用于指导瑞舒伐他汀药物个体化用药相关基因检测的引物组合及试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种用于指导瑞舒伐他汀药物个体化用药相关基因检测的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括针对ABCG2(rs2231142)、SLCO1B1(rs4149056)基因位点的特异性引物及探针。本发明专利技术还公开了包含所述引物组合的试剂盒及其分析方法。本发明专利技术具有操作简单、经济、检测快速、准确性高、特异性好及结果判读简单的特点，实现对用于瑞舒伐他汀药物个体化用药相关基因多态性的快速及准确测定，以降低临床瑞舒伐他汀药物常见用药的不良反应，降低医疗成本，节约社会资源。

【技术实现步骤摘要】
用于指导瑞舒伐他汀药物个体化用药相关基因检测的引物组合及试剂盒及方法
本专利技术涉及体外诊断
，具体涉及一种用于指导瑞舒伐他汀药物个体化用药相关基因检测的引物组合及试剂盒及方法。
技术介绍
高脂血症为临床上常见的代谢疾病，是因脂肪代谢或转异常导致血浆一种或多种脂质高于正常指标的疾病。高血脂症是一种血脂水平偏高的慢性疾病，其发病原因较为复杂，年龄、性别、遗传、环境和不良的生活习惯均会导致该病的发生。临床研究表明，高血脂是多种心血管疾病的诱发因素，如动脉粥样硬化、冠心病等。近些年，随着人们物质生活的不断提高，该病的发病率也逐年增高，目前该病是公认的心肌梗死、脑卒中等致残、致死性动脉粥样硬化性病变的独立危险因素之一，并与糖尿病、心血管疾病发生有关。瑞舒伐他汀是一种用作降脂剂的他汀类药物。FDA批准的适应症是纯合家族性高胆固醇血症，高脂血症，混合性血脂异常，原发性异常脂蛋白血症，高甘油三酯血症和预防心血管疾病。我国卫计委于2015年发布了《药物代谢酶和药物作用靶点基因检测技术指南(试行)》，指出对药物代谢酶和药物靶点基因进行检测，可指导临床针对特定的患者选择合适的药物和给药剂量实现个体化用药，从而提高药物治疗的有效性和安全性。建议临床上根据SLCO1B1基因型选择他汀类药物进行治疗。SLCO1B1*5等位基因突变破坏了转运蛋白在质膜上的定位，导致肝摄取减少、他汀类药物的全身血浆浓度增加，肌肉他汀类药物暴露增加，与肌病的发生相关。ABCG2基因编码的乳腺癌耐药蛋白(BCRP)是瑞舒伐他汀的主要外排转运体。研究证实亚洲人群常见的ABCG2421C＞A突变可以显著升高瑞舒伐他汀血药浓度。综上，通过对基因多态性的检测判断患者是否存在瑞舒伐他汀抗性，以便通过增加瑞舒伐他汀剂量、增加使用频率、增加新药等措施降低高脂血症的发生。目前市场上还没有针对瑞舒伐他汀耐药性检测的基因检测试剂盒，临床上基因检测类试剂盒多采取Sanger测序法、高分辨率溶解曲线法、芯片杂交法检测基因多态性。但上述方法存在以下问题，其中Sanger测序包括PCR扩增、PCR产物纯化、DNA测序等操作，步骤繁琐，实验耗时长，专业技术要求高，且测序花费高，不适合临床推广；高分辨率溶解曲线法对设备要求特殊，且检测灵敏度不高，也不适合临床推广；芯片杂交法检测灵敏度低且特异性差，容易出现假阳性结果。荧光定量PCR的检测方法较以上方法，其拥有成本低、灵敏度高、特异性强，结果的重复性好等优点，2小时内可完成Sanger测序12-13小时才能完成的通量，大大缩短了临床检测时间，是一种非常好的基因多态性检测手段，Genotyping基因分型散点图是基于荧光定量PCR的一种更简单快速直观判读基因型的检测方法，但是目前没有基于该方法的用于指导瑞舒伐他汀药物个体化用药相关基因检测的的引物组合及试剂盒产品。
技术实现思路
