【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种细胞核基因its序列在鉴定/区分韭菜子和/或葱子中的应用，属于中药领域。
技术介绍
1、韭菜子为百合科植物韭allium tuberosum rottl.ex spreng.的干燥成熟种子，性温，味辛、甘，归肝、肾经，具有温补肝肾，壮阳固精等功效，用于治疗肝肾亏损，腰膝酸痛，阳痿遗精，遗尿尿频，白浊带下。全国各地均产，主产于山东、河南、河北、山西、安徽等地。现代药理研究表明，韭菜子具有改善性功能、改善免疫调节、抗氧化和抗衰老等多方面的作用。其主要含有生物碱类、甾体皂苷类、核酸和核苷类及脂肪酸类成分。对韭菜子药品市场进行调研，发现除正品外，常有将性状与其相似的葱子(百合科植物葱allium fistulosuml.的干燥成熟种子)充当或掺入韭菜子销售。因此，亟需建立一种韭菜子药材和葱子的专属性鉴别方法，对于提升韭菜子药材标准、质量控制和确保临床准确、安全用药具有重要的实际意义。
2、目前关于韭菜子与葱子的鉴别方法区分研究暂不充分，朱婕妤等人研究了韭菜子及其葱子的鉴别，通过药材性状、粉末显微特征和薄层色谱区分韭菜子及其混淆品。周运梅等人研究了韭菜子与混用品的鉴别，利用显微鉴别，通过在显微镜下观察两者的横切面与粉末来辨别真伪，但是粉末的显微鉴别分辨率低、耗时耗力，且主观性较强。以上对于韭菜子薄层色谱及其市场常见混伪品的区分研究均存在一些缺陷；杜新刚(公开/公告号：cn201810288633.5)等人专利技术了一种pcr-rflp对韭菜子和葱子的分子鉴定方法，但该方法的缺点为经过pcr反应后，需要再次对产
技术实现思路
1、专利技术目的：本专利技术的目的是提供一种细胞核基因its序列的基因位点及其应用。
2、技术方案：本专利技术所述的细胞核基因its序列在鉴定/区分韭菜子和/或葱子中的应用，当所述细胞核基因its序列的genbank登陆号为om658519.1时，细胞核基因its序列的第220位核苷酸为c、第221位核苷酸为a、第222位核苷酸为t、第444位核苷酸为g、第445位核苷酸为g、第446位核苷酸为c，第448位核苷酸为t和第449位核苷酸为g时，待测药材为韭菜子；细胞核基因its序列的第220位核苷酸为t、第221位核苷酸为t、第222位核苷酸为a、第444位核苷酸为c、第445位核苷酸为t、第446位核苷酸为g、第448位核苷酸为g和第449位核苷酸为a时，待测药材为葱子；
3、当所述细胞核基因its序列的genbank登陆号为om638740.1时，细胞核基因its序列的第69位核苷酸为t、第71位核苷酸为g、第72位核苷酸为c、第197位核苷酸为c、第199位核苷酸为a和第202位核苷酸为a时，待测药材为葱子；细胞核基因its序列的第69位核苷酸为a、71位核苷酸为a、第72位核苷酸为t、第197位核苷酸t、第199位核苷酸为g和第202位核苷酸t时，待测药材为韭菜子。
4、其中，基于登陆号为om658519.1的细胞核基因its序列设计的特异性引物对的核苷酸序列如seq id no.1-2所示；基于登陆号为om638740.1的细胞核基因its序列设计的特异性引物对的核苷酸序列如seq id no.3-4所示。
5、其中，具体操作包括如下步骤：提取待测样品的基因组dna作为模板，采用核苷酸序列如seq id no.1-2所示和/或核苷酸序列如seq id no.3-4所示的特异性引物对进行pcr扩增，当pcr产物电泳后出现173bp条带，则待测样品为葱子；若出现271bp条带，则待测样品为韭菜子。
6、其中，所述待测样品为含有韭菜子和/或葱子的药材。
7、其中，所述pcr反应体系中的引物浓度均为0.1μm。
8、其中，所述pcr反应的退火温度为54-58℃。
9、其中，所述pcr聚合酶为2×m5 hiper plus taq hifi pcr mix(with blue dye)。
