产蛋白酶的河豚毒素假交替单胞菌及其应用制造技术

本发明专利技术提供了产蛋白酶的河豚毒素假交替单胞菌及其应用，具体地，本发明专利技术自藤壶附生菌出筛选出了一株河豚毒素假交替单胞菌(Pseudoalteromonas tetraodonis)X‑8，其具有较高的蛋白酶生产能力，并且该X‑8菌株所产蛋白酶具有较宽的pH适应范围和极佳的温度稳定性，在pH8.0至pH10.5的条件下能够保持85％以上的酶活；在55℃条件下保存1h仍然具有87.6％的酶活力。特别是在温度稳定性方面，显著优于其它蛋白酶。

Proteases producing pseudoalternaria tetrodotoxin and its application

The invention provides a tetrodotoxin pseudoalternator producing protease and its application, in particular, a tetrodotoxin pseudoalternator (pseudoalternator) x \u2011 8 is screened out from epiphyte barnacle of the invention, which has high protease production capacity, and the protease produced by the X \u2011 8 strain has a wide pH adaptation range and excellent temperature stability, and is in pH8 From 0.0 to ph10.5, more than 85% of the enzyme activity can be maintained, and 87.6% of the enzyme activity can still be maintained at 55 \u2103 for 1 hour. Especially in temperature stability, it is better than other protease.

