations of Cy2, Cy3, Cy5, cy5.5, cy7, Alexa fluor 488 or FITC. The invention adopts fluorescent group to replace radioactive p

【技术实现步骤摘要】
一种EMSA试剂盒及其应用
本专利技术属于生物
，涉及一种EMSA试剂盒及其应用。
技术介绍
电泳迁移率实验(electrophoreticmobilityshiftassay，EMSA)是一种研究DNA结合蛋白与其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析蛋白质与DNA的相互作用。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已推广用于研究RNA结合蛋白与其相关的RNA结合序列的相互作用。EMSA通常将核蛋白与P32同位素或生物素标记的DNA或RNA探针共同孵育，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，DNA-蛋白复合物或RNA-蛋白复合物较非结合的探针的移动速度慢，从而达到分离复合物和未结合的探针的目的。现有技术中，P32同位素由于具有放射性已不常用，常用的生物素标记探针法在电泳过后需要将DNA结合蛋白转移到尼龙膜上，再利用链霉亲和素抗体孵育尼龙膜，使用化学发光法检测DNA结合蛋白的含量。但是，转膜这一步骤十分关键，不能保证将全部DNA结合蛋白转移到尼龙膜上，显著影响了结果的真实性。CN107422022A公开了一本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种EMSA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括荧光标记探针；/n所述荧光标记包括Cy2、Cy3、Cy5、Cy5.5、Cy7、Alexa Fluor 488或FITC中的任意一种或至少两种的组合。/n

【技术特征摘要】
1.一种EMSA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括荧光标记探针；
所述荧光标记包括Cy2、Cy3、Cy5、Cy5.5、Cy7、AlexaFluor488或FITC中的任意一种或至少两种的组合。


2.根据权利要求1所述的EMSA试剂盒，其特征在于，所述荧光标记探针的浓度为10-6～10-7μM。


3.根据权利要求1或2所述的EMSA试剂盒，其特征在于，所述荧光标记探针包括靶向转录因子的探针；
优选地，所述转录因子包括NF-κB、STAT3或NFAT中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述靶向NF-κB的探针包括如SEQIDNO:1所示的核酸分子；
优选地，所述靶向STAT3的探针包括如SEQIDNO:2所示的核酸分子；
优选地，所述靶向NFAT的探针包括如SEQIDNO:3所示的核酸分子。


4.根据权利要求1-3任一项所述的EMSA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括EMSA结合缓冲液、竞争探针、目标蛋白特异抗体或无酶水中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述竞争探针为未标记探针。


5.根据权利要求1-4任一项所述的EMSA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括蛋白提取试剂和/或非特异性DNA结合蛋白结合试剂；
优选地，所述蛋白提取试剂包括细胞裂解液、蛋白酶抑制剂或PMSF中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述非特异性DNA结合蛋白结合试剂包括polydI-dC和/或po...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘合宾，王琰，
申请(专利权)人：西交利物浦大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32