基于STIP1基因rs2236647位点用于儿童哮喘病检测的试剂、试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种基于STIP1基因rs2236647位点用于儿童哮喘病检测的试剂、试剂盒及应用，其试剂包括PCR反应体系、SAP反应体系和iPLEX延伸体系。试剂盒包括试剂。试剂在制备用于预测儿童患哮喘病风险的试剂盒中的应用，其步骤为：PCR扩增、SAP反应、iPLEX延伸、基因测序，若STIP1基因rs2236647位点为纯合子CC，则患哮喘的风险增加。本发明专利技术的试剂可对哮喘的发生进行早期遗传学预测。

Detection of asthma in children based on stip1 gene rs2236647

【技术实现步骤摘要】
基于STIP1基因rs2236647位点用于儿童哮喘病检测的试剂、试剂盒及应用
本专利技术涉及基因工程
，尤其涉及一种基于STIP1基因rs2236647位点用于儿童哮喘病检测的试剂、试剂盒及应用。
技术介绍
支气管哮喘(bronchialasthma，简称哮喘)是一种以慢性气道炎症为特征的异质性疾病，主要临床表现为随时间不断变化和加剧的喘息、气短、胸闷、咳嗽等呼吸道症状，同时伴有可逆性呼气气流受限。全球哮喘患病人数约3.58亿，其中中国哮喘患者达三千万。调研数据显示，全球成人哮喘的平均发病率为4.3％；而儿童哮喘发病率在6～7岁儿童中为11.6％，13～14岁儿童中为13.7％，且各国之间差异较大，6～7岁儿童哮喘发病率最高达37.6％(哥斯达黎加)，13～14岁儿童中最高达31.2％(马恩岛)。在我国，2010年调查数据显示城区0～14岁儿童哮喘总患病率为3.02％，较2000年增长了52.8％，其中大城市增长更为显著。与此同时，哮喘的临床控制情况并不理想，数据表明，欧洲成人哮喘中未控制率达45％；而亚洲儿童哮喘未控制率更高，达53.4％。在我国，大于14岁哮喘患者中的控制率仅28.5％，儿童哮喘控制率不达10％。此外，尽管经过规范诊治，仍有3～4％的儿童期哮喘可持续至成人，30～50％的儿童哮喘在成人期复发。伤残调整生命年是指根据失去的健康年数，评估由于发病率和死亡率的疾病相关信息而丧失的健康寿命年数；而全球哮喘约占所有疾病伤残调整生命年的1.1％，达2600万人次/年。哮喘的高发病率及低控制率，不仅影响儿童期的成长发育及学习生活，还与成人期的工作劳动能力下降密切相关，给家庭、卫生系统和整个社会造成了沉重的负担。因此，探讨导致哮喘发生及治疗反应欠佳的因素，在儿童时期积极采取相关措施控制哮喘发病率、提高哮喘控制率，将对减轻我国公共卫生事业负担有极大帮助。哮喘是由多种因素综合作用的结果，包括遗传、环境、感染等，遗传因素在其中占重要地位。哮喘的发生及对药物治疗的反应与基因变异密切相关，具有种族、性别、环境等差异。通过全基因组关联研究(Genome-wideassociationstudy，GWAS)已发现哮喘相关候选基因超过1000个，目前在人群中得到验证的基因约50余个。这些基因的变异可影响哮喘的发生、严重程度及对各种治疗药物的反应。目前临床上用于治疗哮喘的药物主要为吸入糖皮质激(inhaledcorticosteroids，ICS)、β2受体激动剂、白三烯调节剂和抗胆碱能药物。近年来，随着哮喘分子机制研究的逐渐深入，直接针对炎症介质的抗体相继出现。2018年GINA指南已将抗IgE抗体(omalizumab)、抗IL-5抗体(mepolizumab)及抗IL-5受体抗体(benralizumab)推荐应用于临床治疗成人难治性哮喘，另有针对IL-4、IL-13、IL-17、TNFα等多种炎症因子的抗体已进入临床实验阶段。但不同个体对药物的反应具有较大差异，高达40％的哮喘患者对药物治疗无反应，另有部分患者使用药物后药物毒副作用明显，死亡风险增加。广泛存在的个体差异支持哮喘患者对治疗药物的反应与基因变异密切相关。ICS是GINA哮喘指南推荐用于控制哮喘发作的首选用药。促肾上腺皮质激素释放激素与促肾上腺皮质激素释放激素受体1(corticotropin-releasinghormonereceptor2，CRHR1)结合，促进下游促肾上腺皮质激素的分泌，作用于肾上腺皮质进而促进糖皮质激素的分泌。糖皮质激素(Glucocorticoids，GCs)与细胞膜上糖皮质激素受体(glucocorticoidreceptor,GR)结合，抑制炎症基因的激活，增强抗炎基因的转录，缓解炎症反应；还可抑制细胞介导的免疫反应，产生免疫抑制作用。大部分患者经药物治疗后，哮喘症状可以得到控制，但小部分患者治疗效果欠佳，甚至哮喘症状加深。其原因在于，人体中某些基因与GCs作用通路与哮喘的发生及ICS疗效相关。针对不同的人群，通过检测生物标志物来为个体制定特定的医疗方案成为治疗的趋势，寻找影响汉族儿童哮喘发病及ICS疗效的遗传学因素是目前急需要解决的问题。2015年在美国启动的精确医疗倡议利用大型数据库、研究(包括蛋白质组学、代谢组学和基因组学)及算法寻找可用于临床的生物标志物。基于遗传学因素与哮喘的显著相关性，寻找与哮喘发生及药物效应相关的遗传标记将有助于推动哮喘的个体化治疗。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种基于STIP1基因rs2236647位点用于儿童哮喘病检测的试剂、试剂盒及应用。试剂是用于测定STIP1基因rs2236647位点的基因型，根据其基因型将儿童哮喘病人进行分类，对哮喘的发生进行早期遗传学预测，从而进行针对性治疗。其应用方法简便、快速。本专利技术提供了一种基于STIP1基因rs2236647位点用于儿童哮喘病检测的试剂，包括PCR反应体系、SAP反应体系和iPLEX延伸体系，所述PCR反应体系包括：根据STIP1基因rs2236647位点设计的引物对、PCRBuffer、MgCl2、Taq酶、dNTP；所述SAP反应体系包括虾碱性磷酸酶、SAPBuffer和去离子水；所述iPLEX延伸体系包括iPLEXBuffer、iPLEXEnzyme、iPLEXTerminationmix、PrimerMix和去离子水。上述基于STIP1基因rs2236647位点用于儿童哮喘病检测的试剂，进一步的，所述引物对包括上游引物和下游引物，所述上游引物的DNA序列如SEQIDNO.1所示；所述下游引物的DNA序列如SEQIDNO.2所示。上述基于STIP1基因rs2236647位点用于儿童哮喘病检测的试剂，进一步的，所述PCR反应体系包括1.625mM的MgCl2、500μM的dNTP、100μM的引物对、0.5U/rxn的Taq酶、1.25xPCRBuffer和去离子水。上述基于STIP1基因rs2236647位点用于儿童哮喘病检测的试剂，进一步的，所述SAP反应体系包括1U/μl的虾碱性磷酸酶、10xSAPBuffer和去离子水。上述基于STIP1基因rs2236647位点用于儿童哮喘病检测的试剂，进一步的，所述iPLEX延伸体系包括0.222xiPLEXBuffer、1xiPLEXTerminationmix、1xiPLEXEnzyme、PrimerMix。基于一个总的技术构思，本专利技术还提供了一种用于儿童哮喘病检测的试剂盒，所述试剂盒包括上述的基于STIP1基因rs2236647位点用于儿童哮喘病检测的试剂。基于一个总的技术构思，本专利技术还提供了一种所述的基于STIP1基因rs2236647位点用于儿童哮喘病检测的试剂在制备用于预测儿童患哮喘病风险的试剂盒中的应用，包括以下步骤：S1、将待测物DNA，通过所述PCR反应体系进行PCR扩增得到PCR产物；S2、将所述PCR产物置于所述SAP反应体系中进行SAP反应得到SAP处理液；S3、将所述SAP处理液加入所述iPLEX延伸体系中进行延伸反应得到iPLEX处理液；S4、将所述iPLEX处理液纯化后进行基因测序，若STIP1基因rs2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于STIP1基因rs2236647位点用于儿童哮喘病检测的试剂，其特征在于，包括PCR反应体系、SAP反应体系和iPLEX延伸体系，所述PCR反应体系包括：根据STIP1基因rs2236647位点设计的引物对、PCR Buffer、MgCl2、Taq酶、dNTP；所述SAP反应体系包括虾碱性磷酸酶、SAP Buffer和去离子水；所述iPLEX延伸体系包括iPLEX Buffer、iPLEX Enzyme、iPLEX Termination mix、Primer Mix和去离子水。

