一种解脲脲原体、沙眼衣原体和淋球菌三联检试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种解脲脲原体、沙眼衣原体和淋球菌三联检试剂盒，具体的本发明专利技术将筛选出的针对解脲脲原体、沙眼衣原体和淋球菌的不同引物、探针进行组合测试，获得了具有较佳特异性和灵敏度的针对解脲脲原体、沙眼衣原体和淋球菌的多重检测体系，可实现单管检测3种病原体，一次试验完成3种病原体的测试，极大降低了检测的工作量。

A kit for joint detection of Ureaplasma urealyticum, Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae

【技术实现步骤摘要】
一种解脲脲原体、沙眼衣原体和淋球菌三联检试剂盒
本专利技术属于分子诊断领域，具体地说，本专利技术涉及一种解脲脲原体、沙眼衣原体和淋球菌三联检试剂盒。
技术介绍
解脲脲原体(Ureaplasmaurealyticum，Uu)是一类介于细菌和病毒之间，没有细胞壁的原核微生物。目前已知与人类疾病有关的有14种血清型，分为两个生物群，即微小脲原体(U.parvum，UPA)包括血清型1，3，6，14；解脲脲原体(U.urealyticum，UUR)包括其余10种血清型。Uu广泛存在于健康人群泌尿生殖道中，但同时也与很多疾病有关，如非淋球菌性尿道炎、绒毛膜羊膜炎等，一定条件下能引起泌尿系统感染和不孕症。解脲脲原体多寄生在男性尿道、阴茎包皮和女性阴道。可引起男性前列腺炎或附睾炎、女性阴道炎、宫颈炎，并可感染胎儿导致流产、早产及低体重胎儿，也能引起新生儿呼吸道和中枢神经系的感染。目前Uu的致病机制还不清楚。实验室诊断方法有分离培养、检测解脲脲原体抗原或核酸成分。沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis，CT)是引起非淋菌性尿道炎的主要病原体，除能引起化脓性宫颈炎、阴道炎、尿道炎外，还能经生殖道上行感染，有可能引起急、慢性输卵管炎，子宫内膜炎等盆腔炎症，患病人群以青壮年为主。感染后，潜伏期为数天到数月，一般是1～3周。感染沙眼衣原体后妇女最常见的是引起化脓性宫颈炎，出现脓性白带增多，可伴有外阴瘙痒。如果引起尿道炎时，约一半病人出现尿急、尿频和排尿困难。淋球菌(Neisseriagonorrhoeae，NG)为引发淋病的病原体，存在于急性尿道炎与阴道炎的脓性分泌物的白细胞中，形态染色类似于脑膜炎球菌。这种病菌拥有自我调节能力，能够通过变异获得抗药性，或者使药物的疗效下降，并且它正在对越来越多种类的抗生素发展出免疫力。人类是淋球菌唯一的自然宿主，淋病主要由性接触而传播。淋球菌侵入泌尿生殖系统繁殖，男性发生尿道炎，女性引起尿道炎和子宫颈炎。如治疗不彻底，可扩散至生殖系统。胎儿可经产道感染造成新生儿淋病性急性结膜炎。人类对淋球菌无自然免疫力，均易感，病后免疫力不强，不能防止再感染。因此，本领域技术人员致力于开发简单、方便、快捷且成本较低的上述致病菌检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供解脲脲原体、沙眼衣原体和淋球菌的三联检试剂盒及检测方法。本专利技术的第一方面，提供了一种用于检测解脲脲原体、沙眼衣原体和淋球菌的PCR引物对组，所述引物对组包括：第一引物对，所述第一引物对包括如SEQIDNO.:1所示的正向引物；和，如SEQIDNO.:2所示的反向引物；第二引物对，所述第二引物对包括如SEQIDNO.:4所示的正向引物；和，如SEQIDNO.:5所示的反向引物；以及第三引物对，所述第三引物对包括如SEQIDNO.:7所示的正向引物；和，如SEQIDNO.:8所示的反向引物。在另一优选例中，所述引物对组还包括：第四引物对，所述第四引物对包括如SEQIDNO.:10所示的正向引物；和，如SEQIDNO.:11所示的反向引物。本专利技术的第二方面，提供了一种用于检测解脲脲原体、沙眼衣原体和淋球菌的探针组，所述探针组包括：如SEQIDNO.:3所示的第一探针。在另一优选例中，所述探针组还包括：如SEQIDNO.:6所示的第二探针。在另一优选例中，所述探针组还包括：如SEQIDNO.:9所示的第三探针。在另一优选例中，所述探针组还包括：如SEQIDNO.:12所示的第四探针。本专利技术的第三方面，提供了一种用于检测解脲脲原体、沙眼衣原体和淋球菌的试剂盒，所述试剂盒包括本专利技术第一方面所述的PCR引物对组。在另一优选例中，所述试剂盒还包括本专利技术第二方面所述的探针组。在另一优选例中，所述试剂盒包括PCR反应液，所述PCR反应液包括：所述第一引物对、和所述第一探针；所述第二引物对、和所述第二探针；所述第三引物对、和所述第三探针。在另一优选例中，所述PCR反应液还包括所述第四引物对、和所述第四探针。在另一优选例中，所述PCR反应液还包括dNTPs、和/或PCR缓冲液。在另一优选例中，所述试剂盒还包括PCR酶系，所述PCR酶系包括选自下组的一种或多种组分：热启动Taq酶、和UNG酶。在另一优选例中，所述试剂盒还包括阴性质控品。在另一优选例中，所述试剂盒还包括阳性质控品。