一种异紫草酸的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种异紫草酸的制备方法，即4‑(2‑羧基乙烯基)‑2‑(3,4‑二羟基苯基)‑2,3‑2H‑7‑羟基‑3‑苯骈呋喃羧酸‑3‑[1‑羧基‑2‑(3,4‑二羟基)乙基]酯的制备方法，所述方法，步骤如下：步骤1、异紫草酸的富集，步骤2：异紫草酸粗品的制备，步骤3：异紫草酸纯品的制备。本方法步骤少，纯度高，操作简单。

A preparation method of isoshikonic acid

【技术实现步骤摘要】
一种异紫草酸的制备方法
本专利技术涉及一种药物化合物的制备，属于医药化工领域，具体涉及一种异紫草酸的制备方法。技术背景4-(2-羧基乙烯基)-2-(3,4-二羟基苯基)-2,3-2H-7-羟基-3-苯骈呋喃羧酸-3-[1-羧基-2-(3,4-二羟基)乙基]酯，又名异紫草酸，为紫草酸的同分异构体，其结构见结构式Ⅰ：异紫草酸的由来，该化合物最早是利用液质检测到的丹酚酸B水溶液的降解产物，(上述相关信息见文献：Yong-XueGuoetc.，KineticsandmechanismofdegradationoflithospermicacidBinaqueoussolution，JournalofPharmaceuticalandBiomedicalAnalysis43(2007)1249–1255)后由韩国学者在丹酚酸B水溶液的降解产物中分离得到并报道了其核磁数据，其制备方法为：将丹酚酸B溶解在水中，并用HCl调节PH值为4.9。然后将上述水溶液100℃加热24小时，再在39℃下减压浓缩。浓缩液用SephadexLH-20柱色谱(70-230目，2.0*132cm，柱床体积480ml)进行纯化，洗脱液为甲醇/水(8:2，V/V)。所得流份利用薄层色谱或液相分析进行合并，最终得到23个流份。洗脱体积和柱床体积比为1.30-2.40和3.96-4.58的流份合并后使用制备液相(色谱柱：20*250mm，流速：9.9ml/min，检测波长：280nm，流动相：三氟乙酸调节PH值为2.65，A乙腈/水10:90V/V，B乙腈/水10:90V/V，洗脱梯度在70分钟内100％A→100％B，100％B维持15分钟)进行纯化，得到异紫草酸(tR35.33min)。该文献明确了异紫草酸的结构，如结构式Ⅰ所示。(上述相关信息见文献：HyoungJaeLeeetc.，ChemicalconversionsofsalvianolicacidBbydecoctioninaqueoussolution，Fitoterapia83(2012)1196–1204)。该工艺极其复杂、用到多种有机试剂，并且对高压分离设备的依赖性高，制备周期长，成本高。丹参酚酸提取物，包括符合2015版中国药典标准的市售丹参总酚酸提取物(《中国药典》2015年版第1部中397-398页)和现有市场上销售的注射用丹参多酚酸的制剂原料丹参多酚酸提取物(其方法很多种，例如CN105588885A，申请号为201410572435.3
技术介绍
中提到的制备方法)，其中符合2015版中国药典标准的市售丹参总酚酸提取物制备方法为：取丹参、切成小段，加水于80℃提取两次，合并提取液，滤过，滤液于60℃减压浓缩至相对密度为1.18-1.22(50℃)的清膏，放冷，加乙醇使得含醇量为70％，静置12小时，取上清液，减压回收乙醇，并浓缩至稠膏，干燥，即得。