一种铁皮石斛药材的质量检测方法技术

本发明专利技术公开了一种铁皮石斛药材的质量检测方法，以紫外分光光度法测定药材中黄酮碳苷的含量，以黄酮碳苷类化合物为对照品，超声提取，多次用中极性有机溶剂和水饱和正丁醇萃取，得到总黄酮碳苷，然后用显色法含量测定。本发明专利技术方法简便、易行、重复性好，能够确切反映铁皮石斛药材中总黄酮碳苷的含量，进一步完善了铁皮石斛药材的质量标准，弥补了铁皮石斛质量评价中缺乏对以碳苷黄酮为代表的黄酮类特征成分的检测方法的不足，使铁皮石斛药材的质量检测技术更科学、合理。采用本发明专利技术所述检测方法可有效控制铁皮石斛药材的质量，从而确保其临床应用的安全性、稳定性和有效性。

A method for quality control of Dendrobium officinale

【技术实现步骤摘要】
一种铁皮石斛药材的质量检测方法
本专利技术属于医药
，涉及一种铁皮石斛药材的质量检测方法。
技术介绍
铁皮石斛是兰科石斛属多年生草本植物，其主要药用部位是新鲜或干燥茎，主要分布于安徽、浙江、广西、湖南、云南、贵州等地，是传统名贵中药材。铁皮石斛具有益胃生津，滋阴清热之功效，用于阴伤津亏，口干烦渴，胃阴不足，食少干呕，病后虚热不退，阴虚火旺，骨蒸劳热，目暗不明，筋骨痿软等症。《神农本草经》将其列为上品，道家养生经典《道藏》将它誉为“中华九大仙草”之首。通过文献调研，铁皮石斛的主要药理成分及其特征为：(1)多糖(特征性成分)：多糖是铁皮石斛中的主要特征性成分，其相对分子量在10-70万左右，主要为D－甘露糖和D－葡萄糖聚合而成的杂多糖。各地铁皮石斛总多糖含量维持在30％左右，2015版药典规定了检测方法和含量要求。(2)挥发油(特征性成分)：关于不同产地挥发油的研究不多，且挥发油中脂肪族占比较高，尤其是水蒸气蒸馏法、溶剂法提取时，脂肪族(如油酸等)占50％以上，含量较高的有亚油酸甲酯(5.852％)、二十五烷(10.132％)、22，23-二氢豆甾醇(11.093％)和己二酸二辛酯(21.115％)等。采用固相微萃取法，发现主要成分为反-2-辛烯醛(29.96％)、β-紫罗兰酮(15.78％)、芳樟醇(5.36％)、壬醛(4.39％)、β-环柠檬醛(3.40％)和正癸醛(3.14％)等。(3)茋类化合物(Stilbenoids，特征性成分，其中有些被称为石斛素)，包括a)单联苄类(又称二苯乙烯，Stilbene)；b)联苄衍生物类；c)菲类(Phenanthrene)。茋类化合物是铁皮石斛中的特征性成分，但对其进行含量测定的研究较少。陈贤良等专利技术了联苄类含量测定的方法(201410542575.6)。另有江西九草铁皮石斛科技创新有限公司获得了茋类化合物有效部位的制备专利1项(201610464044.9)。安徽农业大学申请了一种检测铁皮石斛中石斛酚的方法(201611261842.8)；重庆安尚农业科技发展有限公司申请了铁皮石斛中提取毛兰素的方法(201510660801.5)。在三个小类中，根据植物化学研究以及HPLC检测多个联苄类化合物的结果，单联苄类含量高，联苄衍生物类含量次之，菲类含量较少。(4)黄酮类，包括二氢黄酮(如柚皮素，非特征性成分)、黄酮碳苷(特征性成分)等。铁皮石斛中普遍含有二氢黄酮柚皮素，而柚皮素却不是铁皮石斛的特征性成分，它大量存在于柑橘皮中，还被普遍作为多种中药及食品的定量成分，如化橘红、枳壳、降香、枳实、松针、柚子、艾蒿等。黄酮碳苷，是一类以碳碳键而非碳氧键连接的黄酮苷类化合物，结构具有特点，是铁皮石斛中存在的一类大极性的特征性成分。已发现有包括夏佛托苷(schaftoside)、异夏佛托苷(isoschaftoside)等的约10种黄酮碳苷类成分，其苷元均为芹菜素。浙江中医药大学吕圭源等利用指纹图谱对浙江铁皮石斛中包括柚皮素和黄酮碳苷多个化合物进行了检测，中国中医科学院、寿仙谷等单位对不同产地黄酮类化合物进行了检测。结果表明，黄酮类化合物地域区别、种间区别较为明显。浙江黛君生物医药科技有限公司申请了铁皮石斛中黄酮化合物的提取方法(201710249998.2)，但非黄酮碳苷。上海中医药大学获得了一种铁皮石斛的薄层鉴别方法专利，检测其中的三种黄酮碳苷成分。(201410489539.8)。尚未有报道检测黄酮碳苷类成分的总含量的方法。