一种抗肿瘤多肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗肿瘤多肽及其应用，其对肿瘤的靶向性、亲和性较高，还可以增加肿瘤对其他治疗方法的敏感度；与阻断抗体相比，免疫原性低，不良反应率低，可通过化学方法合成，制备和纯化过程更为简单，生产效率高；本发明专利技术的多肽具有多种抗肿瘤功效，可对多种不同起源的肿瘤细胞增殖具有较高的抑制率，在有效给药浓度下，对黑色素瘤、胃癌、肝癌的抑制率达到60％以上；在有效给药浓度下，对食道鳞癌、非小细胞肺癌、结肠癌、口腔鳞癌、乳腺癌的抑瘤率可达50％以上。

An antineoplastic peptide and its application

The invention discloses an anti-tumor polypeptide and its application, which has high tumor targeting and affinity, and can also increase the sensitivity of tumor to other treatment methods; compared with blocking antibody, it has low immunogenicity, low adverse reaction rate, can be synthesized by chemical method, the preparation and purification process is simpler, and the production efficiency is higher; the polypeptide of the invention has a variety of anti-tumor effects It can inhibit the proliferation of tumor cells of different origins. Under the effective concentration, the inhibition rate of melanoma, gastric cancer and liver cancer is more than 60%; under the effective concentration, the inhibition rate of esophageal squamous cell carcinoma, non-small cell lung cancer, colon cancer, oral squamous cell carcinoma and breast cancer is more than 50%.

