一种高效提取橄榄叶片核酸物质的方法技术

本发明专利技术公开了一种高效提取橄榄叶片中高质量核酸物质的方法，其操作步骤主要包括取样、研磨、裂解、除杂、沉淀、纯化和溶解等。本发明专利技术针对橄榄富含多酚、多糖、蛋白质等杂质的特点，其在传统CTAB法的基础上，针对橄榄叶片特征进行深度优化，对样品用量、试剂种类、试剂浓度、反应时间、反应体积、操作步骤等进行系统改良，开发适用于橄榄嫩叶、成熟叶或老叶核酸物质高效率和高质量提取的方法。本方法可根据实际需求，选择提取橄榄叶片基因组DNA或总RNA，适用性广，实用性强，具有很好的应用价值。

An Efficient Method for Extracting Nucleic Acids from Olive Leaves

【技术实现步骤摘要】
一种高效提取橄榄叶片核酸物质的方法
本专利技术涉及生物学领域，具体涉及一种高效提取橄榄叶片核酸物质的方法。
技术介绍
橄榄是我国热带亚热带地区特色名贵果树，其果实是国家卫生部公布的药食同源原料。我国是橄榄原产地和遗传多样性分布中心，种质资源极为丰富。然而，由于产地之间没有统一的橄榄命名标准，加上种质资源交流频繁，同名异物和同物异名现象非常普遍，因此基于现代分子标记技术开展橄榄种质资源鉴定工作对橄榄种质资源挖掘和优新品种审认定具有重要意义。此外，由于橄榄属于小宗果树，基础研究和应用基础研究起步较晚，其农艺性状差异、品质性状形成、抗逆性特征、功效成分积累等方面的机理尚不明确，阻碍了橄榄种质资源的创新利用和目标性状定向育种进程，深入开展橄榄相关方面的分子机理研究也有助于产业进一步发展。DNA和RNA是生物体中重要的遗传物质，如何获得高质量的基因组DNA和总RNA是开展上述一系列工作的关键。然而，橄榄中富含多糖、多酚、蛋白质以及次级代谢产物等，往往在其核酸物质的提取过程中产生强烈的干扰影响，难以高效获得高质量橄榄核酸物质。例如，橄榄中大量的多糖容易导致RNA降解从而破坏其完整性，同时多糖物质本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效提取橄榄叶片核酸物质的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）取样：采集无病虫害橄榄叶片，用清水洗净，用滤纸吸干叶表水分，短暂摊凉，迅速用剪刀去除叶脉；（2）研磨：称取上述样品0.5‑0.6g，置于研钵中，加入10mg的PVP，液氮下快速研磨成匀浆，转移至15mL离心管中；（3）裂解：加入10mL 65℃预热的质量体积比为3%的CTAB裂解液，加入100μLβ‑巯基乙醇，置于65℃条件下温浴30min，期间每隔10min颠倒混匀1次；（4）除杂：裂解结束后，冷却至室温，在温度为4℃、转速为12000rcf下离心2min；取上清液4mL，加入4mL体积比为25:24:1的苯酚氯仿异戊醇...

【技术特征摘要】
1.一种高效提取橄榄叶片核酸物质的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）取样：采集无病虫害橄榄叶片，用清水洗净，用滤纸吸干叶表水分，短暂摊凉，迅速用剪刀去除叶脉；（2）研磨：称取上述样品0.5-0.6g，置于研钵中，加入10mg的PVP，液氮下快速研磨成匀浆，转移至15mL离心管中；（3）裂解：加入10mL65℃预热的质量体积比为3%的CTAB裂解液，加入100μLβ-巯基乙醇，置于65℃条件下温浴30min，期间每隔10min颠倒混匀1次；（4）除杂：裂解结束后，冷却至室温，在温度为4℃、转速为12000rcf下离心2min；取上清液4mL，加入4mL体积比为25:24:1的苯酚氯仿异戊醇混合液，轻轻混匀，静置1min，再离心10min；（5）沉淀；重复步骤（4）2-3次；取1mL上清液，加入200μL浓度为3mol/L的醋酸钠，再加入800μL无水乙醇，轻轻混匀，静置至有白色沉淀析出；（6）纯化；将步骤（5）的白色沉淀转入核酸纯化柱，在温度为4℃、转速为4000rcf下离心...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖瑞联，吴如健，陈瑾，冯新，杨俊，陈义挺，
申请(专利权)人：福建省农业科学院果树研究所，
类型：发明
国别省市：福建,35