【技术实现步骤摘要】
一种对食用生蛋中的致病菌及总菌数进行定量检测的方法
本公开涉及食品卫生领域，具体地，涉及一种对食用生蛋中的致病菌及总菌数进行定量检测的方法。
技术介绍
鸡蛋因其含有蛋白质、脂肪、微量元素等丰富的营养物质，且其价格低廉、生物利用率高、含有植物类蛋白均缺乏的色氨酸，而成为消费者不可或缺的食物，也因此被成为“完美食物”。然而，鸡蛋在生产、贮藏及销售等环节容易受到细菌的污染，污染菌包括非致病菌及致病菌两大类。受非致病菌污染的鸡蛋一般不会直接引起人体疾病，但是，鸡蛋的营养价值、加工价值及贮存时间都会降低。因此，鸡蛋中细菌总菌数量成为衡量鸡蛋质量的一个标准。受致病菌污染的鸡蛋则会严重影响人体健康甚至危及生命。目前为止，大多数与鸡蛋相关的疫情都归因于沙门氏菌属，尤其以肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌最为常见。沙门氏菌病是一种流行的全球食源性传染病疾病，感染者主要表现为轻度至中度肠胃炎，包括腹泻、腹部绞痛、呕吐等。据美国疾病中心统计，在美国，沙门氏菌每年导致120万人患病，23000人住院，450人死亡。鉴于鸡蛋的食用量较大，通过同时定量检测鸡蛋中致病菌和非致病菌含量以确保鸡蛋安全性...
【技术保护点】
1.一种对食用生蛋中的致病菌及总菌数进行定量检测的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：S1.将待测食用生蛋样品进行匀浆，得到蛋液样品；S2.将所述蛋液样品稀释后进行蛋白降解处理和去脂处理，以降解所述蛋液样品中的蛋白成分和脂肪成分，得到处理后的蛋液样品；S3.将所述处理后的蛋液样品进行膜过滤，得到过滤后的蛋液样品，所述膜过滤所采用的过滤膜的孔径为5～10μm；S4.将所述过滤后的蛋液样品进行离心洗涤并去除上清，将离心所得沉淀用悬浮介质悬浮，得到蛋液悬浮液；S5.使用致病菌特异性探针对所述蛋液悬浮液进行第一荧光标记，并使用核酸染料对所述蛋液悬浮液进行第二荧光标记，得到检测上样...
【技术特征摘要】
1.一种对食用生蛋中的致病菌及总菌数进行定量检测的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：S1.将待测食用生蛋样品进行匀浆，得到蛋液样品；S2.将所述蛋液样品稀释后进行蛋白降解处理和去脂处理，以降解所述蛋液样品中的蛋白成分和脂肪成分，得到处理后的蛋液样品；S3.将所述处理后的蛋液样品进行膜过滤，得到过滤后的蛋液样品，所述膜过滤所采用的过滤膜的孔径为5～10μm；S4.将所述过滤后的蛋液样品进行离心洗涤并去除上清，将离心所得沉淀用悬浮介质悬浮，得到蛋液悬浮液；S5.使用致病菌特异性探针对所述蛋液悬浮液进行第一荧光标记，并使用核酸染料对所述蛋液悬浮液进行第二荧光标记，得到检测上样悬浮液；S6.使用高灵敏流式细胞术对所述检测上样悬浮液中颗粒的荧光进行检测，并且根据所述检测上样悬浮液中颗粒的第一荧光信号所转换得到的电信号计算所述待测食用生蛋中的致病菌数量，根据所述检测上样悬浮液中颗粒的第二荧光信号所转换得到的电信号计算所述待测食用生蛋样品中的细菌总数量。2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤S1中，所述匀浆的条件包括：温度为4～37℃，转速为10～300rpm，时间为5～60min。3.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤S2中，所述稀释所采用的稀释剂为磷酸缓冲盐溶液、去离子水、蒸馏水、无菌水或纯水；相对于0.1mL的所述蛋液样品，所述稀释剂的用量为1～1000μL；所述蛋白降解处理使用蛋白酶进行，所述蛋白酶为蛋白酶K、胰蛋白酶和弹性蛋白酶中的至少一种，所述蛋白酶的终浓度为0.1～10mg/mL；所述蛋白降解处理的条件包括：温度为10～50℃，时间为5～30min；所述去脂处理使用的去脂试剂为TritonX-100、NonidetP40或TWEEN-20，所述去脂试剂的终浓度为0.1～10体积％；所述去脂处理的条件包括：温度为0～50℃，时间为5～30min。4.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤S4中，所述离心的时间为1～30min，转速为1000～10000rpm。5.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤S5中，所述致病菌特异性探针为标记了荧光染料的特异性抗体探针、标记了荧光染料的特异性适配子探针或标记了荧光染料的抗菌肽，所述荧光染料为有机染料、量子点或荧光蛋白；所述第一荧光标记的条件包括：避光孵育，温度为4～50℃，时间为1～120min；所述核酸染料为...
【专利技术属性】
技术研发人员：颜晓梅，毛翠萍，王旭正，薛乘风，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：福建,35
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