俄色果中枸杞酸的提取方法和检测方法技术

本发明专利技术公开了一种俄色果提取物，俄色果中枸杞酸的制备方法和检测方法。实验结果证明，本发明专利技术成功从俄色果中分离出了枸杞酸，其在俄色果中属于首次发现，因此，枸杞酸可用于俄色果的鉴别和质量控制；还可为俄色果的药效作用的挖掘奠定基础。

Extraction and detection of wolfberry acid from ruse fruit

【技术实现步骤摘要】
俄色果中枸杞酸的提取方法和检测方法
本专利技术涉及俄色果中枸杞酸的提取方法和检测方法。
技术介绍
“俄色”又名“瓦多”(藏语)，来源于蔷薇科苹果属植物变叶海棠Malustoringoides(Rehd.)Hughes及花叶海棠Malustiansitoria(Batal.)Schneid，其果实具有“健胃、降血压，治肝病、腹泻、眼病、月经不调”等作用，为甘孜州藏区民间常用药，具有悠久的药用和食用历史。现代研究表明俄色果含有丰富的维生素C、维生素B2；果糖、葡萄糖、二糖、多糖等；豆蔻酸、棕榈酸、棕榈烯酸、油酸、亚油酸、亚麻酸等多种脂肪酸及蛋白质等营养成分，但对其理化成分未见较为明确、系统的研究报道。枸杞酸，英文名：2-O-β-D-Glucopyranosyl-L-ascorbicAcid(AA-2βG)，是一种抗坏血酸的衍生物，易溶于水。枸杞酸在2004年，由日本学者Toyoda-Ono等从宁夏枸杞和北方枸杞的干果中分离纯化得到，是真正意义上源于天然的、稳定的抗坏血酸衍生物，具有与维生素C相当的生物活性，有抗氧化/抗衰老、抗肿瘤发生活性、抗癌细胞的细胞毒性和抗增殖作用、免疫促进、抑制黑素细胞生长，降低细胞黑素合成等作用，在体内具有较高的稳定性，较长的时效和半衰期，因此枸杞酸比较适合作为Vc前体应用于医药、化妆品和食品等领域，其药用价值和商业价值较高。目前未见俄色果中含有枸杞酸的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种俄色果提取物，俄色果中枸杞酸的制备方法和检测方法。本专利技术首先提供了一种俄色果提取物，所述提取物中枸杞酸的含量为80％以上。进一步地，所述俄色果是指蔷薇科苹果属植物变叶海棠Malustoringoides及花叶海棠Malustiansitoria的果实。进一步地，所述提取物是由下述方法制备得到：(1)取俄色果，粉碎，水提后，浓缩过滤即得制备液；(2)取步骤(1)中的制备液，用高效液相色谱制备，采用C18色谱柱，检测波长为235nm，依次以甲醇：0.1％磷酸水＝4:96v/v为洗脱剂，流速0.5～1.0ml/min，进行洗脱，取13-20min的流分即得提取物。进一步地，步骤(1)中，水提时，所述俄色果与水的质量比为1:10；所述提取为超声提取，提取次数为2次，每次提取时间为1小时。本专利技术还提供了一种从俄色果中制备枸杞酸的方法，包括以下步骤：(1)取俄色果，粉碎，水提后，浓缩过滤即得制备液；(2)取步骤(1)中的制备液，用高效液相色谱制备，采用C18色谱柱，检测波长为235nm，依次以甲醇：0.1％磷酸水＝4:96v/v为洗脱剂进行洗脱，得样品段；(3)取步骤(2)所得样品段，再次用高效液相色谱制备精分，得合格段，干燥后即得枸杞酸；色谱条件如下：色谱柱：C18色谱柱；流动相：流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸溶液；洗脱程序：0～15min，1％A；15～25min，1％A→10％A；25～30min，10％A→5％A；30～40min，5％A；40～50min，5％A→1％A；检测波长：235nm。进一步地，步骤(1)中，水提时，所述俄色果与水的质量比为1:10；所述提取为超声提取，提取次数为2次，每次提取时间为1小时。进一步地，步骤(2)中，所述样品段为13-20min的流分，其中枸杞酸含量达到80％以上。进一步地，步骤(3)中，所述合格段为15-22min的流分，其中枸杞酸含量达到98％以上。进一步地，步骤(3)中，所述色谱条件中流速为0.5～1.0ml/min。本专利技术还提供了一种检测俄色果中枸杞酸含量的HPLC方法，包括以下步骤：(1)供试品溶液制备：取俄色果粉末，水提，过滤即得；(2)对照品溶液制备：取枸杞酸，加水配制成对照品溶液；(3)分别将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪中检测；(4)根据检测结果计算得到俄色果中枸杞酸的含量。进一步地，色谱条件如下：色谱柱：C18色谱柱；和/或，流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸水溶液；或流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸水溶液；和/或，洗脱程序：乙腈：0.1％磷酸水＝5:95v/v等度洗脱，时间为35min或甲醇：0.1％磷酸水梯度洗脱，0～15min，1％A；15～25min，1％A→10％A；25～30min，10％A→5％A；30～35min，5％A→1％A；和/或，检测波长：235nm；优选地，步骤(1)中，所述提取为超声提取；步骤(3)中，所述色谱条件中流速为0.5～1.0ml/min。本专利技术还提供了一种俄色果的质量检测方法或者鉴别方法，所述检测方法包括任选的用于检测枸杞酸的检测方法。进一步地，所述检测方法包括如下步骤：1)称取俄色果粉末，水提过滤即得提取液；2)检测上述提取液中枸杞酸的含量。进一步地，步骤2)中，所述枸杞酸的含量为0.45％～2.50％时。进一步地，步骤2)中，所述检测方法包括薄层色谱鉴别法、高效液相色谱鉴别法、气相色谱鉴别法、纸色谱鉴别法、电化学分析法、分光光度法或色谱法。进一步地，所述高效液相色谱法的色谱条件如下：色谱柱：C18色谱柱；和/或，流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸水溶液；或流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸水溶液；和/或，洗脱程序：乙腈：0.1％磷酸水＝5:95v/v等度洗脱，时间为35min；或甲醇：0.1％磷酸梯度洗脱，0～15min，1％A；15～25min，1％A→10％A；25～30min，10％A→5％A；30～35min，5％A→1％A；和/或，检测波长：235nm。和/或，流速：0.5～1.0ml/min。本专利技术首次在俄色果中发现有枸杞酸的存在，枸杞酸可作为俄色果的指标性成分，用于俄色果的鉴别和质量控制，可为俄色果的药效作用的挖掘奠定基础。本专利技术还从俄色果中分离纯化得到了高纯度的枸杞酸，应用前景良好。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1为实施例1中制备液的HPLC检测图谱。图2为实施例1中白色固体的HPLC检测图谱。图3为实施例1中目标峰的DAD图谱。图4为实施例1中白色固体的[M-H]-质谱图。图5为实施例1中白色固体的[M+Na]+质谱图。图6为实施例1中白色固体的核磁氢谱。图7为实施例1中白色固体的核磁碳谱。图8为实施例1中白色固体的HSQC谱。图9为实施例1中白色固体的HMBC谱。图10为实施例1中白色固体的COSY谱。图11为实施例2中枸杞酸对照品标准曲线。图12为实施例2中枸杞酸对照品HPLC图谱(等度)。图13为实施例2中俄色果中枸杞酸的HPLC图谱(等度)。图14为实施例2中枸杞酸对照品HPLC图谱(梯度)。图15为实施例2中俄色果中枸杞酸的HPLC图谱(梯度)。具体实施方式实施例1俄色果提取物的制备取700g俄色果粉末(过4号筛)，用十倍量的纯水超声提取二次，每次1小时，合并提取液约15L，提取液静置后取上清液50℃浓缩本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种俄色果提取物，其特征在于：所述提取物中枸杞酸的含量为80％以上。