【技术特征摘要】
1.一种基于STIP1基因rs2236647位点用于儿童哮喘病检测的试剂，其特征在于，包括PCR反应体系、SAP反应体系和iPLEX延伸体系，所述PCR反应体系包括：根据STIP1基因rs2236647位点设计的引物对、PCRBuffer、MgCl2、Taq酶、dNTP；所述SAP反应体系包括虾碱性磷酸酶、SAPBuffer和去离子水；所述iPLEX延伸体系包括iPLEXBuffer、iPLEXEnzyme、iPLEXTerminationmix、PrimerMix和去离子水。2.根据权利要求1所述基于STIP1基因rs2236647位点用于儿童哮喘病检测的试剂，其特征在于，所述PCR反应体系中所述引物对包括上游引物和下游引物，所述上游引物的DNA序列如SEQIDNO.1所示；所述下游引物的DNA序列如SEQIDNO.2所示。3.根据权利要求1所述基于STIP1基因rs2236647位点用于儿童哮喘病检测的试剂，其特征在于，所述PCR反应体系包括1.625mM的MgCl2、500μM的dNTP、100μM的引物对、0.5U/rxn的Taq酶、1.25xPCRBuffer和去离子水。4.根据权利要求1所述基于STIP1基因rs2236647位点用于儿童哮喘病检测的试剂，其特征在于，所述SAP反应体系包括1U/μl的虾碱性磷酸酶、10xSAPBuffer和去离子水。5.根据权利要求1所述基于STIP1基因rs2236647位点用于儿童哮喘病检测的试剂，其特征在于，所述iPLEX延伸体系包括0.222xiPLEXBuffer、1xiPLEXTerminationmix、1xiPLEXEnzyme、PrimerM...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑湘榕，余小河，唐勇军，黄娟，豆波，
申请(专利权)人：郑湘榕，
类型：发明
国别省市：湖南,43