就检测方法而言，其中HPLC、HPLC-MS法检测单个或几个黄酮碳苷的方法已有报道，但较为繁琐。我们深入研究了以芹菜素为苷元的黄酮碳苷的性质，建立一种基于紫外、化学反应的紫外法测定总黄酮碳苷的方法，能够铁皮石斛进行总黄酮碳苷含量检测，研究铁皮石斛的质量。(5)倍半萜生物碱类(特征性成分)此类成分虽为特征性成分，但含量极低，在其他品种石斛中含量较高。安徽农业大学申请了一种铁皮石斛总生物碱含量的检测方法(201810469952.6)。(6)木酯素(苷)类(非特征性成分)木酯素在多种植物中均存在，且在本品种不成群系，为非特征性成分。(7)简单酚酸类(非特征性成分)包括多种简单酚酸及其苷类成分，由于各种植物中均存在此类成分。综上所述，本专利技术为绕铁皮石斛中含有的黄酮碳苷类特征成分，开展总黄酮碳苷的含量检测方法研究。黄酮碳苷是指糖直接与黄酮母体以C-C键联结的化合物，在自然界分布较少。黄酮碳苷类化合物已被证明具有保肝、抗氧化、抗甲状腺、杀虫、抗病毒等多种活性(吴新安，赵毅民，天然黄酮碳苷及其活性研究进展，解放军药学学报，2005，21，135-138)，是铁皮石斛的药效成分之一(周桂芬，吕圭源，铁皮石斛不同部位黄酮碳苷类成分及清除DPPH自由基能力比较研究，中国中药杂志，2012,37,1536-1540)。测定铁皮石斛中总黄酮碳苷的含量，将有助于进一步体现这类大极性特征成分在药材质量评价方面的用途，为建立科学、全面反映铁皮石斛药材质量的检测方法做出贡献。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种铁皮石斛药材的质量检测方法，主要涉及一种铁皮石斛药材中总黄酮碳苷的含量检测方法，可有效控制铁皮石斛药材的质量，从而确保其临床应用的安全性、稳定性和有效性。为实现上述目的，本专利技术通过对铁皮石斛中含有的以芹菜素为苷元的黄酮碳苷的系列研究，优选了提取工艺、除去黄酮氧苷的水解工艺、黄酮苷显色方法等，最终提供如下技术方案：一种铁皮石斛药材的质量检测方法，采用紫外分光光度法测定药材中总黄酮碳苷的含量,以碳苷黄酮类化合物为对照品，采用高浓度醇水系统超声提取铁皮石斛药材，依次用中极性有机溶剂和水饱和正丁醇萃取，将正丁醇萃取物用1M盐酸甲醇溶液水解，再依次用中极性有机溶剂和水饱和正丁醇萃取以得到总黄酮碳苷，然后用三乙胺显色法在400nm用外标法进行总碳苷黄酮的含量测定。所述的铁皮石斛药材的质量检测方法，具体检测步骤如下：1)将铁皮石斛粉碎，过80目筛，精密量取1g铁皮石斛粉末，以重量/体积比为13-100倍量的高浓度醇水系统超声提取10-60min，滤过，残渣用溶剂洗涤，合并滤液和洗液，置于100mL容量瓶，定容。摇匀，作为提取液。精密量取20mL提取液，蒸干，用10mL水复溶，超声溶解，转移，再用5mL水润洗，一并转移。用15mL中极性有机溶剂萃取3次，弃有机相，再用15mL水饱和正丁醇萃取3次，弃水相。蒸干正丁醇相后，加入20mL1M盐酸甲醇溶液，在95℃下酸解80min。蒸干酸液，用10mL水复溶，超声溶解，转移，再用5mL水润洗，一并转移，使用15mL中极性有机溶剂萃取3次，弃有机相，再用15mL水饱和正丁醇萃取3次，弃水相。蒸干正丁醇相后，先加入10mL60％乙醇超声溶解，再加入10mL1％三乙胺溶液。配成供试液。上述提取用高浓度醇水系统包括但不限于浓度为60％-95％的甲醇水溶液体系、乙醇水溶液体系；上述萃取用中极性有机溶剂包括但不限于三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯以及他们的二元混合物。2)对照品溶液的制备：精密称取铁皮石斛中含有的黄酮碳苷类化合物标准对照品，加60％乙醇溶解制成溶液；上述黄酮碳苷类化合物对照品，包括但不限于异夏佛塔苷、夏佛塔苷等铁皮石斛中含有的以芹本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种铁皮石斛药材的质量检测方法，其特征在于，采用紫外分光光度法,以铁皮石斛中含有的黄酮碳苷类化合物为对照品，采用高浓度醇水系统超声提取，依次用中极性有机溶剂和水饱和正丁醇萃取，取正丁醇萃取物再用1M盐酸甲醇溶液水解，再依次用中极性有机溶剂和水饱和正丁醇萃取以得到总黄酮碳苷，最后以外标法对铁皮石斛中的总黄酮碳苷进行含量测定。