【技术特征摘要】
2018.04.28 CN 20181040361041.一种俄色果提取物，其特征在于：所述提取物中枸杞酸的含量为80％以上。2.根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：所述俄色果是指蔷薇科苹果属植物变叶海棠Malustoringoides及花叶海棠Malustiansitoria的果实。3.根据权利要求1或2所述的提取物，其特征在于：所述提取物是由下述方法制备得到：(1)取俄色果，粉碎，水提后，浓缩过滤即得制备液；(2)取步骤(1)中的制备液，用高效液相色谱制备，采用C18色谱柱，检测波长为235nm，依次以甲醇：0.1％磷酸水＝4:96v/v为洗脱剂进行洗脱，取13-20min的流分即得提取物。4.根据权利要求3所述的提取物，其特征在于：步骤(1)中，水提时，所述俄色果与水的质量比为1:10；所述提取为超声提取，提取次数为2次，每次提取时间为1小时。5.根据权利要求3所述的提取物，其特征在于：步骤(2)中，洗脱速度为：0.5～1.0ml/min。6.一种从俄色果中制备枸杞酸的方法，其特征在于：包括以下步骤：1)取俄色果，粉碎，水提后，浓缩过滤即得制备液；2)取步骤(1)中的制备液，用高效液相色谱制备，采用C18色谱柱，检测波长为235nm，依次以甲醇：0.1％磷酸水＝4:96v/v为洗脱剂进行洗脱，得样品段；3)取步骤2)所得样品段，用高效液相色谱精分，得合格段，干燥后即得枸杞酸；色谱条件如下：色谱柱：C18色谱柱；流动相：流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸溶液；洗脱程序：0～15min，1％A；15～25min，1％A→10％A；25～30min，10％A→5％A；30～40min，5％A；40～50min，5％A→1％A；检测波长：235nm。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤1)中，水提时，所述俄色果与水的质量比为1:10；所述提取为超声提取，提取次数为2次，每次提取时间为1小时。8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于：步骤2)中，所述样品段为13-20min的流分，其中枸杞酸含量达到80％以上。9.根据权利要求6～8任一项所述的方法，其特征在于：步骤3)中，所述合格段为15-22min的流分，其中枸杞酸含量达到98％以上。10.根据权利要求6～9任一项所述的方法，其特征在于：步骤3)中，所述色...

【专利技术属性】
技术研发人员：何刚，
申请(专利权)人：四川智佳成生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51