经过进一步分析发现丹参酚酸提取物指纹图谱的建立方法为UPLC法，色谱条件如下：仪器：WatersUPLC-PDA色谱柱：WatersAcquityHSST31.8um流动相：A：0.1％甲酸水，B：乙腈梯度洗脱：表1：梯度洗脱表结果见图1，丹参酚酸提取物包括原儿茶醛、丹酚酸D、丹酚酸B、迷迭香酸、丹酚酸Y、紫草酸和异紫草酸等，丹参总酚酸提取物和注射用丹参多酚酸的原料(即丹参多酚酸提取物)二者的图谱均一致。基于上述发现，专利技术人试图从丹参酚酸提取物分离异紫草酸，但是：首先，该化合物在丹参酚酸提取物中的含量很低；第二，该化合物在指纹图谱中紧挨丹酚酸D，表明这两个化合物极性非常接近；第三、酚酸类化合均含有若干个酚羟基，呈弱酸性，易被氧化分解，对分离条件比较苛刻。因此，从丹参酚酸提取物中分离该化合物的难度很大，采用现有技术如上述文献中的方法均无法将丹酚酸D和异紫草酸完全分离。本专利技术的目的是提供一种可以将从丹参酚酸提取物中分离得到异紫草酸的方法，分离制备得到高纯度单体异紫草酸对于进一步研究其药理活性、完善其质量标准，以及相关产品的标准提升具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术提供了一种丹参中异紫草酸的制备方法，步骤如下：步骤1、异紫草酸的富集步骤2：异紫草酸粗品的制备步骤3：异紫草酸纯品的制备其中，所述步骤1、异紫草酸的富集，方法如下：取丹参酚酸提取物，用水溶解，加入反向色谱柱中，用乙醇水溶液洗脱，再次用反向色谱柱固相萃取，用95％乙醇洗脱，洗脱液浓缩至干得到异紫草酸富集物；其中，所述步骤2：异紫草酸粗品的制备，方法如下：异紫草酸富集物去除色素，得到异紫草酸富集物粗品；其中，所述步骤3：异紫草酸纯品的制备，方法如下：采用ODS色谱柱进一步分离纯化得到高纯度异紫草酸单体，所得纯品经干燥即得。优选的，所述步骤1、异紫草酸的富集，方法如下：取丹参酚酸提取物，用1-3倍量的水溶解，加入反向色谱柱中，然后用8-15％乙醇水溶液洗脱，下接液调节pH值为酸性，再次用反向色谱柱固相萃取，然后用90-95％乙醇洗脱，收集下接液，浓缩至干得到异紫草酸富集物；所述步骤2：异紫草酸粗品的制备，方法如下：异紫草酸富集物去除色素，得到异紫草酸富集物粗品；所述步骤3：异紫草酸纯品的制备，方法如下：用乙腈溶解粗品，采用ODS色谱柱分离，流动相为乙腈和含0.01％甲酸的水溶液，体积比为23：77-30：70，流速为4-8BV/h，比照丹参酚酸指纹图谱，收集含异紫草酸的洗脱液，减压浓缩干燥，即得。上述方法中：其中步骤1中，反向色谱柱为MCIGel色谱柱、聚酰胺色谱柱、ODS-C18色谱柱或LH-20凝胶色谱柱，优选为MCIGel色谱柱；所述过柱为两次过柱，第一次，提取物与填料的重量体积比为1：60-1：20；第二次，提取物与填料的重量体积比为1:6-1:3；所述两次下接液，第一次柱子洗脱液需要检测，用HPLC法检测，同时与丹参酚酸提取物的指纹图谱对照，收集含有异紫草酸的洗脱液；第二次直接收集乙醇洗脱液。其中，所述调节pH值的调节剂为甲酸或盐酸；pH值至3.0-4.5；上述方法中：其中步骤2中，去除色素方法为LH20凝胶柱层析或活性炭脱色，优选为LH-20凝胶柱层析；当LH20凝胶柱层析去除色素时，用1-3倍质量体积的45-55％乙醇水溶液完全溶解，加入LH20凝胶柱层析中，用45-55％乙醇洗脱，流速：0.08-0.12BV/h，参考丹参酚酸提取物指纹图谱对照，合并含有异紫草酸的粗品。