【技术特征摘要】
1.一种铁皮石斛药材的质量检测方法，其特征在于，采用紫外分光光度法,以铁皮石斛中含有的黄酮碳苷类化合物为对照品，采用高浓度醇水系统超声提取，依次用中极性有机溶剂和水饱和正丁醇萃取，取正丁醇萃取物再用1M盐酸甲醇溶液水解，再依次用中极性有机溶剂和水饱和正丁醇萃取以得到总黄酮碳苷，最后以外标法对铁皮石斛中的总黄酮碳苷进行含量测定。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，具体检测步骤如下：1)将铁皮石斛粉碎，过80目筛，精密量取1g铁皮石斛粉末，以重量/体积比为13-100倍量的高浓度醇水系统超声提取10-60min，滤过，残渣再用溶剂洗涤，合并滤液和洗液，置于100mL容量瓶，定容，摇匀，作为提取液；取20mL提取液，蒸干，用10mL水复溶，超声溶解，转移，再用5mL水润洗，一并转移，用15mL中极性有机溶剂萃取3次，弃有机相，再用15mL水饱和正丁醇萃取3次，弃水相，蒸干正丁醇相后，加入20mL1M盐酸甲醇溶液，在95℃下酸解80min，蒸干酸液，用10mL水复溶，超声溶解，转移，再用5mL水润洗，一并转移，使用15mL中极性有机溶剂萃取3次，弃有机相，再用15mL水饱和正丁醇萃取3次，弃水相；蒸干正丁醇相后，先加入10mL60％乙醇超声溶解，再加入10mL1％三乙胺溶液，配成供试液；2)对照品溶液的制备：取黄酮碳苷类化合物对照品，加60％乙醇溶解制成溶液；3)测定法：以60％乙醇：1％三乙胺＝1:1的溶液为空白参比溶剂；采用紫外分光光度法，测试在400nm波长处的吸光度，空白溶液无干扰；用标准曲线法计算含量。3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，更为具体检测步骤如下：1)将铁皮石斛粉碎，过80目筛，取1g铁皮石斛粉末，置于锥形瓶中，加入50mL90％甲醇溶液，超声提取40min...

【专利技术属性】
技术研发人员：甘礼社，方昊天，莫建霞，诸凯凯，毛碧增，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33