为了解决传统临床经验医疗方式诊断及瑞舒伐他汀药物用药时易出现临床用药不良反应且没有合适的试剂盒产品的技术问题，本专利技术提供一种操作简单、检测快速、准确性高及特异性好的用于指导瑞舒伐他汀药物个体化用药相关基因检测的引物组合、试剂盒及其方法。本专利技术的目的之一在于提供一种检测快速、准确性高及特异性好的用于指导瑞舒伐他汀药物个体化用药相关基因检测的引物组合。本专利技术的目的之二在于提供一种操作简单的包含所述引物组合的试剂盒。本专利技术的目的之三在于提供一种用于指导瑞舒伐他汀药物个体化用药相关基因检测的方法。为了实现本专利技术的目的之一，所采用的技术方案是：一种用于指导瑞舒伐他汀药物个体化用药相关基因检测的引物组合，包括针对ABCG2(rs2231142)、SLCO1B1(rs4149056)基因位点的特异性引物及探针，如下：ABCG2(rs2231142)正向引物：5'-GCTATTTGCCTTAAGGATGATGTTG-3'(SEQIDNO.1)；ABCG2(rs2231142)反向引物：5'-TGAATGACCCTGTTAATCCGTTC-3'(SEQIDNO.2)；ABCG2(rs2231142)野生型探针：5'FAM-TGACGGTGAGAGAAAACTTACAGTTCTC-TAMRA3'(SEQIDNO.3)；ABCG2(rs2231142)突变型探针：5'VIC-CTGACGGTGAGAGAAAACTTAAAGTTCTC-TAMRA3'(SEQIDNO.4)；SLCO1B1(rs4149056)正向引物：5'-GAAACACTCTCTTATCTACATAGGTTGT-3'(SEQIDNO.5)；SLCO1B1(rs4149056)反向引物：5'-CCTTCTTTAGCGAAATCATCAA-3'(SEQIDNO.6)；SLCO1B1(rs4149056)野生型探针：5'FAM-CCCATGAACACATATA-MGB3'(SEQIDNO.7)；SLCO1B1(rs4149056)突变型探针：5'VIC-ACCCATGAACGCATATA-MGB3'(SEQIDNO.8)。为了实现本专利技术的目的之二，所采用的技术方案是：一种用于指导瑞舒伐他汀药物个体化用药相关基因检测的试剂盒，包括含有所述的特异性引物及探针的PCR反应液，所述PCR反应液分别为ABCG2(rs2231142)、SLCO1B1PCR反应液，其分别包括：ABCG2(rs2231142)正向引物、ABCG2(rs2231142)反向引物、ABCG2(rs2231142)野生型探针及ABCG2(rs2231142)突变型探针；SLCO1B1(rs4149056)正向引物、SLCO1B1(rs4149056)反向引物、SLCO1B1(rs4149056)野生型探针及SLCO1B1(rs4149056)突变型探针；所述的PCR反应液当中还包括NuHiSNPMix(2×)PCR预混液及无核酸酶水。在本专利技术的一个优选实施例中，所述PCR反应液的成分终浓度为：1×NuHiSNPMix，0.5μM的各特异性引物及0.2μM探针。在本专利技术的一个优选实施例中，所述试剂盒还包括阳性对照品一、阳性对照品二及阳性对照品三；所述阳性对照品一分别为ABCG2(rs2231142)、SLCO1B1(rs4149056)基因位点野生型质粒；所述阳性对照品二分别为ABCG2(rs2231142)、SLCO1B1(rs4149056)基因位点野生型与突变型按1：1数量比杂合的质粒；所述阳性对照品三分别为ABCG2(rs2231142)、SLCO1B1(rs4149056)基因位点突变型质粒。在本专利技术的一个优选实施例中，所述试剂盒还包括空白对照品，所述空白对照品为无核酸酶水。为了实现本专利技术的目的之三，所采用的技术方案是：一种用于指导瑞舒伐他汀药物个体化用药相关基因检测的方法，包括如下步骤：步骤一：取待检测样本抽提的DNA，作为PCR模板；步骤二：提供所述的试剂盒，取出适量PCR反应液，将所述PCR反应液与适量所述PCR模板混匀；步骤三：进行PCR扩增反应：95℃变性5min；95℃10sec，60℃40sec(采集荧光)，45cycles；步骤四：PCR结果判定：在所述试剂盒的阳性对照品和空白对照品符合规定的情况下，根据荧光扩增曲线及Gen本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于指导瑞舒伐他汀药物个体化用药相关基因检测的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括针对ABCG2(rs2231142)、SLCO1B1(rs4149056)基因位点的特异性引物及探针，如下：ABCG2(rs2231142)正向引物：5'‑GCTATTTGCCTTAAGGATGATGTTG‑3'(SEQ ID NO.1)；ABCG2(rs2231142)反向引物：5'‑TGAATGACCCTGTTAATCCGTTC‑3'(SEQ ID NO.2)；ABCG2(rs2231142)野生型探针：5'FAM‑TGACGGTGAGAGAAAACTTACAGTTCTC‑TAMRA3'(SEQ ID NO.3)；ABCG2(rs2231142)突变型探针：5'VIC‑CTGACGGTGAGAGAAAACTTAAAGTTCTC‑TAMRA3'(SEQ ID NO.4)；SLCO1B1(rs4149056)正向引物：5'‑GAAACACTCTCTTATCTACATAGGTTGT‑3'(SEQ ID NO.5)；SLCO1B1(rs4149056)反向引物：5'‑CCTTCTTTAGCGAAATCATCAA‑3'(SEQ ID NO.6)；SLCO1B1(rs4149056)野生型探针：5'FAM‑CCCATGAACACATATA‑MGB3'(SEQ ID NO.7)；SLCO1B1(rs4149056)突变型探针：5'VIC‑ACCCATGAACGCATATA‑MGB3'(SEQ ID NO.8)。...

【技术特征摘要】
1.一种用于指导瑞舒伐他汀药物个体化用药相关基因检测的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括针对ABCG2(rs2231142)、SLCO1B1(rs4149056)基因位点的特异性引物及探针，如下：ABCG2(rs2231142)正向引物：5'-GCTATTTGCCTTAAGGATGATGTTG-3'(SEQIDNO.1)；ABCG2(rs2231142)反向引物：5'-TGAATGACCCTGTTAATCCGTTC-3'(SEQIDNO.2)；ABCG2(rs2231142)野生型探针：5'FAM-TGACGGTGAGAGAAAACTTACAGTTCTC-TAMRA3'(SEQIDNO.3)；ABCG2(rs2231142)突变型探针：5'VIC-CTGACGGTGAGAGAAAACTTAAAGTTCTC-TAMRA3'(SEQIDNO.4)；SLCO1B1(rs4149056)正向引物：5'-GAAACACTCTCTTATCTACATAGGTTGT-3'(SEQIDNO.5)；SLCO1B1(rs4149056)反向引物：5'-CCTTCTTTAGCGAAATCATCAA-3'(SEQIDNO.6)；SLCO1B1(rs4149056)野生型探针：5'FAM-CCCATGAACACATATA-MGB3'(SEQIDNO.7)；SLCO1B1(rs4149056)突变型探针：5'VIC-ACCCATGAACGCATATA-MGB3'(SEQIDNO.8)。2.如权利要求1所述的一种用于指导瑞舒伐他汀药物个体化用药相关基因检测的试剂盒，其特征在于，包括含有所述的特异性引物及探针的PCR反应液，所述PCR反应液分别为ABCG2(rs2231142)、SLCO1B1PCR反应液，其分别包括：ABCG2(rs2231142)正向引物、ABCG2(rs2231142)反向引物、ABCG2(rs2231142)野生型探针及ABCG2(rs2231142)突变型...

【专利技术属性】
技术研发人员：宣涛，刘颖，杜晴晴，赵艳伟，孙子奎，
申请(专利权)人：上海派森诺生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31