【技术实现步骤摘要】
一种抗肿瘤多肽及其应用
本专利技术涉及多肽药物
，特别涉及一种抗肿瘤多肽及其应用。
技术介绍
多肽是由一种或多种氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物，通常由10～100个氨基酸分子脱水缩合而成，它们的分子量<10000Da。多肽是蛋白质发挥作用的活性基团，是涉及生物体内各种细胞功能的生物活性物质，参与调控各种生理功能，因而在临床应用上具有非常重要的开发价值。活性多肽的来源分为天然活性多肽、基于天然产物的人工修饰多肽以及人工合成的活性多肽。天然多肽的来源十分广泛，可分为动物生物活性多肽和植物多肽。随着科技的发展，天然多肽已经不是唯一的多肽来源，取而代之的是基因重组多肽和化学合成的多肽。生物活性肽的合成方法包括液相合成、固相合成、酶促合成和组合生物合成。液相合成有逐步合成和片段合成2种策略，对于合成较少氨基酸的多肽方便快速，纯度高，且能大量合成。固相合成是将氨基酸的C末端固定在不溶性树脂上，然后依次缩合氨基酸的方法。该方法简化了每一步反应的后处理操作，具有较高产率，缺点是每步中间产物不能纯化，且终产物必须通过可靠的分离手段进行纯化。液相合成和固相合成都属于化学合成，目前开发上市的多肽药物中，90％为化学合成，应用广泛。酶促合成是利用某些特定的酶来催化反应的生物合成方法，反应条件温和、立体专一性强，缺点是存在许多不良反应、酶容易变性失活。组合生物合成是通过对微生物代谢途径中一些酶编码基因进行操作，从而获得新的产物。由于该方法成本昂贵，并且有真核基因表达易形成不恰当折叠及翻译后修饰等问题，从而阻碍了其广泛应用。目前局部癌症虽然可以成功地运用外科手术和放射疗法治疗，但化学疗法仍是常规治疗晚期或转移性肿瘤的首选。由于化疗药物存在选择性低、不良反应大、多药耐药等缺陷，很大程度上限制了其使用。单抗类肿瘤靶向疗法虽然解决了靶向性的问题，但其蛋白分子量大，免疫原性高，易产生过敏及免疫交叉反应，且由于研发成本高，研发难度大，产能有限等原因导致其售价高昂，普通癌症患者很难普及使用，同时单抗类药物存在剂型比较单一，给药方式多为静脉注射或滴注，无法口服等问题，使得药物应用十分不便。受技术条件的制约，多数抗肿瘤肽类药物的半衰期较短，但抗肿瘤多肽具有其独特的优势:与小分子化学药物相比，对目标肿瘤具有更高的亲和力和更强的特异性，并且不良反应低，还可以增加肿瘤对其他治疗方法的敏感度；与抗体相比，由于它们体积微小，因此更容易渗透到组织中；可以化学合成，并且可以运用多种手段进行化学修饰，有助于设计和研究新型活性多肽。新型抗肿瘤活性多肽具有高亲和力、强特异性、低不良反应的特点，此外大多数还具选择性靶向肿瘤细胞的性质，因而在临床应用上具有非常重要的开发价值，作为抗肿瘤化合物具有较好的前景。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题：针对目前单抗类药物和化疗类药物在治疗肿瘤中存在的诸多缺点，本专利技术提供一种抗肿瘤多肽及在制备抗肿瘤药物中的应用。为解决上述技术问题，本专利技术提供以下的技术方案：一种抗肿瘤多肽，包含CCNDEGLEMRIK和GDASLKMDKSDAV两段氨基酸序列，多肽的氨基酸序列为CCNDEGLEMRIK-Linker-GDASLKMDKSDAV；或GDASLKMDKSDAV-Linker-CCNDEGLEMRIK；或GDASLKMDKSDAVCCNDEGLEMRIK。优选地，所述Linker的氨基酸序列为DPTGG或G3S重复1-2遍。优选地，多肽氨基酸序列为(1)CCNDEGLEMRIK-DPTGG-GDASLKMDKSDAV；或(2)GDASLKMDKSDAV-DPTGG-CCNDEGLEMRIK；或(3)CCNDEGLEMRIK-GGGSGGGS-GDASLKMDKSDAV；或(4)GDASLKMDKSDAV-GGGSGGGS-CCNDEGLEMRIK；或(5)CCNDEGLEMRIK-GGGS-GDASLKMDKSDAV；或(6)GDASLKMDKSDAV-GGGS-CCNDEGLEMRIK或(7)GDASLKMDKSDAVCCNDEGLEMRIK。优选地，所述多肽采用Fmoc固相合成法制备，包括如下具体步骤：(1)称取适量Fmoc-Ala(otBu)-Wangresin加入多肽固相合成管并加入DCM，溶胀树脂30min；(2)溶胀后抽干，加入DMF洗涤三次并再次抽干，加入脱帽液；(3)密封后放入摇床中震荡反应20min，抽干后每次加入50mLDMF洗涤5次并抽干；(4)取30g处理好的树脂加入验色剂，在100℃水浴锅中加热1.5min，观察颜色；(5)验色通过后按照多肽的氨基酸序列进行第二个氨基酸的缩合，投料量与树脂的摩尔比为3:1，35℃反应60min后抽干，50mLDMF洗涤5次并抽干；(6)取缩合后的树脂30g加入验色剂，100℃加热90s，树脂无色透明，溶液淡黄色即验色通过；(7)重复步骤(4)～(6)，直至将最后一个氨基酸缩合完成，脱去保护基团Fmoc，50mLDMF洗涤9次后再用50mLDCM及50mL无水甲醇各洗涤三次，抽干，真空干燥即得干燥肽树脂；(8)取1g干燥肽树脂加入10mL切割液，在室温密闭反应2h，砂芯漏斗抽滤，收集滤液；(9)将滤液加入无水乙醚中，滤液与无水乙醚的体积比为1:10，多肽析出后抽滤，收集滤饼，35℃真空干燥4h，得到多肽粗品；(10)采用反相液相色谱对多肽粗品进行纯化，色谱柱采用C18反相硅胶柱。上述的抗肿瘤多肽在制备抗肿瘤药物中的应用。优选地，所述多肽可用于治疗实体瘤，所述实体瘤包括胃癌、食道鳞癌、非小细胞肺癌、结肠癌、肝癌、黑色素瘤、口腔鳞癌、乳腺癌。优选地，所述抗类风湿性关节炎药物包含有效剂量的抗类风湿性关节炎多肽及其他药学上可接受的辅料或载体，所述药物载体包括有机和无机载体，口服和肠道给药途径适合加入有机载体，有机载体包括淀粉、乳糖、氧化钙硬脂酸盐、植物油、有机增溶剂中的一种或多种，所述有机增溶剂包括聚乙二醇、甘油、水溶性的有机和无机碱中的一种或多种，抗类风湿性关节炎药物被制成固体形式或液体形式，这些各种形式的抗类风湿性关节炎药物制备完成后被灭菌。优选地，所述抗肿瘤药物的剂型为片剂、注射剂、喷雾剂、胶囊或包衣药丸，所述注射剂的给药方式为静脉、皮下或肌肉注射。优选地，所述抗肿瘤药物的给药部位包括全身给药和局部给药，全身给药为口服、静脉注射或滴注、皮下注射或肌肉注射，局部给药为肿瘤组织内注射、肿瘤周边组织注射。本专利技术获得的有益效果：(1)本专利技术的多肽可以靶向至肿瘤新生血管，抑制新生血管形成，达到预防或治疗肿瘤的目的；本专利技术的多肽还可以CD47-SIRPα阻断免疫检查点，解除肿瘤细胞对免疫细胞的抑制，抑制免疫逃逸，在抑制血管新生的同时促进自身免疫系统对肿瘤的攻击，达到预防或治疗肿瘤的目的；(2)本专利技术的多肽对肿瘤的靶向性、亲和性较高，还可以增加肿瘤对其他治疗方法的敏感度；与阻断抗体相本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗肿瘤多肽，其特征在于：包含CCNDEGLEMRIK和GDASLKMDK SDAV两段氨基酸序列，多肽的氨基酸序列为CCNDEGLEMRIK-Linker-GDASL KMDKSDAV；或GDASLKMDKSDAV-Linker-CCNDEGLEMRIK；或GDASLK MDKSDAVCCNDEGLEMRIK。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗肿瘤多肽，其特征在于：包含CCNDEGLEMRIK和GDASLKMDKSDAV两段氨基酸序列，多肽的氨基酸序列为CCNDEGLEMRIK-Linker-GDASLKMDKSDAV；或GDASLKMDKSDAV-Linker-CCNDEGLEMRIK；或GDASLKMDKSDAVCCNDEGLEMRIK。


