一种含有血链球菌素的抗白色念珠菌组合物及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种含有血链球菌素的抗白色念珠菌组合物及其制备方法，属于微生物制药技术领域。为解决白色念珠菌形成的生物被膜阻碍药物透过、降低药效的问题，本发明专利技术提供了一种含有血链球菌素的抗白色念珠菌组合物，所含药物成分包括血链球菌素、胶原短肽、维生素、薄荷脑、冰片和木糖醇。本发明专利技术组合物为粘性凝胶敷料，能够长时间粘附于粘膜患处，使更多药物成分穿透白色念珠菌的生物被膜而发挥药效，解决了现有剂型作用时间短的问题。血链球菌素以纳米级脂质体形式均匀分散在粘性凝胶敷料中，更易穿透生物被膜而直接作用于白色念珠菌菌体，药效发挥的更彻底，能够快速达到降低白色念珠菌粘附力，抑制并杀灭白色念珠菌的效果。

【技术实现步骤摘要】
一种含有血链球菌素的抗白色念珠菌组合物及其制备方法
本专利技术属于微生物制药
，尤其涉及一种含有血链球菌素的抗白色念珠菌组合物及其制备方法。
技术介绍
白色念珠菌是一种常见的条件致病菌，在机体各项机能正常的前体条件下，致病菌是不会引起疾病的，但如果口腔菌群平衡遭到破坏或机体免疫力降低，白色念珠菌会在口腔黏膜下甚至是深层部分过度生长，导致机体感染白色念珠菌。近年来，由于免疫抑制剂、广谱抗生素的使用以及严重全身系统性疾病等免疫功能低下的患者数量不断增加，导致条件致病真菌引起的感染病例逐年上升，且致病真菌对现有抗真菌药逐渐产生了耐药性，使得真菌感染易发生而难控制。口腔念珠菌病是由念珠菌感染所引起的口腔黏膜疾病，按其主要病变部位可分为：念珠菌口炎、念珠菌唇炎与口角炎、慢性黏膜皮肤念珠菌病。急性伪膜型口腔念珠菌病患者口腔黏膜会出现白色伪膜，刮去伪膜后会出现充血发红的创面，患者会有口干、烧灼的感觉。白色伪膜即为白色念珠菌形成的生物被膜，是一个微生物聚集群体，是微生物不可逆地与组织表面接触，由自身产生的细胞外基质包裹着活菌细胞形成的微生态，其具有高度耐药性，是相对于单个分散游离状态真菌细胞而言的另一种独特的微生物生存方式。典型的白色念珠菌形成的生物被膜为基底数层酵母样细胞黏附于组织表面，其上方由细胞外基质覆盖，内有大量菌丝样细胞生长。细胞外基质形成的机械屏障起到阻碍药物透过生物被膜作用于白色念珠菌的作用，尤其是现有的喷剂、搽剂等剂型，施于患处后不能长时间停留在患处表面，尚未透过生物被膜起到药物作用就被唾液稀释或冲散，不能充分的发挥药效。因此，以生物被膜形式生长并表现出高度耐药性给口腔念珠菌病的临床治疗带来了很大难度。
技术实现思路
为解决白色念珠菌形成的生物被膜阻碍药物透过、降低药效的问题，本专利技术提供了一种含有血链球菌素的抗白色念珠菌组合物及其制备方法。本专利技术的技术方案：一种含有血链球菌素的抗白色念珠菌组合物，该组合物为粘性凝胶敷料，血链球菌素以纳米级脂质体形式均匀分散在所述粘性凝胶敷料中，该组合物主要包括如下质量份的组分：血链球菌素2～3份、PBS缓冲溶液6～9份、吐温800.5～1份、聚乳酸-羟基乙酸共聚物10～15份、胶原短肽1～5份、维生素B51～3份、薄荷脑1～3份、冰片1～2份、木糖醇2～5份、N-羟基琥珀酰亚胺0.5～1份、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐1～2份、多巴胺1.5～3份和质量浓度为2～5％的透明质酸钠水溶液100份。进一步的，该组合物主要包括如下质量份的组分：血链球菌素3份、PBS缓冲溶液9份、吐温801份、聚乳酸-羟基乙酸共聚物15份、胶原短肽3份、维生素B52份、薄荷脑2份、冰片1份、木糖醇3份、N-羟基琥珀酰亚胺1份、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐2份、多巴胺3份和质量浓度为5％的透明质酸钠水溶液100份。进一步的，所述血链球菌素脂质体的粒径为200～500nm，所述血链球菌素脂质体中血链球菌素的载药量为10～11％。