单细胞分析制造技术

本发明专利技术涉及用于从单细胞中条形码化核酸的方法和用于对具有感兴趣表型的单细胞进行基因分型的方法。

Single cell analysis

The invention relates to a method for barcoding nucleic acids from a single cell and a method for genotyping a single cell with a phenotype of interest.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】单细胞分析
本专利技术涉及用于从单细胞中条形码化(barcoding)核酸的方法以及用于对具有感兴趣表型的单细胞进行基因分型的方法。
技术介绍
用于分析群中单细胞的多个参数的方法在各种情况下都是令人感兴趣的。特别是，商业和学术实验室广泛关注在细胞群内基于单细胞分析核酸(任选地与一种或多种其他参数组合)的能力。而且，这种分析通常需要实时进行，以揭示生物学和生物化学过程的动态行为。因而，需要能够以高度并行的方式分离、检测和定量异质混合物的个体组分的技术来满足这些挑战。已开发了常规的高通量平台，例如具有机器人分配系统的高密度微孔板，并将其广泛用于高通量分析，如药物筛选。然而，其需要昂贵且笨重的机器人机器并且需要对样品进行蒸发和相当大的反应体积，这会浪费宝贵的生物样品或试剂。最近，微制造装置(microfabricateddevice)已经成为用于以高通量方式进行各种生物学和化学测定的强大实验平台。这些技术通常允许通过将大量溶液分配到很多分离的皮升至纳升大小的隔室或微反应器中来对复杂样品进行高通量分析。然而，对个体样品进行分析后恢复(retrieval)是难以实现的。此外，在这些装置中混合试本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于对具有感兴趣表型的单细胞进行基因分型的方法，所述方法包括：‑提供多个储库，和a)对于多个储库，针对各个储库提供至少一种条形码序列和至少一种染料，其中所述至少一种条形码序列与所述至少一种染料的颜色和浓度相关，并获取阵列的图像，从而为各个储库映射所述至少一种染料的所述颜色和强度；和b)对于多个储库，针对各个储库提供至少一个单细胞并针对各个储库在所述至少一个单细胞上进行表型测定，并获取图像，从而为各个储库映射所述至少一个单细胞的所述表型；其中步骤a)在步骤b)之前进行或者步骤b)在步骤a)之前进行；然后c)对于多个储库，针对各个储库将在步骤b)中获得的所述单细胞的表型与在步骤a)中获得的...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2017.03.17 EP 17305297.81.一种用于对具有感兴趣表型的单细胞进行基因分型的方法，所述方法包括：-提供多个储库，和a)对于多个储库，针对各个储库提供至少一种条形码序列和至少一种染料，其中所述至少一种条形码序列与所述至少一种染料的颜色和浓度相关，并获取阵列的图像，从而为各个储库映射所述至少一种染料的所述颜色和强度；和b)对于多个储库，针对各个储库提供至少一个单细胞并针对各个储库在所述至少一个单细胞上进行表型测定，并获取图像，从而为各个储库映射所述至少一个单细胞的所述表型；其中步骤a)在步骤b)之前进行或者步骤b)在步骤a)之前进行；然后c)对于多个储库，针对各个储库将在步骤b)中获得的所述单细胞的表型与在步骤a)中获得的所述至少一种染料的所述颜色和所述强度联系起来；和-对于多个储库，针对各个储库将所述至少一个单细胞的核酸逆转录以获得用所述至少一种条形码序列条形码化的单细胞cDNA，所述至少一种条形码序列与所述至少一种染料的所述颜色和浓度相关；和-将所述基因型与所述至少一个单细胞的所述表型联系起来。2.根据权利要求1所述的微流体方法，其中所述方法还包括选自以下的至少一个步骤：-至少一个清除步骤，-对于多个储库，针对各个储库提供至少一种寡核苷酸，其中所述至少一种寡核苷酸包含引物序列，-对于多个储库，针对各个储库将所述至少一种条形码序列附接至所述至少一种寡核苷酸，-对于多个储库，针对各个储库提供裂解组合物，-对于多个储库，针对各个储库裂解所述至少一个单细胞，-对于多个储库，针对各个储库提供逆转录酶和逆转录酶组合物，-对于多个储库，针对各个储库将所述单细胞核酸的至少一些与至少一种条形码化的寡核苷酸杂交，-回收所述条形码化的单细胞cDNA，-从所述条形码化的cDNA中除去未掺入的寡核苷酸，-扩增所述条形码化的单细胞cDNA，-对所述条形码化的单细胞cDNA进行测序。3.根据权利要求1或2所述的微流体方法，其中所述方法是包括提供微粒体装置的步骤的微流体方法，所述微流体装置包含芯片，所述芯片包含至少一个微流体通道和多个储库。4.根据权利要求3所述的微流体方法，其中，针对各个储库，在单细胞液滴中提供所述至少一个单细胞。5.根据权利要求3或4所述的微流体方法，其中，针对各个储库，在RT液滴中提供所述逆转录酶、所述逆转录酶组合物和所述至少一种寡核苷酸。6.根据权利要求1至5中任一项所述的微流体方法，其中，对于多个储库，将所述至少一种条形码序列连接在所述多个储库的各个储库的表面上。7.根据权利要求6所述的微流体方法，其中在转录前释放所述至少一种条形码序列。8.一种用于条形码化单细胞核酸的微流体方法，所述方法包括：-提供微流体装置，所述微流体装置包含芯片，所述芯片包含至少一个微流体通道和多个储库，-向所述微流体通道的入口注入载体流体，所述载体流体包含分散在所述载体流体中的多个第一类型的液滴，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·赖晨，A·赖茨，沈冰清，S·埃卢泽，A·杰拉德，
申请(专利权)人：高保真生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：法国,FR