乳双歧杆菌nbk-W13及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种乳双歧杆菌nbk‑W13及其应用。本发明专利技术提供的乳双歧杆菌nbk‑W13具有较强的耐酸耐胆盐特性，且显著增强免疫力的功效。研究其在小鼠肠粘膜免疫中所起的作用，发现当免疫低下模型小鼠和正常小鼠口服该乳双歧杆菌14天后，其特异性细胞免疫功能、特异性体液免疫功能、非特异性免疫功能均得到有效提升。除此之外，乳双歧杆菌nbk‑W13的灭活菌体也有增强免疫力的作用。实验表明，乳双歧杆菌nbk‑W13冻干粉及其灭活菌粉均可通过调节小鼠免疫脏器系数，血清细胞因子浓度，抗体浓度以及肠道抗氧化能力等达到增强免疫力的作用。

Bifidobacterium lactis nbk-w13 and its application

The invention provides a Bifidobacterium lactis NBK \u2011 w13 and an application thereof. The Bifidobacterium lactis nbk-w13 provided by the invention has strong acid resistance and bile salt resistance characteristics, and has the effect of significantly enhancing immunity. It was found that the specific cellular immune function, specific humoral immune function and non-specific immune function of Bifidobacterium lactis were effectively improved in immunocompromised mice and normal mice after 14 days of oral administration. In addition, the inactivated bacteria of B. lactis NBK \u2011 w13 can also enhance immunity. The results showed that NBK \u2011 w13 freeze-dried powder and its inactivated powder could enhance immunity by regulating immune organ coefficient, serum cytokine concentration, antibody concentration and intestinal antioxidant capacity.

【技术实现步骤摘要】
乳双歧杆菌nbk-W13及其应用
本专利技术涉及一种微生物及其应用，具体地说，涉及一种乳双歧杆菌nbk-W13及其应用。
技术介绍
乳双歧杆菌是人体肠道内的有益菌，具有调节肠道菌群，防治肠道疾病，增强机体免疫力等多种功能。目前市面上常见的乳双歧杆菌产品普遍存在，当活菌数不足时，不能充分发挥产品功效，且乳双歧杆菌存在稳定性不好，活菌数衰减较快等缺陷，因此，亟需开发具有多功效的乳双歧杆菌新菌株。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种具有增强肠粘膜免疫反应作用的乳双歧杆菌nbk-W13及其应用。为了实现本专利技术目的，第一方面，本专利技术提供一种乳双歧杆菌(Bifidobacteriumlactis)nbk-W13，菌株nbk-W13分离自中国健康婴儿的粪便，该乳双歧杆菌具有较强的耐酸耐胆盐特性，且显著增强免疫力的功效。乳双歧杆菌(Bifidobacteriumlactis)nbk-W13现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号CGMCCNo.17829，保藏日期2019年5月20日。第二方面，本专利技术提供含有所述乳双歧杆菌nbk-W13的微生物菌剂。第三方面，本专利技术提供乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉的制备方法，包括以下步骤：1)种子液的制备；2)扩大培养；3)高密度发酵培养；4)发酵液离心取沉淀，得到菌泥；5)将菌泥与冻干保护剂混合后进行乳化包埋，得到乳化液；6)乳化液经冷冻干燥，粉碎，即得乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉。前述的方法，步骤1)和2)中所用种子培养基为：按质量百分数计，1～3％乳糖、1～3％蛋白胨、0.5～3％酵母浸膏、0.2～1％无水乙酸钠、0.2～1％柠檬酸铵、0.02～0.08％硫酸镁、0.02～0.08％硫酸锰、0.05％～0.1％L-半胱氨酸盐酸盐、0.05～0.1％吐温80和余量的水，pH值6.2～6.8。优选地，所用种子培养基为：1.5～2.5％乳糖、1.5～2.5％蛋白胨、1～2％酵母浸膏、0.4～0.6％无水乙酸钠、0.4～0.6％柠檬酸铵、0.04～0.06％硫酸镁、0.04～0.06％硫酸锰、0.06％～0.08％L-半胱氨酸盐酸盐、0.06～0.08％吐温80和余量的水。步骤3)中所用发酵培养基为：按质量百分数计，1～3％乳糖、1～3％蛋白胨、0.5～3％酵母浸膏、0.2～1％无水乙酸钠、0.2～1％柠檬酸铵、0.02～0.08％硫酸镁、0.02～0.08％硫酸锰、0.05％～0.1％L-半胱氨酸盐酸盐、0.05～0.1％吐温80和余量的水，pH值6.2～7.0。优选地，所用发酵培养基为：1.5～2.5％乳糖、1.5～2.5％蛋白胨、1～2％酵母浸膏、0.4～0.6％无水乙酸钠、0.4～0.6％柠檬酸铵、0.04～0.06％硫酸镁、0.04～0.06％硫酸锰、0.06％～0.08％L-半胱氨酸盐酸盐、0.06～0.08％吐温80和余量的水。前述的方法，步骤1)种子液的制备方法为：从斜面挑取一环菌种，接种于装有种子培养基的试管中，于30-40℃静置培养12-24h，即得种子液。优选培养条件为：35～40℃静置培养12-20h(优选37℃静置培养16h)。本专利技术中，所述静置培养是指厌氧培养(严格厌氧)。前述的方法，步骤2)扩大培养的具体方法为：将步骤1)所得种子液按2-8％v/v的接种量转接至装有种子培养基的三角瓶中，装液量50-100mL/250mL，于28-40℃静置培养8～24h，得到培养液。优选培养条件为：32-37℃培养15-18h。前述的方法，步骤3)高密度发酵培养的具体方法为：将步骤2)所得培养液按4-10％v/v的接种量转接至装有发酵培养基的发酵罐中，装液量5-7L/10L，于30-42℃静置培养8-16h，得到发酵液。优选培养条件为：30-40℃静置培养10-15h。前述的方法，步骤4)离心条件为：4000-8000rpm离心10-30min。前述的方法，步骤5)具体为：步骤5)具体为：将菌泥与脱脂乳(即脱脂乳粉)、甘油和水按8-12：5-15：1-3：70-85(优选10:10:3:77)的重量比混合，在20-30℃条件下乳化20-40min，得到乳化液。前述的方法，步骤6)冷冻干燥的具体方法为：将乳化液在-40--30℃下预冻1-3h，然后进行真空冷冻干燥，冷冻温度为-40-37℃，真空度为0.1-0.35MPa。优选地，将乳化液在-40--35℃下预冻1.5-2.5h(优选-38℃下预冻2h)，然后进行真空冷冻干燥，冷冻温度为-35℃～25℃，真空度为0.2MPa。第四方面，本专利技术提供按照上述方法制备的乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉，其中，所述冻干粉中活菌数为2000～6000亿CFU/g。第五方面，本专利技术提供所述乳双歧杆菌nbk-W13的灭活菌粉，其制备方法包括：1)种子液的制备；2)扩大培养；3)高密度发酵培养；4)发酵液离心收集菌体；5)菌体于120-140℃喷雾干燥；干燥后将其粉碎至40目，得到乳双歧杆菌nbk-W13灭活菌粉。其中，步骤1)～4)与制备乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉的方法中步骤1)～4)相同。第六方面，本专利技术提供所述的乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉或乳双歧杆菌nbk-W13的灭活菌粉在食品、药品或保健品领域中的应用。本专利技术提供的乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉和/或灭活菌粉在制备的增强免疫力的食品、药品或保健品中可以作为活性成分，也可以作为辅料、添加剂，起到增强免疫力的作用。第七方面，本专利技术提供一种复合益生菌发酵乳的制备方法，生牛乳经灭菌后，向其中加入生牛乳质量百分比5-10％的白砂糖，然后按保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、乳双歧杆菌nbk-W130.5-3:1-4:0.8-4的比例接入发酵菌种，总接种量为106-107CFU/mL，搅拌条件下，于30-42℃恒温发酵4-8h(最终发酵体系的pH＝4.5)，即得复合益生菌发酵乳。优选地，生牛乳经灭菌后，向其中加入生牛乳质量百分比8％的白砂糖，然后按保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、所述乳双歧杆菌nbk-W131-2:2-3:1-2.5(优选1:2:1)的比例接入发酵菌种，总接种量为0.5×107-1×107CFU/mL(优选1×107CFU/mL)，搅拌条件下，于37℃恒温发酵4-6h(优选6h)，即得复合益生菌发酵乳。第八方面，本专利技术提供一种乳双歧杆菌固体饮料，包括如下重量份的各组分：所述乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉1-4份，低聚果糖8-15份，低聚木糖8-15份、赤藓糖醇30-40份和抗性糊精35-45份。优选地，所述乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉2-3份，低聚果糖8-12份，低聚木糖10-12份、赤藓糖醇32-36份和抗性糊精36-42份。更优选地，所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)nbk-W13，其特征在于，保藏编号为CGMCCNo.17829。/n