一种含有血链球菌素的抗白色念珠菌组合物的制备方法，包括如下步骤：步骤一、提取血链球菌素：将已传纯并鉴定后的血链球菌进行增殖培养，将血链球菌接种于BHI培养基中于37℃厌氧条件下恒温静置培养48h，将培养液置于4℃条件下离心收集、洗涤菌体沉淀；将所得菌体分散于PBS缓冲溶液中制成菌悬液，冰水浴条件下对菌悬液进行超声细胞破碎，4℃条件下离心收集细胞破碎液上清液；向所得细胞破碎液上清液中加入硫酸铵使上清液中的硫酸铵达到60％的饱和度并将其置于4℃盐析，所得第一盐析液于4℃离心，分别获得第一盐析上清液和第一盐析沉淀，将第一盐析沉淀妥善保管，将第一盐析上清液在原有硫酸铵60％饱和度的基础上再次加入硫酸铵将其饱和度调至70％并置于4℃条件下再次盐析，所得第二盐析液于4℃离心，收集离心第二盐析沉淀，将所述第一盐析沉淀和第二盐析沉淀合并后用PBS缓冲溶液溶解并经SephadexG-25过柱除盐，收集过柱后的液体进行透析浓缩、冻干后即得到血链球菌素，于-80℃保存备用；步骤二、制备血链球菌素脂质体：将聚乳酸-羟基乙酸共聚物与乙酸乙酯按一定体积比混合均匀，形成油相；将步骤一所得血链球菌素、吐温-80加入PBS缓冲溶液中，混合均匀形成水相；按一定体积比将水相滴入油相并经高压乳匀在一定压力下形成微乳液，乙酸乙酯挥发后即得到纳米级血链球菌素脂质体；步骤三、制备含有血链球菌素的抗白色念珠菌组合物：向质量浓度为2～5％的透明质酸钠水溶液加入步骤二所得血链球菌素脂质体、胶原短肽、维生素B5、薄荷脑、冰片、木糖醇，搅拌12h后加入N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，充分搅拌反应得到透明质酸基质，在惰性气体保护下向所得混合溶液中滴加盐酸多巴胺水溶液，搅拌反应18～24h，得到凝胶敷料状的含有血链球菌素的抗白色念珠菌组合物。进一步的，步骤一所述离心收集菌体沉淀是以12000g/min离心30min，所述洗涤菌体是将离心收集到的菌体用1×PBS缓冲溶液振荡洗涤，再以12000g/min离心30min收集菌体，重复洗涤三次。进一步的，步骤一所述菌悬液的菌体浓度为50mg/mL，所述超声破碎的频率为20～25KHz，超声功率为150W，超声时工作时间为4s，间歇时间为8s，共处理30min，所述离心收集细胞破碎上清液的离心条件为15000g/min离心45min。进一步的，步骤一所述盐析时间均为12h，所述第一盐析液和第二盐析液的离心条件均为15000g/min离心45min，所得血链球菌素的纯度为89.7％。进一步的，步骤二所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物中聚乳酸和羟基乙酸的质量比为1:1，聚乳酸-羟基乙酸共聚物的平均分子量为5000～15000；所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物与乙酸乙酯的体积比为1:10～12。进一步的，步骤二所述水相与油相的体积比为1:10～15，所述水相滴入油相的过程是在300r/min持续搅拌的状态下进行，且滴加完成后继续搅拌3～5h；所述高压乳匀的压力为500bar，处理时间为20min，所述血链球菌素脂质体的粒径为200～500nm，所述血链球菌素脂质体的载药量为10～11％。进一步的，步骤三所述搅拌转速均为800～1000r/min，所述加入N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐后的搅拌时间为30min，所述惰性气体为氮气，所得凝胶敷料状的含有血链球菌素的抗白色念珠菌组合物中血链球菌素的载药量为1.5～2.0％。本专利技术的有益效果：本专利技术提供的含有血链球菌素的抗白色念珠菌组合物以血链球菌素为主要抗真菌成分，胶原短肽和微生物B5用于促进患处伤口的愈合、辅助患处黏膜的恢复，薄荷脑和冰片用于缓解患者口干、灼热的的症状，木糖醇作为甜味剂用于改善组合物的味道。本专利技术将组合物设计成粘性凝胶敷料，由于多巴胺发生自聚合并与透明质酸相交联所形成的敷料粘性较高，能够长时间的牢固粘附于粘膜患处，使更多分散于凝胶敷料中的药物成分穿透白色念珠菌的生物被膜而发挥药效，因此解决了现有喷剂等剂型易被唾液稀释、冲走而作用时间短的问题。