超稳定脂质体增加对有丝分裂细胞的靶向作用制造技术

超稳定脂质体，其包含包埋在内环境中的抗有丝分裂剂、一种或多种阴离子和一种或多种阳离子，其中当所述脂质体悬浮在600mM蔗糖中时，所述包埋的抗有丝分裂药物以在12小时内低于0.6％的缓慢速率释放或以在8小时内低于5％的缓慢速率释放。这些脂质体可用于治疗癌症。特别地，HEPC∶Chol∶DSPE‑PEG2000(50∶45∶5)脂质体包含BI 2536和比例为1∶3的柠檬酸盐∶磷酸盐。

The targeting effect of the increase of super stable liposomes on mitotic cells

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】超稳定脂质体增加对有丝分裂细胞的靶向作用专利技术背景本专利技术涉及癌症治疗领域。更具体地，本专利技术涉及可用于治疗癌症的超稳定脂质体和使用超稳定脂质体治疗癌症的方法。本文中用于阐明本专利技术背景或提供关于实践的其他细节的出版物和其他材料通过引用并入，并且为了方便起见分别在参考文献中分组。如果癌症基本上是过度的细胞分裂的状态，则有丝分裂调节酶应该成为很好的抗癌药物靶标。事实上，微管靶向剂(MTA)作为一种药物类别成功促使了对更特异的抑制有丝分裂的方法的寻求，从而避免与MTA相关的周围神经病变[1-3]。在有丝分裂中发挥关键作用的酶调节因子如Polo样激酶(PLK)[4，5]、驱动蛋白-纺锤体蛋白(KSP)[6，7]和极光激酶[8，9]立即成为高优先级的药物靶标。然而，尽管花费了超过100亿美元用于开发25种有丝分裂特异性药物，但其性能却因没有报道的临床疗效而令人沮丧[10，11]。然而，有丝分裂调节酶可能本质上就是坏的药物靶标，因为在任何一个时间仅有有限比例的肿瘤细胞是实际上在分裂的。正如Komlodi-Pasztor等[10]简明地指出的那样，“为了使靶向治疗有效，靶标必须存在。”然而，这一论点暗示，如果肿瘤生物利用度可暂时维持，则有丝分裂调节酶可能仍然有效。PLK抑制剂BI2536的临床前测试仅在每两周施用一次时显示肿瘤减少[4]，该事实支持这样的观点，即持续的生物利用度增加了细胞分裂行为中捕获肿瘤细胞的机会。脂质体是众所周知的已用于药物递送的胶体颗粒。众所周知，通过在脂质体的内部和外部环境之间创造物理化学差异，可以将包括药物在内的小分子“远程装载”到脂质体中[16-18]。重要的是，药物在外部环境中应该是膜渗透性的，但是变得带电荷并因此在扩散到内部环境中时被包埋(entrap)。如果药物是弱碱性的，产生这种差异的一种方法是将缓冲阴离子包封在脂质体内部，使得脂质体内部产生相对于外部的低pH。已知脂质体利用肿瘤内皮中的开窗来进入并持续存在于肿瘤组织中[12，13]。这种被称为增强渗透性和保留(EPR)效应的现象首先用多柔比星证实，因这种现象产生了脂质体癌症药物DoxilTM[14，15]。其证明了脂质体包封的稳定性是DoxilTM所证明的双刃剑。一方面，减少了对于健康组织的药物暴露。另一方面，多柔比星从脂质体中缓慢泄漏会对效力产生制约作用，因为大多数癌症药物需要高肿瘤浓度才能有效。与多柔比星相反，BI2536有效于多柔比星浓度的1000分之一，这意味着持续的暴露而非最大的浓度应该大大增强其效力。期望开发能够使有丝分裂抑制剂的时间暴露最大化以增加可被有丝分裂抑制剂靶向的分裂的癌细胞的级分的系统。
技术实现思路
本专利技术涉及癌症治疗领域。更具体地，本专利技术涉及可用于治疗癌症的超稳定脂质体和使用该超稳定脂质体治疗癌症的方法。因此，在一个方面，本专利技术提供了包封抗有丝分裂药物的超稳定脂质体。在一些实施方案中，所述抗有丝分裂药物是BI2536、Ispinesib(SB715992)、MK0457(VX680)、AZD1152、PHA680632、PHA739358、MLN8054、MLN8237、R763、AT9283、SNS314、SU6668、ENMD2076、BI811283、CYC116、ENMD981693、MKC1693、ON01910、GSK461364、HMN214、BI6727、SB743921、MK0731或ARRY520。在一些实施方案中，可使用任何合适的脂质体成分来制备所述超稳定脂质体。在一些实施方案中，所述超稳定脂质体是空间稳定的。在一些实施方案中，所述超稳定脂质体由包含摩尔比为50∶45∶5的HEPC∶Chol∶DSPE-PEG2000(HEPC：氢化蛋L-a-磷脂酰胆碱；胆固醇：胆固醇；DSPE-PEG-2000：1，2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇-胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000]的脂质混合物制备。在一些实施方案中，所述超稳定脂质体含有具有一种或多种阴离子，优选两种或更多种阴离子的内环境(innermilieu)，其提供从所述超稳定脂质体中缓慢释放抗有丝分裂剂。在一些实施方案中，所述一种或多种阴离子，或优选两种或更多种阴离子，可以是如本文所述的。在一些实施方案中，所述内环境含有一种或多种阳离子。在一些实施方案中，所述一种或多种阳离子可以是如本文所述的。