一种基于UPLC-Q-TOF/MS检测萹蓄中化学成分的方法技术

本发明专利技术提供了一种基于UPLC‑Q‑TOF/MS检测萹蓄中化学成分的方法，包括如下步骤：(1)取萹蓄粉末精密称定，然后与溶剂混合，称定重量；(2)将步骤(1)所得的萹蓄超声破碎，然后将超声过的萹蓄溶液摇匀，离心，过滤，取滤液，即得到待测样品；(3)用超高效液相色谱分离步骤(2)中的待测样品，然后用质谱检测，得化学成分物质峰，用分析软件对所述物质峰进行定性分析。所述方法通过筛选了液相色谱和质谱的条件，实现了快速检测萹蓄中多种化学成分，操作简便、快速、准确、高效，样品前处理简便，简化实验步骤，降低了成本，实现了萹蓄中多成分的快速定性或定量，对于提高萹蓄药材的质量标准有重要意义。

A method based on UPLC-Q-TOF/MS for the determination of chemical constituents in Radix Aconiti

【技术实现步骤摘要】
一种基于UPLC-Q-TOF/MS检测萹蓄中化学成分的方法
本专利技术涉及一种基于UPLC-Q-TOF/MS检测中药材中化学成分中的方法，具体涉及一种基于UPLC-Q-TOF/MS检测萹蓄中化学成分的方法。
技术介绍
萹蓄(PolygonumaviculareL.)为蓼科蓼属一年生草本植物，又名扁竹、竹叶草、扁竹蓼、乌蓼、牛鞭草等。味苦、微寒，具有利尿通淋、止痒、杀虫之功效，临床主要用于小便短赤，热淋涩痛，皮肤湿疹，阴痒带下，虫积腹痛。研究报道(SGranica,JPPiwowarski,AKKiss,etal.NovelinsightintoqualitativestandardizationofPolygoniavicularisherba(Ph.Eur.)[J].JPharmaandBiomedAnal,2013,72:216-222)，其主要含有黄酮类、苯丙素类、酚酸类、甾醇类、萜类等多种活性成分，其中黄酮类和酚酸类为萹蓄中主要成分。现代药理学研究(杨俊丽,黄丽丹,张亚中,等.篇蓄的研究进展[J].安徽医药,2016,20(6):1025-1029.)表明萹蓄具有解毒利尿、杀虫、抑菌消炎、保肝、降血糖、抗癌、提高机体免疫等多种药理活性。由于萹蓄药效物质基础尚不明确，药材的质量控制手段主要有传统的生药学研究、以杨梅苷为对照的TLC法、HPLC指纹图谱、GC-MS法测定挥发油，含量测定方面多集中在几种黄酮类的测定(如期刊文献胥秀英,郑一敏,傅善权,等.高效液相色谱法测定萹蓄中金丝桃苷等3种有效成分的含量[J].时珍国医医药,2006,17(4):563-564.和付庆荣,刘淑娟,王弘,等.RP-HPLC-UV法同时测定萹蓄中8个黄酮类化合物的含量[J].中国药学,2014,23(3):170-176.)，这些技术手段和方法难以全面系统的表征化学成分轮廓特征和控制药材的内在质量。目前，液质联用技术已广泛应用于中药及复方物质基础方面的研究，以液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(LC-Q-TOF-MS)为代表的一类高分辨率、高灵敏度的液质联用技术在中药复杂体系成分快速鉴别领域的应用越来越多。因此，建立一种能快速、高效、准确的测定萹蓄药材中主要化学成分的方法，实现对其物质群的全面控制，为萹蓄的质量评价提供科学试验依据，具有重要的意义。现阶段，传统生药学研究，有时候带有一定的主观性，在复杂的中药材质量控制中有一定的局限性；而经典的TLC法中存在大量的假阳性和假阴性问题，易导致实验结论的偏差；以HPLC为主的中药指纹图谱技术基于从整体面貌上辨认样品的真实性，在中药质量控制中发挥重要角色，但中药材基原广泛、中药材受品种、产地、种植、采收、炮制等多种因素影响，难以控制，不同药材其指纹图谱有一定的差异，实验室条件、仪器设备的不同也会影响指纹图谱的重现性；GC-MS法更多的适用于含挥发性成分为主的中药材质量控制的应用。超高液相色谱(UPLC)相对传统的HPLC分离效果更好，分析速度更快，非常适合多组分快速检测，而四级杆串联飞行时间质谱(Q-TOF)分辨率高、灵敏度高，结合同位素分析和高分辨的分子量，能够实现分子量的精确测定，适合复杂基质中组分的检测定性，因此UPLC-Q/TOF-MS已成为复杂基质中多成分的有效快速准确的检测手段，一种简便、快速、准确、高效的检测萹蓄中多成分的UPLC-Q/TOF-MS方法亟待开发出来。
技术实现思路
专利技术要解决的问题本专利技术的目的在于提供一种基于UPLC-Q/TOF-MS检测萹蓄中化学成分的方法，所述方法操作简便、快速、准确、高效，样品前处理简便，简化了完全分离和纯化，再一一鉴别的步骤，降低了成本。用于解决问题的方案为了解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案为：一种基于UPLC-Q-TOF/MS检测萹蓄中化学成分的方法，包括如下步骤：(1)取萹蓄粉末精密称定，然后与溶剂混合，称定重量；(2)将步骤(1)所得的萹蓄超声破碎，然后将超声过的萹蓄溶液摇匀，离心，过滤，取滤液，即得到待测样品；(3)用超高效液相色谱分离步骤(2)中的待测样品，然后用质谱检测，得化学成分物质峰，用分析软件对所述物质峰进行定性分析。优选的，将步骤(1)中的萹蓄粉末过筛后再进行精密称定。优选的，步骤(1)中的溶剂为甲醇、水或甲醇水溶液。优选的，所述萹蓄粉末与溶剂的质量体积比为0.2-10g：10-100ml。优选的，所述方法还包括以下步骤，在步骤(2)将萹蓄超声破碎后，放冷，再称定重量，用步骤(1)中的溶剂补足减失的重量。优选的，步骤(2)中超声的时间为5-120分钟，离心的转速为10000～15000r/min，离心时间为5～60min。优选的，步骤(3)中的超高效液相色谱的分离条件为，色谱柱为WatersACQUITYUPLCBEHShieldRP18色谱柱、WatersUPLCCORTECST3液相色谱柱、WatersACQUITYUPLCHSST3液相色谱柱或Waters-ACQUITYUPLCBEHC18液相色谱柱，洗脱系统流动相为：流动相A为乙腈，流动相B为体积浓度0.02～0.5％甲酸水溶液，流速为0.1-1ml/min。优选的，洗脱系统流动相为：流动相A为乙腈，流动相B为体积浓度0.05～0.2％甲酸水溶液，流速为0.2-5ml/min，柱温为10-50℃，洗脱程序为下表所述：优选的，步骤(3)中质谱检测的条件为：离子源为双喷ESI离子源、大气压化学电离、电子轰击电离、化学电离或快原子轰击，干燥气温度为200-400℃，流量为1-20L/min，雾化器压力为10-100psi。优选的，所述的分析软件为AgilentMassHunterQualitativeAnalysissoftwareB.08.00。专利技术的效果本专利技术采用UPLC-Q/TOF-MS方法，通过筛选液相色谱和质谱的条件，实现了快速检测萹蓄中多种化学成分，操作简便、快速、准确、高效，样品前处理简便，简化实验步骤，降低了成本。实现了萹蓄中多成分的快速定性或定量，对于提高萹蓄药材的质量标准有重要意义。附图说明图1为采用WatersACQUITYUPLCBEHShieldRP18色谱柱的分离效果图；图2为采用WatersACQUITYUPLCHSST3液相色谱柱的分离效果图；图3为采用Waters-ACQUITYUPLCBEHC18液相色谱柱的分离效果图；图4样品的正、负离子模式下TIC图：A.样品的正离子模式下TIC图；B.样品的负离子模式下TIC图；图5样品的BPC图：A.样品的正离子模式下BPC图；B.样品的负离子模式下BPC图；图6萹蓄药材中峰3(绿原酸)的：A.正离子提取离子流图(EIC)；B.负离子提取离子流图(EIC)；C.一级正离子质谱图；D.一级负离子质谱图(样品峰3的正、负EIC图、一级正、负离子棒状图、化学结构式)；图7萹蓄药材中峰19(杨梅苷)的：A.正离子提取离子流图(EIC)；B.负离子提取离子流图(EIC)；C.一级正离子质谱图；D.一级负离子质谱图(样品峰19的正、负EIC图、一级正、负离子棒状图)。具体实施方式本专利技术提供了一种基于UPLC-Q-TOF/MS检测萹蓄中化学成分的方法，包括如下步骤：(1)取萹蓄粉末本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于UPLC‑Q‑TOF/MS检测萹蓄中化学成分的方法，包括如下步骤：(1)取萹蓄粉末精密称定，然后与溶剂混合，称定重量；(2)将步骤(1)所得的萹蓄超声破碎，然后将超声过的萹蓄溶液摇匀，离心，过滤，取滤液，即得到待测样品；(3)用超高效液相色谱分离步骤(2)中的待测样品，然后用质谱检测，得化学成分物质峰，用分析软件对所述物质峰进行定性分析。

