一种卡贝缩宫素原料药有关物质检测方法技术

本发明专利技术属于医药技术领域，涉及一种卡贝缩宫素原料药有关物质分析方法。本发明专利技术所述的卡贝缩宫素原料药有关物质分析方法，包括以下步骤：步骤1：取卡贝缩宫素原料药和杂质对照品各适量，用20%乙腈溶液稀释制成系统适用性溶液和供试品溶液；步骤2：以苯基键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器，选用乙腈和缓冲液为流动相，梯度洗脱；检测波长为220nm；流速为1.0ml/min；进样体积为20μl；柱温为35~40℃。本方法有效地解决了卡贝缩宫素原料药有关物质检测和分离的问题，专属性强、重复性好、准确度高，能保证卡贝缩宫素原料药中有关物质的可控性，提高产品质量。

A Method for the Detection of Related Substances in Carboxytocin Raw Material

【技术实现步骤摘要】
一种卡贝缩宫素原料药有关物质检测方法
本专利技术属于医药
，涉及一种活性多肽原料药的分析检测方法，特别是涉及卡贝缩宫素原料药有关物质检测方法。
技术介绍
卡贝缩宫素(Carbetocin)，其化学名称为：去氨-2-氧-甲基酪氨酸-1-κ缩宫素，分子式：C45H69N11O12S，分子量为988.17。其结构式：卡贝缩宫素是一种合成的具有激动剂性质的长效催产素九肽类似物。硬膜外或腰麻下剖腹产术后可以立即单剂量静脉给药，以预防子宫张力不足和产后出血。卡贝缩宫素的临床和药理特性与天然产生的催产素类似，可以与子宫平滑肌的催产素受体结合，引起子宫的节律性收缩，在原有的收缩基础上，增加其频率和增加子宫张力。在非妊娠状态下，子宫的催产素受体含量很低，在妊娠期间增加，分娩时达高峰。因此卡贝缩宫素对非妊娠的子宫没有作用，但是对妊娠的子宫和刚生产的子宫具有有效的子宫收缩作用。研究表明，当硬膜外或腰麻下剖腹产术后立即单剂量静脉给予卡贝缩宫素100微克，在预防子宫张力不足和减少产后出血方面，卡贝缩宫素明显优于安慰剂。卡贝缩宫素采用的是多肽固相合成法，其原料药中会夹杂多种杂质，杂质详细情况如下表：上述杂质会影响到卡贝缩宫素的质量，因此有必要对杂质进行含量控制，目前，氨基酸的分析多采用高效液相色谱法(HPLC)，但是不同的方法条件对不同氨基酸的分析结果准确度影响较大。在多肽合成中，为了更好的控制产品质量，须对杂质进行准确的分析，现有技术中，对卡贝缩宫素杂质分析未见报道。为此，本专利技术构建了一种卡贝缩宫素有关物质的分析方法，该方法专属性强、精密度好，准确度高，能将可能的降解杂质和工艺杂质与主成分有效分开，且灵敏度高，可应用于卡贝缩宫素原料药的质量控制，对提高卡贝缩宫素产品质量有重要意义。
技术实现思路
本专利技术提供一种卡贝缩宫素高效液相检测方法，色谱条件如下：以苯基键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器，选用乙腈和缓冲液为流动相，梯度洗脱；其中所述梯度洗脱，方式如下：0～35分钟，乙腈洗脱比例为20％；35～50分钟，乙腈洗脱比例20％~50％；50～55分钟，乙腈洗脱比例为50％；检测波长为220nm；流速为1.0ml/min；进样体积为20μl；柱温为35~40℃。上述方法中，所述的缓冲液选自：己烷磺酸钠缓冲液、庚烷磺酸钠缓冲液，优选庚烷磺酸钠缓冲液。上述方法中，所述的色谱柱为选自：WatersXBridgeBEHPhenyl4.6*100mm5μm；AgilentZORBAXSB-Phenyl4.6*75mm3.5μm；PhenomenexLunaPhenyl-Hexyl4.6*100mm3μm。上述方法中，所述梯度洗脱，方式如下：0～35分钟，乙腈洗脱比例为20％；35～50分钟，乙腈洗脱比例20％~50％；50～55分钟，乙腈洗脱比例为50％；检测波长为220nm；流速为1.0ml/min；进样体积为20μl；柱温为35~40℃。本专利技术还提供一种卡贝缩宫素原料药有关物质检测方法，所述方法步骤如下：步骤一、溶液的制备：空白溶液的制备：20%乙腈水溶液（v/v）；杂质对照品溶液的制备：称取卡贝缩宫素杂质适量，加空白溶剂使溶解并稀释制成杂质对照品溶液；供试品溶液的制备：称取卡贝缩宫素适量，加空白溶剂使溶解并稀释制成供试品溶液；步骤二、高效液相色谱条件的设定：以苯基键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器，选用乙腈和缓冲液为流动相，梯度洗脱：其中所述梯度洗脱，方式如下：0～35分钟，乙腈洗脱比例为20％；35～50分钟，乙腈洗脱比例20％~50％；50～55分钟，乙腈洗脱比例为50％；检测波长为220nm；流速为1.0ml/min；进样体积为20μl；柱温为35~40℃。在上述色谱条件下，精密吸取系统适用性溶液和供试品溶液各20μl，注入色谱仪，记录色谱图。系统适用性溶液的图谱中，各杂质峰与卡贝缩宫素峰分离度均大于1.5。本专利技术提供的卡贝缩宫素原料药有关物质的检测方法，能够有效的检测出卡贝缩宫素及各杂质峰，且分离度都大于1.5，分离效果好，方法专属性强、精密度好，准确度高，且简单易行，操作快捷，在原料药及制剂质量研究方面具有重要的研究价值。附图说明图1：方法学验证空白溶剂图谱图2：方法学验证系统适用性溶液图谱图3：方法学验证检测线溶液图谱图4：方法学验证定量限溶液图谱图5：方法学验证0.2%供试品自身对照溶液图谱图6：方法学验证供试品溶液图谱图7：方法学验证准确度溶液图谱以下通过实施例形式再对本专利技术的内容做进一步详细说明，但不应就此理解为本专利技术上述主题范围内仅限于以下实施例。在不脱离本专利技术上述技术前提下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的相应替换或变更的修改，均包括在本专利技术内。实施例一：色谱柱的选择结论：取杂质对照品溶液和供试品溶液制成混合溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，主成分和后相邻杂质分离度为1.3，无法满足试验要求。实施例二：色谱柱的选择结论：取杂质对照品溶液和供试品溶液制成混合溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，主成分和后相邻杂质分离度为1.1，无法满足试验要求。实施例三：色谱柱的选择结论：取杂质对照品溶液和供试品溶液制成混合溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，主成分和后相邻杂质分离度为1.9，满足试验要求。实施例四：缓冲盐的选择结论：取杂质对照品溶液和供试品溶液制成混合溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，杂质IMP-03和IMP-07分离不开，主成分和后相邻杂质分离度为1.4，无法满足试验要求。实施例五：缓冲盐的选择结论：取杂质对照品溶液和供试品溶液制成混合溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，各杂质均可良好分离，主成分和后相邻杂质分离度为1.9，满足试验要求。实施例六：柱温的选择结论：取杂质对照品溶液和供试品溶液制成混合溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，各杂质均可良好分离，主成分和后相邻杂质分离度为1.5，符合要求，但方法耐用性较差。实施例七：柱温的选择结论：取杂质对照品溶液和供试品溶液制成混合溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，各杂质均可良好分离，主成分和后相邻杂质分离度为1.9，满足试验要求。实施例八：系统适用性与专属性试验溶液配制：稀释剂：20%乙腈水溶液（v/v）杂质储备液：分别称取IMP-0110.36mg、IMP-0210.18mg、IMP-0310.55mg、IMP-0410.49mg、IMP-0510.82mg、IMP-0610.29mg、IMP-0710.17mg，置50ml量瓶中，加0.1%醋酸溶解并稀释至刻度，得各杂质储备液。定位溶液：分别量取各杂质储备液1ml分别置10ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，作为各杂质定位溶液。系统适应性溶液：称取卡贝缩宫素10.25mg于10ml量瓶中，加IMP-01、IMP-02、IMP-03、IMP-04、IMP-05、IMP-06、IMP-07杂质储备液各0.1ml，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适应性溶液。各组分保留时间及分离度：结论：空白溶剂不干扰主峰及杂质峰的检出，主峰与前相邻杂质峰的分离度均大于1.5，系统适应性与专属性符合规定。实施例九：定量限和检测限试验溶液配制稀释剂：20%乙腈水溶液（v/v）定量限溶液：取系统适用性与专属性项本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种卡贝缩宫素高效液相检测方法，其特征在于，采用色谱条件如下：以苯基键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器，选用乙腈和缓冲液为流动相，梯度洗脱；其中所述梯度洗脱，方式如下：0～35分钟，乙腈洗脱比例为20％，35～50分钟，乙腈洗脱比例20％~50％，50～55分钟，乙腈洗脱比例为50％；检测波长为220nm；流速为1.0ml/min；进样体积为20 μl；柱温为35~40℃。

