一种解淀粉芽孢杆菌悬浮剂及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种解淀粉芽孢杆菌悬浮剂及其制备方法，涉及微生物农药技术领域。每克悬浮剂含有解淀粉芽孢杆菌1×10

A suspension of Bacillus amylolyticus and its preparation

The invention provides a suspension agent of Bacillus amylolyticus and a preparation method thereof, which relates to the technical field of microbial pesticide. Each gram of suspension contains 1 \u00d7 10 Bacillus amylolyticus

【技术实现步骤摘要】
一种解淀粉芽孢杆菌悬浮剂及其制备方法
本专利技术涉及微生物农药
，具体涉及一种解淀粉芽孢杆菌悬浮剂及其制备方法。
技术介绍
解淀粉芽孢杆菌K-8能够同时抑制多种作物病原菌，如番茄青枯病病原菌、黄瓜角斑病病原菌、猕猴桃溃疡病病原菌、大白菜软腐病病原菌等细菌性病害以及西瓜枯萎病病原菌、水稻纹枯病病原菌和苹果腐烂病病原菌等真菌性病害。现有技术中解淀粉芽孢杆菌K-8公开了固态菌剂，制备过程包括将菌体悬浮液和载体混合、喷雾干燥。虽然粉剂使用方便且制备成本较低，但由于其容易飘移导致环境污染。悬浮剂，是在助剂(润湿分散剂、增稠剂、结构调节剂和消泡剂等)作用下，将不溶于水或难溶于水的原药分散到水中形均匀稳定的分散体系，避免了对环境的污染。但是，水悬液剂贮藏稳定性差一直是困扰生产的一大难题。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种解淀粉芽孢杆菌悬浮剂，具有良好的防效，且在室温下稳定性好。本专利技术的目的采用如下技术方案实现。一种解淀粉芽孢杆菌悬浮剂，每克悬浮剂含有解淀粉芽孢杆菌1×108～1×1010cfu，所述悬浮剂按照重量百分含量还含有如下成分：亚甲基双萘磺酸钠1.2％～1.6％、吐温801.8％～2.3％、OP-101.5％～2.1％、羧甲基纤维素钠0.01％～0.03％、对羟基苯甲酸甲酯0.015％～0.025％、苯甲酸钠0.12％～0.18％、正辛醇0.2％～0.4％、甘油5％～7％、黄原胶0.22％～0.28％，余量为水。优选的技术方案中，每克悬浮剂含有解淀粉芽孢杆菌1×109，所述悬浮剂按照重量百分含量还含有如下成分：NNO1.4％、吐温802.1％、OP-101.8％、对羟基苯甲酸甲酯0.02％、羧甲基纤维素钠0.02％、苯甲酸钠0.15％、正辛醇0.3％、甘油6％、黄原胶0.25％，余量为水。优选的技术方案中，所述解淀粉芽孢杆菌是采用如下方法制备的：将解淀粉芽孢杆菌接种发酵培养基培养，获得发酵液；将发酵液离心取沉淀。优选的技术方案中，所述发酵培养基含有：葡萄糖5～10g/L，糖蜜10～30g/L，蚕蛹粉5～10g/L，玉米浆5～20g/L，氯化钠10～20g/L，碳酸钙1～10g/L，硫酸镁0.1～1g/L，硫酸锰0.01～0.1g/L，氯化亚铁0.02～0.08g/L，pH7.0～7.5；采用发酵培养基培养解淀粉芽孢杆菌K-8过程中通气量和温度控制如下：0h～8h：气液比为(0.4～0.6):1，温度25℃～28℃；8h～24h：气液比为(0.9～1.1):1，温度28℃～30℃；24h以后：气液比为(0.7～0.9):1，温度30℃～32℃。本专利技术还提供所述解淀粉芽孢杆菌悬浮剂的制备方法，包括如下步骤：将解淀粉芽孢杆菌、NNO、吐温80、OP-10、羧甲基纤维素钠、对羟基苯甲酸甲酯、苯甲酸钠、正辛醇、甘油、黄原胶和水混合均匀，均质乳化，得到解淀粉芽孢杆菌悬浮剂。本专利技术解淀粉芽孢杆菌悬浮剂，具有良好的防效，且在室温下稳定性好，放置12个月，活菌数几乎不变。具体实施方式解淀粉芽孢杆菌(bacillusamyloliquefaciens)K-8公开于专利号为ZL2013100706246，保藏号为CGMCCNO.6486，缩写为解淀粉芽孢杆菌K-8。实施例1制备解淀粉芽孢杆菌悬浮剂(1)制备解淀粉芽孢杆菌解淀粉芽孢杆菌K-8的活化：从解淀粉芽孢杆菌K-8的冷冻干燥管中，用无菌接种针挑取部分菌粉至LB摇瓶中(250mL摇瓶，LB液体培养基装液量50ml)，在30℃、150r/min下培养24h后，LB培养基变浑浊。取菌液至LB固体培养基中划线培养30h。一级种子液的制备：挑取LB固体培养基上的单菌落接种于一级种子摇瓶中，摇瓶体积为250mL，LB液态培养基的装液量50ml。将一级种子摇瓶在30℃、150r/min下培养24h，得到一级种子液。二级种子液的制备：种子罐中的培养基配方(g/L)为：葡萄糖25、蔗糖25、蛋白粉10、酵母粉15、磷酸二氢钾0.5、硫酸锰0.05，溶剂为水。将一级种子液接入二级种子罐中，接种量为3％(V/V)，培养条件为：通气比1：1，搅拌转速为200r/min，培养温度30℃，罐压0.01MPa，培养时间为20h。培养结束时得到二级种子液，其活菌含量为1.8×108cfu/mL。发酵培养：将解淀粉芽孢杆菌K-8的二级种子液，按照接种量为2％(V/V)接入发酵罐中培养。发酵罐中的培养基及培养条件分别如下。培养基：葡萄糖5g/L、糖蜜20g/L，蚕蛹粉5g/L、玉米浆15g/L，氯化钠15g/L，碳酸钙5g/L，硫酸镁0.5g/L，硫酸锰0.05g/L，氯化亚铁0.04g/L，pH7.3。培养条件：罐压0.01MPa；0h-8h：气液比为0.5:1，温度28℃；8h-24h：气液比为1:1，温度30℃；24h以后：气液比为0.8:1，温度32℃。搅拌转速：150r/min。发酵时间28h时，镜检，芽孢率达到97％，此时的活菌含量为6.9×109cfu/mL。因此，在发酵28h收获发酵液，离心，取沉淀，即得到解淀粉芽孢杆菌K-8，用于配制解淀粉芽孢杆菌悬浮剂。(2)配制解淀粉芽孢杆菌悬浮剂A解淀粉芽孢杆菌悬浮剂A，每克悬浮剂A含有解淀粉芽孢杆菌1*109cfu，悬浮剂A按照重量百分含量还含有如下成分：NNO(亚甲基双萘磺酸钠)1.4％、吐温802.1％、OP-10(烷基酚聚氧乙烯醚)1.8％、羧甲基纤维素钠0.02％、对羟基苯甲酸甲酯0.02％、苯甲酸钠0.15％、正辛醇0.3％、甘油6％、黄原胶0.25％，余量为水。解淀粉芽孢杆菌悬浮剂A的制备方法如下：：将解淀粉芽孢杆菌、NNO、吐温80、OP-10、羧甲基纤维素钠、对羟基苯甲酸甲酯、苯甲酸钠、正辛醇0.3％、甘油6％、黄原胶和水混合均匀，均质乳化，得到解淀粉芽孢杆菌悬浮剂。对解淀粉芽孢杆菌悬浮剂A进行下列检测。按照农药悬浮率测定方法GB/T14825-2006测定悬浮剂的悬浮率。按照GB/T1601-1993检测pH。按照农药悬浮剂产品标准规范倾倒性测定方法HG/2467.5-2003测定。采用平板菌落计数法检测活菌数。冷贮稳定性测定方法参照GB/T19137-2003，热贮稳定性测定方法参照GB/T19136-2003表1解淀粉芽孢杆菌悬浮剂A的稳定性状态活菌数悬浮率pH热贮前1*109cfu/g97.8％7.8热贮后0.98*109cfu/g94.5％7.7冷贮前1*109cfu/g97.8％7.8冷贮后0.99*109cfu/g97.2％7.8注：表1中热贮前、冷贮前均是指悬浮剂刚配制好的时候。从表1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种解淀粉芽孢杆菌悬浮剂，其特征在于每克悬浮剂含有解淀粉芽孢杆菌1×10