【技术特征摘要】
1.一种基于UPLC-Q-TOF/MS检测萹蓄中化学成分的方法，包括如下步骤：(1)取萹蓄粉末精密称定，然后与溶剂混合，称定重量；(2)将步骤(1)所得的萹蓄超声破碎，然后将超声过的萹蓄溶液摇匀，离心，过滤，取滤液，即得到待测样品；(3)用超高效液相色谱分离步骤(2)中的待测样品，然后用质谱检测，得化学成分物质峰，用分析软件对所述物质峰进行定性分析。2.根据权利要求1所述的一种基于UPLC-Q-TOF/MS检测萹蓄中化学成分的方法，其特征在于，将步骤(1)中的萹蓄粉末过筛后再进行精密称定。3.根据权利要求1所述的一种基于UPLC-Q-TOF/MS检测萹蓄中化学成分的方法，其特征在于，步骤(1)中的溶剂为甲醇、水或甲醇水溶液。4.根据权利要求1所述的一种基于UPLC-Q-TOF/MS检测萹蓄中化学成分的方法，其特征在于，所述萹蓄粉末与溶剂的质量体积比为0.2-10g：10-100ml。5.根据权利要求1所述的一种基于UPLC-Q-TOF/MS检测萹蓄中化学成分的方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤，在步骤(2)将萹蓄超声破碎后，放冷，再称定重量，用步骤(1)中的溶剂补足减失的重量。6.根据权利要求5所述的一种基于UPLC-Q-TOF/MS检测萹蓄中化学成分的方法，其特征在于，步骤(2)中超声的时间为5-120分钟，离心的转速为10000～15000r/min，离心时间为5～60min。7.根据权利要求5所述的一种基于UPLC-Q-TOF/MS检测萹蓄中化学成分的方法，其特征在于，步骤(3)中的超高效液相色谱的分离条件为，色谱柱为WatersACQUITYUPLCBEHShieldRP18色谱柱、...

【专利技术属性】
技术研发人员：张玉，张云天，顾芹英，
申请(专利权)人：江阴天江药业有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32