本专利技术的第四方面，提供了一种检测解脲脲原体、沙眼衣原体和淋球菌的方法，所述方法包括步骤：(1)提供待检测样本，所述样本中含有解脲脲原体、沙眼衣原体和淋球菌的基因；(2)制备扩增反应体系，进行扩增反应：其中，所述扩增反应体系包括步骤(1)提供的待检测样本、本专利技术第一方面所述的引物对组、和本专利技术第二方面所述的探针组。在另一优选例中，所述步骤(2)中在实时荧光PCR仪中进行扩增反应。在另一优选例中，所述方法为非诊断目的。本专利技术的第五方面，提供了本专利技术第一方面所述的引物对组、和本专利技术第二方面所述的探针组的用途，用于制备检测试剂盒，所述检测试剂盒用于检测解脲脲原体、沙眼衣原体，和/或淋球菌。应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附图说明图1.解脲脲原体检测限PCR测试结果；图2.沙眼衣原体检测限PCR测试结果；图3.淋球菌检测限PCR测试结果；图4.内标PCR测试结果；图5.解脲脲原体、沙眼衣原体和淋球菌特异性PCR测试结果；图6.解脲脲原体、沙眼衣原体和淋球菌特异性检测内标PCR测试结果；图7.解脲脲原体精密度PCR测试结果；图8.沙眼衣原体精密度PCR测试结果；图9.淋球菌精密度PCR测试结果；图10.解脲脲原体准确性PCR测试结果；图11.沙眼衣原体准确度PCR测试结果；图12.淋球菌准确度PCR测试结果；图13.解脲脲原体干扰性PCR测试结果；图14.沙眼衣原体干扰性PCR测试结果；图15.淋球菌干扰性PCR测试结果。图16.多重检测UU对照引物对1-UU。图17.多重检测UU对照引物对1-CT。图18.CT引物对2检测结果。图19.多重检测CT通道(CT引物对3)。具体实施方式本专利技术人通过广泛而深入的研究，人工设计多对引物和探针，再对其进行优化选择并验证，最后将筛选出的针对各病原体的不同引物、探针进行组合测试，获得了具有较佳特异性和灵敏度的针对解脲脲原体、沙眼衣原体和淋球菌的多重检测体系。在此基础上，完成了本专利技术。在描述本专利技术之前，应当理解本专利技术不限于所述的具体方法和实验条件，因为这类方法和条件可以变动。还应当理解本文所用的术语其目的仅在于描述具体实施方案，并且不意图是限制性的，本专利技术的范围将仅由所附的权利要求书限制。除非另外定义，否则本文中所用的全部技术与科学术语均具有如本专利技术所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。如本文所用，在提到具体列举的数值中使用时，术语“约”意指该值可以从列举的值变动不多于1％。例如，如本文所用，表述“约100”包括99和101和之间的全部值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。虽然在本专利技术的实施或测试中可以使用与本专利技术中所述相似或等价的任何方法和材料，本文在此处例举优选的方法和材料。实时荧光定量PCR本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测解脲脲原体、沙眼衣原体和淋球菌的PCR引物对组，其特征在于，所述引物对组包括：第一引物对，所述第一引物对包括如SEQ ID NO.:1所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.:2所示的反向引物；第二引物对，所述第二引物对包括如SEQ ID NO.:4所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.:5所示的反向引物；以及第三引物对，所述第三引物对包括如SEQ ID NO.:7所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.:8所示的反向引物。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测解脲脲原体、沙眼衣原体和淋球菌的PCR引物对组，其特征在于，所述引物对组包括：第一引物对，所述第一引物对包括如SEQIDNO.:1所示的正向引物；和，如SEQIDNO.:2所示的反向引物；第二引物对，所述第二引物对包括如SEQIDNO.:4所示的正向引物；和，如SEQIDNO.:5所示的反向引物；以及第三引物对，所述第三引物对包括如SEQIDNO.:7所示的正向引物；和，如SEQIDNO.:8所示的反向引物。2.如权利要求1所述的引物对组，其特征在于，所述引物对组还包括：第四引物对，所述第四引物对包括如SEQIDNO.:10所示的正向引物；和，如SEQIDNO.:11所示的反向引物。3.一种用于检测解脲脲原体、沙眼衣原体和淋球菌的探针组，其特征在于，所述探针组包括：如SEQIDNO.:3所示的第一探针；以及选自下组的一种或多种探针：如SEQIDNO.:6所示的第二探针；如SEQIDNO.:9所示的第三探针；和如SEQIDNO.:12所示的第四探针。4.一种用于检测解脲脲原体、沙眼衣原体和淋球菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括本发明第一方面所述的PCR引物对组。5.如权利要求4所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋析文，范健，刘悦，彭海龙，廖芷卉，
申请(专利权)人：中山大学达安基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44