通过使用本文描述的技术，可以容易地确定用于给定的抗有丝分裂药物的阴离子和阳离子的最佳组合。在一些实施方案中，提供了药物组合物，其包含本文所述的超稳定脂质体，所述药物组合物含有或不含有至少一种药学上可接受的赋形剂和/或载体。合适的药学上可接受的赋形剂和载体是本领域熟知的。在第二方面，本专利技术提供了使用本文所述的超稳定脂质体治疗癌症的方法。根据该方法，将治疗有效量的超稳定脂质体施用给需要治疗的患者，例如人。附图简述图1显示了研究从多种盐溶液将BI2536分配到己醇中的能力的程序。图2显示了使用图1中描述的方法从多种单阴离子盐溶液中提取到己醇中的BI2536的相对荧光。BI2536到己醇中的分配以及盐溶液受盐阴离子的身份和浓度的影响。使用的缩写是柠檬酸盐(C)、乙酸盐(A)、磷酸盐(P)、2-(N-吗啉代)乙磺酸盐(M)和盐酸(H)。所有盐溶液均为0.8M并用钠作为阳离子调节至pH3。误差线表示标准误差。图3显示了使用图1中描述的方法从多种成对阴离子组合提取到己醇中的BI2536的相对荧光。调节成对阴离子组合的摩尔比可以影响BI2536到己醇中的分配。所有盐均为0.8M，并且用钠作为阳离子调节至pH3。单盐的浓度为0.8M。缩写前的数字表示占总盐浓度0.8M的浓度比例。图4显示释放速率与脂质体BI2536的EC50相关，但与脂质体多柔比星不相关。使用以下单一和成对组合的阴离子产生连续的药物释放速率以进行梯度装载：柠檬酸盐(C)、乙酸盐(A)、磷酸盐(P)、2-(N-吗啉代)乙磺酸盐(M)和盐酸(H)。双字母缩写表示成对阴离子组合，每个组合为总浓度的一半。对于低渗(水)和高渗条件(蔗糖)，显示了BI2536(上图)和多柔比星(下图)的细胞毒性(EC50)相对于释放速率的散点图。条形图显示对于相同数据的EC50相对于以释放速率排序的制剂。所有图表上的虚线表示未包封药物的EC50。释放率基于孵育12小时后释放的药物量。报告了Spearman等级相关性(rs)和相关的p值。图5A和5B显示通过调节柠檬酸盐：磷酸盐比例来调节脂质体BI2536的效力。图5A：显示了对于多种柠檬酸盐∶磷酸盐(C∶P)比例在第3天和第8天测量的EC50vs.释放速率的散点图。图5B：用以多种C∶P比例配制的单剂量脂质体BI2536处理小鼠，所述小鼠为用HCT116结肠直肠癌细胞异种移植的。每只实验组使用3只小鼠。报告肿瘤体积和重量。误差线表示标准误差。图6A和6B显示脂质体BI2536对HCT116异种移植小鼠的体内效力和毒性。对于在第0天用单剂量处理(图6A)或在第0天和第7天用双剂量处理(图6B)，显示了肿瘤体积和重量以及Kaplan-Meier存活曲线。所有用脂质体BI2536的处理用所述的多种柠檬酸盐∶磷酸盐(C∶P)比例配制，并在考虑包封效率后以340mg/k本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种超稳定脂质体，其包含通过膜与外部环境分开的内环境，所述内环境包含包埋在所述内环境中的抗有丝分裂药物、一种或多种阴离子和一种或多种阳离子，其中当所述脂质体悬浮在600mM蔗糖中时所述包埋的抗有丝分裂药物以在12小时内低于0.6％的缓慢速率释放，或以在8天内低于5％的缓慢速率释放。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2017.01.18 US 62/447,4981.一种超稳定脂质体，其包含通过膜与外部环境分开的内环境，所述内环境包含包埋在所述内环境中的抗有丝分裂药物、一种或多种阴离子和一种或多种阳离子，其中当所述脂质体悬浮在600mM蔗糖中时所述包埋的抗有丝分裂药物以在12小时内低于0.6％的缓慢速率释放，或以在8天内低于5％的缓慢速率释放。2.权利要求1的超稳定脂质体，其中所述一种或多种阴离子是柠檬酸根、乙酸根、磷酸根、2-(N-吗啉代)乙磺酸根、氯离子、柠檬酸根和乙酸根、柠檬酸根和2-(N-吗啉代)乙磺酸根、柠檬酸根和氯离子、乙酸根和磷酸根、乙酸根和2-(N-吗啉代)乙磺酸根、乙酸根和氯离子、磷酸根和2-(N-吗啉代)乙磺酸根、磷酸根和氯离子、2-(N-吗啉代)乙磺酸根和氯离子。3.权利要求1或2的超稳定脂质体，其中两种阴离子以约1∶7至约7∶1的比例存在。4.权利要求3的超稳定脂质体，其中所述一种或多种阴离子是柠檬酸根和磷酸根或柠檬酸根和乙酸根或乙酸根和磷酸根。5.权利要求1-4中任一项的超稳定脂质体，其中所述一种或多种阳离子为钠、铵、三乙铵、铜、镁、锌或铁。6.权利要求1-5中任一项的超稳定脂质体，其中所述抗有丝分裂药物是polo样激酶抑制剂，例如BI2536、ON01910、GSK461364、HMN214或BI6727；驱动蛋白纺锤体抑制剂，如Ispinesib(SB715992)、SB743921、MK0731或ARRY520；或极光激酶抑制剂，例如MK0457(VX680)、AZD1152、PHA680632、PHA739358、MLN8...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·Z·A·吴，SY·I·章，
申请(专利权)人：淡马锡生命科学研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：新加坡,SG