本专利技术所述方法，具体可以包括以下步骤：步骤1、异紫草酸的富集取丹参酚酸提取物，用1-3倍量的水溶解，加入反向色谱柱中，上样量与色谱柱填料的体积比为1：60-1：20，上样速度为1-3BV/h，然后用8-15％乙醇水溶液洗脱，流速为1-3％，下接液调节pH值2.5-5，再次用反向色谱柱固相萃取，提取物与色谱柱填料的体积比为1:6-1：3，用90-95％乙醇洗脱，流速1-3BV/h，收集洗脱液，浓缩至干得到异紫草酸富集物；步骤2：异紫草酸粗品的制备异紫草酸富集物去除色素，得到异紫草酸富集物粗品；步骤3：异紫草酸纯品的制备用乙腈溶解粗品，乙腈和粗品的质量体积比为1-3：1，采用ODS色谱柱分离，流动相为乙腈和含0.01％甲酸的水溶液，体积比为23：77-30：70，流速为4-8BV/h，比本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种异紫草酸的制备方法，其特征在于，所述方法步骤如下：步骤1：异紫草酸的富集；步骤2：异紫草酸粗品的制备；步骤3：异紫草酸纯品的制备。

【技术特征摘要】
2018.03.23 CN 20181024789231.一种异紫草酸的制备方法，其特征在于，所述方法步骤如下：步骤1：异紫草酸的富集；步骤2：异紫草酸粗品的制备；步骤3：异紫草酸纯品的制备。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中，所述步骤1、异紫草酸的富集，方法如下：取丹参酚酸提取物，用水溶解，加入反向色谱柱中，用乙醇水溶液洗脱，再次用反向色谱柱固相萃取，用95％乙醇洗脱，洗脱液浓缩至干得到异紫草酸富集物；其中，所述步骤2：异紫草酸粗品的制备，方法如下：异紫草酸富集物去除色素，得到异紫草酸粗品；其中，所述步骤3：异紫草酸纯品的制备，方法如下：采用ODS色谱柱进一步分离纯化得到高纯度异紫草酸单体，所得纯品经干燥即得。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，其中步骤1、异紫草酸的富集，方法如下：取丹参酚酸提取物，用1-3倍量的水溶解，加入反向色谱柱中，然后用8-15％乙醇水溶液洗脱，下接液调节pH值为酸性，再次用反向色谱柱固相萃取，然后用90-95％乙醇洗脱，收集下接液，浓缩至干得到异紫草酸富集物。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，其中步骤3：异紫草酸纯品的制备，方法如下：用乙腈溶解粗品，采用ODS色谱柱分离，流动相为乙腈和含0.01％甲酸的水溶液，体积比为23：77-30：70，流速为4-8BV/h，比照丹参酚酸指纹图谱，收集含异紫草酸的洗脱液，减压浓缩干燥，即得。5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，其中步骤1中，反向色谱柱为MCIGel色谱柱、聚酰胺色谱柱、ODS-C18色谱柱或LH-20凝胶色谱柱，优选为MCIGel色谱柱；所述过柱为两次过柱，第一次，提取物与填料的重量体积比为1：60-1：20；第二次，提取物与填料的重量体积比为1:6-1:3；所述两次下接液，第一次柱子洗脱液需要检测，用HPLC法检测，同时与丹参酚酸提取物的指纹图谱对照，收集含有异紫草酸的洗脱液；第二次直接收集乙醇洗脱液，其中，所述调节pH值的调节剂为甲酸或盐酸；pH值至3.0-4.5。6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，其中步骤2中，去除色素方法为LH20凝胶柱层析或活性炭脱色，优选为LH-20凝胶柱层析；当LH20凝胶柱层析去除色素时，用1-3倍质量体积的45-55％乙醇水溶液完全溶解，加入LH20凝胶柱层析中，用45-55％乙醇洗脱，流速：0....

【专利技术属性】
技术研发人员：罗学军，阎红，田介峰，李淑明，宋兆辉，何毅，李伟，岳洪水，周水平，鞠爱春，
申请(专利权)人：天津天士力之骄药业有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12