【技术实现步骤摘要】
产蛋白酶的河豚毒素假交替单胞菌及其应用
本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术涉及一株产蛋白酶的河豚毒素假交替单胞菌及其应用。
技术介绍
蛋白酶是水解蛋白质的酶类，被广泛应用于生态环境治理等领域。蛋白酶包括植物、动物和微生物蛋白酶，而其中，由于微生物生长的高效率，微生物蛋白酶易大规模发酵生产，因此微生物蛋白酶越来越成为主要制备来源。蛋白酶占酶制剂市场份额的65％以上，其中微生物产蛋白酶占据世界工业酶总量的约40％。蛋白酶主要用于加酶洗涤剂，另外还可以应用于食品、医疗、制革、丝绸等行业。由于蛋白酶的广泛用途以及产酶效率不高等原因,我国的蛋白酶主要依赖进口。我国是一个海洋大国，海洋面积广阔，资源丰富。海洋微生物是海洋中生物资源的重要组成部分，种类可达2～10亿种，但人们所开发利用的还不足其中的1％。我国海洋微生物资源的探索、研究和利用正逐步追赶发达国家。因此，探索并利用海洋来源的产蛋白酶微生物具有极高的研究、应用以及商业价值。本领域技术人员致力于开发新型的蛋白酶生产菌株及蛋白酶，一方面希望提高蛋白酶的生产效率，另一方面期望获得具有不同特性的蛋白酶以满足不同应用领域的需求。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株产蛋白酶的河豚毒素假交替单胞菌(Pseudoalteromonastetraodonis)及其应用。在本专利技术的第一方面，提供了一种产蛋白酶的微生物菌株，所述微生物菌株为：菌株1：河豚毒素假交替单胞菌(Pseudoalteromonastetraodonis)X-8，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCCNo.17512；或菌株2：所述菌株2为菌株1的衍生菌株，比如，菌株1经基因突变或基因工程改造获得的菌株。本专利技术的第二方面，提供了一种蛋白酶，所述蛋白酶由河豚毒素假交替单胞菌(Pseudoalteromonastetraodonis)发酵制得。在另一优选例中，所述蛋白酶由本专利技术第一方面所述的微生物菌株发酵制得。本专利技术的第三方面，提供了一种制备蛋白酶的方法，所述方法包括步骤：(1)发酵本专利技术第一方面所述的微生物菌株；(2)从发酵液中分离获得蛋白酶。在另一优选例中，所述步骤(1)中，发酵使用的碳源为可溶性淀粉、蔗糖、或麦芽糖。在另一优选例中，所述步骤(1)中，发酵温度15-30℃，优选为约25℃。在另一优选例中，所述步骤(1)中，发酵起始pH为6.0-7.0；优选为约6.5。在另一优选例中，所述步骤(1)中，发酵盐度为5‰-15‰(w/w)；优选为约10‰(w/w)。本专利技术的第四方面，提供了一种生物酶制剂，所述生物酶制剂包括本专利技术第二方面所述的蛋白酶。在另一优选例中，所述生物酶制剂还包括选自下组的一种或多种生物酶：木聚糖酶、果胶酶、脂肪酶、纤维素酶、和酯酶。在另一优选例中，所述生物酶制剂为固体颗粒。在另一优选例中，所述生物酶制剂为液体制剂。本专利技术第五方面，提供了河豚毒素假交替单胞菌(Pseudoalteromonastetraodonis)在制备蛋白酶中的应用。在另一优选例中，所述河豚毒素假交替单胞菌(Pseudoalteromonastetraodonis)为本专利技术第一方面所述的微生物菌株。应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附图说明图1：X-8菌株酪蛋白酶培养基上筛选透明圈。图2：菌株电镜照片。图3：河豚毒素假交替单胞菌X-8生长曲线。图4：碳源对河豚毒素假交替单胞菌X-8生长的影响。图5：培养基初始pH值对河豚毒素假交替单胞菌X-8生长的影响。图6：培养基盐度对河豚毒素假交替单胞菌X-8生长的影响。图7：培养温度对河豚毒素假交替单胞菌X-8生长的影响。图8：酪氨酸标准曲线。具体实施方式本专利技术人通过广泛而深入的研究，以一株来自藤壶附生菌的河豚毒素假交替单胞菌(Pseudoalteromonastetraodonis)X-8，其具有较高的蛋白酶生产能力，并且该X-8菌株所产蛋白酶具有较宽的pH适应范围和极佳的温度稳定性，在pH8.0至pH10.5的条件下能够保持85％以上的酶活；在55℃条件下保存1h仍然具有87.6％的酶活力。特别是在温度稳定性方面，显著优于其它蛋白酶。在描述本专利技术之前，应当理解本专利技术不限于所述的具体方法和实验条件，因为这类方法和条件可以变动。还应当理解本文所用的术语其目的仅在于描述具体实施方案，并且不意图是限制性的，本专利技术的范围将仅由所附的权利要求书限制。除非另外定义，否则本文中所用的全部技术与科学术语均具有如本专利技术所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。如本文所用，在提到具体列举的数值中使用时，术语“约”意指该值可以从列举的值变动不多于1％。例如，如本文所用，表述“约100”包括99和101和之间的全部值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。虽然在本专利技术的实施或测试中可以使用与本专利技术中所述相似或等价的任何方法和材料，本文在此处例举优选的方法和材料。如本文所用，术语“本专利技术菌株”指保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCCNo.17512的菌株或由该菌株得到的衍生菌株，其中包括经传代培养得到的菌株。藤壶(Balanus)，是附着在海边岩石上的簇状灰色、硬质外壳的滤食性节肢动物。主要捕食浮游动物中的桡脚类及蔓足类的幼体。其食物来源中含大量蛋白类物质，因此，本专利技术人猜想藤壶附生菌中存在产蛋白酶菌株，以帮助其消化、利用食物。本专利技术菌株是如下获得的：(a)自山东沿海污染海域的纹藤壶分离附生菌；(b)对分离获得的附生菌菌株进行筛选，成功地筛选到一株蛋白酶活性优异的菌株，即本专利技术的河豚毒素假交替单胞菌(Pseudoalteromonastetraodonis)X-8。菌种保藏本专利技术的上述菌种已于2019年4月2日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(ChinaGeneralMicrobiologicalCultureCollectionCenter，CGMCC)，地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,保藏编号为CGMCCNo.17512，名称为：河豚毒素假交替单胞菌(Pseudoalteromonastetraodonis)X-8。本专利技术的主要优点在于：(1)河豚毒素假交替单胞菌(Pseudoalteromonastetraodonis)X-8具有较高的蛋白酶生产能力，在初步优化的发酵条件下，X-8菌株产蛋白酶酶活力能够达到707.06U/mL；(2)X-8菌株产蛋白酶具本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产蛋白酶的微生物菌株，其特征在于，所述微生物菌株为：/n菌株1：河豚毒素假交替单胞菌(Pseudoalteromonas tetraodonis)X-8，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.17512；或/n菌株2：所述菌株2为菌株1的衍生菌株，比如，菌株1经基因突变或基因工程改造获得的菌株。/n

【技术特征摘要】
1.一种产蛋白酶的微生物菌株，其特征在于，所述微生物菌株为：
菌株1：河豚毒素假交替单胞菌(Pseudoalteromonastetraodonis)X-8，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCCNo.17512；或
菌株2：所述菌株2为菌株1的衍生菌株，比如，菌株1经基因突变或基因工程改造获得的菌株。


2.一种蛋白酶，其特征在于，所述蛋白酶由河豚毒素假交替单胞菌(Pseudoalteromonastetraodonis)发酵制得。


3.如权利要求2所述的蛋白酶，其特征在于，所述蛋白酶由权利要求1所述的微生物菌株发酵制得。


4.一种制备蛋白酶的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：
(1)发酵权利要求1所述的微生物菌株；
(2)从发酵液中分离获得蛋白酶。


5.如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：冉晓勇，许敏，刘东晓，
申请(专利权)人：威海银河生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37