2.根据权利要求1中所述的一种抗肿瘤多肽，其特征在于：所述Linker的氨基酸序列为DPTGG或G3S重复1-2遍。


3.根据权利要求2中所述的一种抗肿瘤多肽，其特征在于：其氨基酸序列为(1)CCNDEGLEMRIK-DPTGG-GDASLKMDKSDAV；或(2)GDASLKMDKSDAV-DPTGG-CCNDEGLEMRIK；或(3)CCNDEGLEMRIK-GGGSGGGS-GDASLKMDKSDAV；或(4)GDASLKMDKSDAV-GGGSGGGS-CCNDEGLEMRIK；或(5)CCNDEGLEMRIK-GGGS-GDASLKMDKSDAV；或(6)GDASLKMDKSDAV-GGGS-CCNDEGLEMRIK或(7)GDASLKMDKSDAVCCNDEGLEMRIK。


4.一种权利要求1中所述的抗肿瘤多肽的合成方法，其特征在于：所述多肽采用Fmoc固相合成法合成，包括如下具体步骤：
(1)称取适量Fmoc-Ala(otBu)-Wangresin加入多肽固相合成管并加入DCM，溶胀树脂30min；
(2)溶胀后抽干，加入DMF洗涤三次并再次抽干，加入脱帽液；
(3)密封后放入摇床中震荡反应20min，抽干后每次加入50mLDMF洗涤5次并抽干；
(4)取30g处理好的树脂加入验色剂，在100℃水浴锅中加热1.5min，观察颜色；
(5)验色通过后按照多肽的氨基酸序列进行第二个氨基酸的缩合，投料量与树脂的摩尔比为3:1，35℃反应60min后抽干，50mLDMF洗涤5次并抽干；
(...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙冬梅，孙有俊，范彩云，鲍芳丽，
申请(专利权)人：南京萌萌菌业有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32