【技术特征摘要】
1.一种卡贝缩宫素高效液相检测方法，其特征在于，采用色谱条件如下：以苯基键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器，选用乙腈和缓冲液为流动相，梯度洗脱；其中所述梯度洗脱，方式如下：0～35分钟，乙腈洗脱比例为20％，35～50分钟，乙腈洗脱比例20％~50％，50～55分钟，乙腈洗脱比例为50％；检测波长为220nm；流速为1.0ml/min；进样体积为20μl；柱温为35~40℃。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的缓冲液选自：己烷磺酸钠缓冲液、庚烷磺酸钠缓冲液，优选庚烷磺酸钠缓冲液。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的色谱柱为选自：WatersXBridgeBEHPhenyl4.6*100mm5μm；AgilentZORBAXSB-Phenyl4.6*75mm3.5μm；PhenomenexLunaPhenyl-Hexyl4.6*100mm3μm。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的梯度洗脱方式为0～35分钟，乙腈洗脱比例为20％；35～50分钟，乙腈洗脱比例20％~50％；50～55分钟，乙腈洗脱比例为50％。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：检测波长为220nm。6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：流速为1.0ml/min。7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：进样体积为20μl。8.根据权利要求1所述的检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐刚，刘大鹏，刘早霞，赵秀林，崔宏琴，
申请(专利权)人：武汉赛沃医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42