靶向PD-L1载miR-34a微泡的制备方法及在制备抑制宫颈癌的药物上的应用技术

本发明专利技术涉及一种超声联合靶向PD‑L1载miR‑34a微泡的制备方法，具体是将生物素化脂质微泡与链酶亲和素孵育，加入生物素化的PD‑L1抗体，经孵育后离心得到靶向PD‑L1微泡。将所得的靶向PD‑L1微泡和miR‑34a质粒室温下孵育，再用PBS冲洗，离心，除去未结合在微泡表面的miR‑34a质粒，得到靶向PD‑L1载miR‑34a微泡。本发明专利技术将靶向PD‑L1载miR‑34a微泡应用于制备抑制宫颈癌移植瘤的药物上，结果表明靶向PD‑L1载miR‑34a微泡具体更高的抑瘤效果，靶向PD‑L1载miR‑34a微泡的体积抑制率和体重抑制率分别为54.32%和60.14%。

【技术实现步骤摘要】
靶向PD-L1载miR-34a微泡的制备方法及在制备抑制宫颈癌的药物上的应用
本专利技术涉及一种脂质微泡，具体为靶向PD-L1载miR-34a微泡，并将其应用于制备治疗宫颈癌。
技术介绍
宫颈癌是全世界女性最常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率仅次于乳腺癌高居妇科恶性肿瘤第二位，发病率高且逐渐趋于年轻化，严重危害女性健康。宫颈癌主要是由于人乳头瘤病毒(HPV)感染造成，目前认为高危型HPV持续感染、机体的免疫功能下降及宫颈癌局部微环境之间的相互作用，促进宫颈癌的发生发展。当前治疗方法包括手术切除、放疗、化疗。手术是治疗宫颈癌的主要方法之一，虽然手术能暂时切除病灶，但肿瘤细胞具有很强的侵袭性和转移性，病灶并不能完全切除。辅助化疗在临床上被广泛用于术前和术后治疗，能够有效地降低肿瘤分期、减少宫旁浸润，为手术提供了良好的条件，但化疗的靶向性差，易产生耐药，全身毒副作用明显。宫颈癌是放射敏感性肿瘤，放疗对于中晚期患者和复发患者的效果是得到肯定的，但其严重的并发症给治疗带来极大的困难。因此探索宫颈癌的发病机制，寻找宫颈癌治疗的新靶点，对宫颈癌的早期诊断、治疗及预后评估具有重要的临床意义。
技术实现思路
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【技术保护点】
1.靶向PD‑L1载miR‑34a微泡的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇2000、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇2000‑生物素、硬脂酸—聚乙酰亚胺混于玻璃试管中，50‑60℃水浴锅预热后，涡旋状态下充入氮气使混合液成膜于试管壁；（2）将步骤（1）中成膜后的玻璃管抽真空后，加入Tris缓冲液，水浴超声后置于西林瓶中密封，冲入C3F8气体，冷藏保存；（3）将步骤（2）中冷藏后的西林瓶经振荡后得到白色乳状液体；将该白色乳状液体移经离心后弃去下层液体即为生物素化脂质微泡；（4）向步骤（3）中生物素化脂质微泡中滴加链酶亲和素，在2‑4 °C...

【技术特征摘要】
1.靶向PD-L1载miR-34a微泡的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素、硬脂酸—聚乙酰亚胺混于玻璃试管中，50-60℃水浴锅预热后，涡旋状态下充入氮气使混合液成膜于试管壁；（2）将步骤（1）中成膜后的玻璃管抽真空后，加入Tris缓冲液，水浴超声后置于西林瓶中密封，冲入C3F8气体，冷藏保存；（3）将步骤（2）中冷藏后的西林瓶经振荡后得到白色乳状液体；将该白色乳状液体移经离心后弃去下层液体即为生物素化脂质微泡；（4）向步骤（3）中生物素化脂质微泡中滴加链酶亲和素，在2-4°C、避光下恒温振荡孵育，得到微泡混悬液；（5）将步骤（4）中的微泡混悬液离心后，弃去下清液后，采用PBS缓冲液漂洗、离心、弃下清，得到微泡；（6）将生物素化的PD-L1抗体加入步骤（5）的微泡中，在2-4°C、避光的恒温振荡孵育过夜后离心，弃下清液，加入PBS缓冲液漂洗、离心、弃下清，即可得到靶向PD-L1微泡；（7）将步骤（6）所得的靶向PD-L1微泡和miR-34a质粒室温下孵育，再用PBS冲洗，离心，除去未结合在微泡表面的miR-34a质粒，得到靶向PD-L1载miR-34a微泡。2...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵云，刘朝奇，姜矜君，
申请(专利权)人：三峡大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42