【技术特征摘要】
1.一种解淀粉芽孢杆菌悬浮剂，其特征在于每克悬浮剂含有解淀粉芽孢杆菌1×108～1×1010cfu，所述悬浮剂按照重量百分含量还含有如下成分：亚甲基双萘磺酸钠1.2%～1.6%、吐温801.8%～2.3%、OP-101.5%～2.1%、羧甲基纤维素钠0.01%～0.03%、对羟基苯甲酸甲酯0.015%～0.025%、苯甲酸钠0.12%～0.18%、正辛醇0.2%～0.4%、甘油5%～7%、黄原胶0.22%～0.28%，余量为水。


2.根据权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌悬浮剂，其特征在于每克悬浮剂含有解淀粉芽孢杆菌1×109，所述悬浮剂按照重量百分含量还含有如下成分：NNO1.4%、吐温802.1%、OP-101.8%、对羟基苯甲酸甲酯0.02%、羧甲基纤维素钠0.02%、苯甲酸钠0.15%、正辛醇0.3%、甘油6%、黄原胶0.25%，余量为水。


3.根据权利要求1或2所述解淀粉芽孢杆菌悬浮剂，其特征在于所述解淀粉芽孢杆菌是采用如下方法制备的：将解淀粉芽孢杆菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：李燕，赵福兵，孙海勇，
申请(专利权)人：江苏苏滨生物农化有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32