10、有益效果：与现有技术相比，本专利技术具有如下突出的显著优点：本专利技术根据韭菜子和葱子的细胞核基因its序列分别设计的特异性引物对，在进行多重pcr时能够同时鉴别待测样品中的韭菜子、葱子，方法简单可靠，不依赖实验人员的主观判断，不受药材性状的影响，可对药材粉末进行准确鉴定，仅需一次反应便能对二者进行鉴定，降低实验过程中的操作污染几率。
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1.细胞核基因ITS序列在鉴定/区分韭菜子和/或葱子中的应用，其特征在于，当所述细胞核基因ITS序列的GenBank登陆号为OM658519.1时，细胞核基因ITS序列的第220位核苷酸为C、第221位核苷酸为A、第222位核苷酸为T、第444位核苷酸为G、第445位核苷酸为G、第446位核苷酸为C，第448位核苷酸为T和第449位核苷酸为G时，待测药材为韭菜子；细胞核基因ITS序列的第220位核苷酸为T、第221位核苷酸为T、第222位核苷酸为A、第444位核苷酸为C、第445位核苷酸为T、第446位核苷酸为G、第448位核苷酸为G和第449位核苷酸为A时，待测药材为葱子；
2.根据权利要求1所述的细胞核基因ITS序列在鉴定/区分韭菜子和/或葱子中的应用，其特征在于，基于登陆号为OM658519.1的细胞核基因ITS序列设计的特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示；基于登陆号为OM638740.1的细胞核基因ITS序列设计的特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.3-4所示。
3.根据权利要求1所述的细胞核基因ITS序列在鉴定/区
4.根据权利要求3所述的细胞核基因ITS序列在鉴定/区分韭菜子和/或葱子中的应用，其特征在于，所述待测样品为含有韭菜子和/或葱子的药材。
5.根据权利要求3所述的细胞核基因ITS序列在鉴定/区分韭菜子和/或葱子中的应用，其特征在于，所述PCR反应体系中的引物浓度均为0.1μM。
6.根据权利要求3所述的细胞核基因ITS序列在鉴定/区分韭菜子和/或葱子中的应用，其特征在于，所述PCR反应的退火温度为54-58℃。
7.根据权利要求3所述的细胞核基因ITS序列在鉴定/区分韭菜子和/或葱子中的应用，其特征在于，所述PCR聚合酶为2×M5 HiPer plus Taq HiFi PCR mix(with blue dye)。
...【技术特征摘要】
1.细胞核基因its序列在鉴定/区分韭菜子和/或葱子中的应用，其特征在于，当所述细胞核基因its序列的genbank登陆号为om658519.1时，细胞核基因its序列的第220位核苷酸为c、第221位核苷酸为a、第222位核苷酸为t、第444位核苷酸为g、第445位核苷酸为g、第446位核苷酸为c，第448位核苷酸为t和第449位核苷酸为g时，待测药材为韭菜子；细胞核基因its序列的第220位核苷酸为t、第221位核苷酸为t、第222位核苷酸为a、第444位核苷酸为c、第445位核苷酸为t、第446位核苷酸为g、第448位核苷酸为g和第449位核苷酸为a时，待测药材为葱子；
2.根据权利要求1所述的细胞核基因its序列在鉴定/区分韭菜子和/或葱子中的应用，其特征在于，基于登陆号为om658519.1的细胞核基因its序列设计的特异性引物对的核苷酸序列如seq id no.1-2所示；基于登陆号为om638740.1的细胞核基因its序列设计的特异性引物对的核苷酸序列如seq id no.3-4所示。
3.根据权利要求1所述的细胞核基因its序列在鉴定/区...
【专利技术属性】
技术研发人员：周海琴，钱润，陈盛君，李松，海丰，胡剑虹，张开雪，曹杰楠，程梦娟，
申请(专利权)人：江阴天江药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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