本专利技术凝胶敷料能够在患处形成保水性薄膜，进一步缓解口干、灼热的症状。本专利技术所用制备凝本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含有血链球菌素的抗白色念珠菌组合物，其特征在于，该组合物为粘性凝胶敷料，血链球菌素以纳米级脂质体形式均匀分散在所述粘性凝胶敷料中，该组合物主要包括如下质量份的组分：血链球菌素2～3份、PBS缓冲溶液6～9份、吐温800.5～1份、聚乳酸‑羟基乙酸共聚物10～15份、胶原短肽1～5份、维生素B51～3份、薄荷脑1～3份、冰片1～2份、木糖醇2～5份、N‑羟基琥珀酰亚胺0.5～1份、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐1～2份、多巴胺1.5～3份和质量浓度为2～5％的透明质酸钠水溶液100份。

【技术特征摘要】
1.一种含有血链球菌素的抗白色念珠菌组合物，其特征在于，该组合物为粘性凝胶敷料，血链球菌素以纳米级脂质体形式均匀分散在所述粘性凝胶敷料中，该组合物主要包括如下质量份的组分：血链球菌素2～3份、PBS缓冲溶液6～9份、吐温800.5～1份、聚乳酸-羟基乙酸共聚物10～15份、胶原短肽1～5份、维生素B51～3份、薄荷脑1～3份、冰片1～2份、木糖醇2～5份、N-羟基琥珀酰亚胺0.5～1份、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐1～2份、多巴胺1.5～3份和质量浓度为2～5％的透明质酸钠水溶液100份。2.根据权利要求1所述一种含有血链球菌素的抗白色念珠菌组合物，其特征在于，该组合物主要包括如下质量份的组分：血链球菌素3份、PBS缓冲溶液9份、吐温801份、聚乳酸-羟基乙酸共聚物15份、胶原短肽3份、维生素B52份、薄荷脑2份、冰片1份、木糖醇3份、N-羟基琥珀酰亚胺1份、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐2份、多巴胺3份和质量浓度为5％的透明质酸钠水溶液100份。3.根据权利要求1或2所述一种含有血链球菌素的抗白色念珠菌组合物的制备方法，其特征在于，所述血链球菌素脂质体的粒径为200～500nm，所述血链球菌素脂质体中血链球菌素的载药量为10～11％。4.一种如权利要求1-3任一所述含有血链球菌素的抗白色念珠菌组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、提取血链球菌素：将已传纯并鉴定后的血链球菌进行增殖培养，将血链球菌接种于BHI培养基中于37℃厌氧条件下恒温静置培养48h，将培养液置于4℃条件下离心收集、洗涤菌体沉淀；将所得菌体分散于PBS缓冲溶液中制成菌悬液，冰水浴条件下对菌悬液进行超声细胞破碎，4℃条件下离心收集细胞破碎液上清液；向所得细胞破碎液上清液中加入硫酸铵使上清液中的硫酸铵达到60％的饱和度并将其置于4℃盐析，所得第一盐析液于4℃离心，分别获得第一盐析上清液和第一盐析沉淀，将第一盐析沉淀妥善保管，将第一盐析上清液在原有硫酸铵60％饱和度的基础上再次加入硫酸铵将其饱和度调至70％并置于4℃条件下再次盐析，所得第二盐析液于4℃离心，收集离心第二盐析沉淀，将所述第一盐析沉淀和第二盐析沉淀合并后用PBS缓冲溶液溶解并经SephadexG-25过柱除盐，收集过柱后的液体进行透析浓缩、冻干后即得到血链球菌素，于-80℃保存备用；步骤二、制备血链球菌素脂质体：将聚乳酸-羟基乙酸共聚物与乙酸乙酯按一定体积比混合均匀，形成油相；将步骤一所得血链球菌素、吐温-80加入PBS缓冲溶液中，混合均匀形成水相；按一定体积比将水...

【专利技术属性】
技术研发人员：马晟利，李慧，
申请(专利权)人：马晟利，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23