【技术特征摘要】
1.乳双歧杆菌(Bifidobacteriumlactis)nbk-W13，其特征在于，保藏编号为CGMCCNo.17829。


2.乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)种子液的制备；
2)扩大培养；
3)高密度发酵培养；
4)发酵液离心取沉淀，得到菌泥；
5)将菌泥与冻干保护剂混合后进行乳化包埋，得到乳化液；
6)乳化液经冷冻干燥，粉碎，即得乳双歧杆菌nbk-W13冻干粉。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1)和2)中所用种子培养基为：按质量百分数计，1～3％乳糖、1～3％蛋白胨、0.5～3％酵母浸膏、0.2～1％无水乙酸钠、0.2～1％柠檬酸铵、0.02～0.08％硫酸镁、0.02～0.08％硫酸锰、0.05％～0.1％L-半胱氨酸盐酸盐、0.05～0.1％吐温80和余量的水，pH值6.2～6.8；优选地，所用种子培养基为：1.5～2.5％乳糖、1.5～2.5％蛋白胨、1～2％酵母浸膏、0.4～0.6％无水乙酸钠、0.4～0.6％柠檬酸铵、0.04～0.06％硫酸镁、0.04～0.06％硫酸锰、0.06％～0.08％L-半胱氨酸盐酸盐、0.06～0.08％吐温80和余量的水；和/或
步骤3)中所用发酵培养基为：按质量百分数计，1～3％乳糖、1～3％蛋白胨、0.5～3％酵母浸膏、0.2～1％无水乙酸钠、0.2～1％柠檬酸铵、0.02～0.08％硫酸镁、0.02～0.08％硫酸锰、0.05％～0.1％L-半胱氨酸盐酸盐、0.05～0.1％吐温80和余量的水，pH值6.2～7.0；优选地，所用发酵培养基为：1.5～2.5％乳糖、1.5～2.5％蛋白胨、1～2％酵母浸膏、0.4～0.6％无水乙酸钠、0.4～0.6％柠檬酸铵、0.04～0.06％硫酸镁、0.04～0.06％硫酸锰、0.06％～0.08％L-半胱氨酸盐酸盐、0.06～0.08％吐温80和余量的水。


4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1)种子液的制备方法为：从斜面挑取一环菌种，接种于装有种子培养基的试管中，于30-40℃静置培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：张阳，何慧玲，潘芬，湛剑龙，杨帆，
申请(专利权)人：诺佰克武汉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42