一种醋酸阿托西班杂质的制备方法技术

本发明专利技术公开了4个醋酸阿托西班杂质的制备方法。4个杂质肽序结构分别为：杂质I：c[Mpa‑D‑Tyr(Et)‑Ile‑Thr‑Asp‑Cys]‑Pro‑Orn‑Gly‑OH、杂质II：c[Mpa‑D‑Tyr(Et)‑Ile‑Thr‑Asn‑Cys]‑Pro‑Orn(Ac)‑Gly‑NH2、杂质III：

Preparation of Atoxiban Acetate Impurity

【技术实现步骤摘要】
一种醋酸阿托西班杂质的制备方法
本专利技术涉及一种活性多肽药物的杂质及其制备方法，尤其涉及醋酸阿托西班杂质的制备方法。
技术介绍
醋酸阿托西班注射液最早由FerringAB(瑞典辉淩公司)研发，于2000年首次被EMEA授权上市销售，其商品名为(依保)，并于2006年在中国获批上市，主要用于妊娠妇女推迟即将来临的早产。阿托西班是一种催产素类似物，在药品中以醋酸盐的形式存在，是子宫内及胎膜上催产素受体的竞争性拮抗剂，用于治疗早产的唯一具有子宫特异性的宫缩抑制剂，其作用机制是与催产素竞争子宫肌层、胎膜上的催产素受体，减少催产素的功效，减少肌细胞上的钙离子水平，从而抑制子宫收缩。醋酸阿托西班是一种环状九肽，肽链中含有一对Mpa与Cys之间成环的二硫键，其化学结构如下：中国专利CN105949283中披露了五个潜在杂质，分别为[Mpa(S＝O)]-阿托西班、[Cys(S＝O)]-阿托西班、[Asp]-阿托西班、[Gly-OH]-阿托西班和[D-Asn]-阿托西班，并通过定向合成获得杂质对照品用于质量研究。醋酸阿托西班肽序中含有Asn残基，且C端酰胺结构，在储存过程中可能水解产生专利CN105949283中披露的杂质[Gly-OH]-阿托西班和[Asp]-阿托西班，同时可能进一步水解产生杂质[Asp5,Gly9-OH]-阿托西班；醋酸阿托西班肽序中含有Orn残基，且阿托西班为醋酸盐形式存在，在储存过程中Orn残基的侧链可能与醋酸发生乙酰化反应产生[Orn(Ac)8]-阿托西班；醋酸阿托西班肽序中含有一对二硫键，在合成和储存过程中可能发生聚合进行二聚体。杂质研究是药物质量研究的一项重要内容，是药物质量保证的关键因素之一。为了提高临床用药安全，需对合成过程中产生的工艺杂质和储存过程中产生的降解杂质进行了详细的研究。由于醋酸阿托西班化学结构特性，其在储存过程中可能产生降解杂质，而这些杂质可能引起过敏反应、毒性及其他不良反应。因此，需对醋酸阿托西班潜在的降解杂质进行定向的合成制备，用于醋酸阿托西班原料药和醋酸阿托西班注射液的质量研究，从而有效地保障和控制醋酸阿托西班的质量，为安全用药提供重要的指导意义。
技术实现思路
本专利技术所需解决的技术问题是提供一种醋酸阿托西班杂质的制备方法，该方法操作简单，所得杂质纯度高，能作为杂质对照品用于醋酸阿托西班原料药及制剂的质量研究，从而有效地保障和控制醋酸阿托西班产品的质量。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：醋酸阿托西班杂质为杂质I[Asp5,Gly9-OH]、杂质II[Orn(Ac)8]、杂质III[二聚体1]和杂质IV[二聚体2]，其肽序结构分别为：杂质I[Asp5,Gly9-OH]：c[Mpa-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-Asp-Cys]-Pro-Orn-Gly-OH、杂质II[Orn(Ac)8]：c[Mpa-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-Asn-Cys]-Pro-Orn(Ac)-Gly-NH2、杂质III[二聚体1]：杂质IV[二聚体2]：本专利技术还提供了上述杂质I[Asp5,Gly9-OH]、杂质II[Orn(Ac)8]、杂质III[二聚体1]和杂质IV[二聚体2]的制备方法。具体地说，本专利技术所述的醋酸阿托西班杂质I[Asp5,Gly9-OH]的制备方法包括如下步骤：1)以Wang树脂为起始物料，溶胀后以DIC/HOBt为缩合试剂，以DMAP为催化剂，Fmoc-Gly-OH的羧基与Wang树脂上的羟基形成酯键，得到Fmoc-Gly-Wang树脂，脱除Fmoc保护，以DIC/HOBt为缩合试剂，按照固相多肽合成法Fmoc/tBu合成策略依次偶联Fmoc-Orn(Boc)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-D-Tyr(Et)-OH、Mpa(Trt)-OH，即可得到醋酸阿托西班杂质I肽树脂；2)用裂解试剂(三氟乙酸/苯甲硫醚/EDT/H2O)裂解切割肽树脂，用甲基叔丁基醚作为沉降试剂，得到阿托西班杂质I线性肽；采用过氧化氢进行液相环化，得到醋酸阿托西班杂质I粗肽溶液；3)用反相高效液相色谱法纯化分离、再经浓缩、冻干后即得所述的醋酸阿托西班杂质I[Asp5,Gly9]；进一步，步骤1)所述的Wang树脂的取代值为0.5～1.2mmol/g，优选0.8～1.0mmol/g；步骤2)中所述的裂解试剂为：三氟乙酸：乙二硫醇：苯甲硫醚：水＝90:2:5:3；液相环化反应时溶液pH值的范围为5.0～9.0，优选6.5～8.0，进一步优选为6.5～7.0。步骤3)中所述的反相高效液相色谱法纯化分离时，采用0.3％乙酸/纯化水作为流动相A、乙腈(色谱纯)作为流动相B，检测波长为230nm，用5％流动相B平衡10min，1min内升到36％，在60min内从36％升到40％直到洗脱结束，收集33min～37min组分。采用本专利技术的方法制得的醋酸阿托西班杂质I[Asp5,Gly9]的HPLC纯度达到95％以上，经结构确认和标定后可作为杂质对照品，用于醋酸阿托西班原料药和制剂的质量研究。本专利技术所述的醋酸阿托西班杂质II[Orn(Ac)8]的制备方法，包括如下步骤：1)以RinkAmideAM树脂为起始物料，溶胀后脱除Fmoc保护，以DIC/HOBt为缩合试剂，按照固相多肽合成法Fmoc/tBu合成策略依次偶联Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Orn(Ac)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-D-Tyr(Et)-OH、Mpa(Trt)-OH；即可得到醋酸阿托西班杂质II肽树脂；2)用裂解试剂(三氟乙酸/苯甲硫醚/EDT/H2O)裂解切割肽树脂，用甲基叔丁基醚作为沉降试剂，得到阿托西班杂质II线性肽；采用过氧化氢进行液相环化，得到醋酸阿托西班杂质II粗肽溶液；3)用反相高效液相色谱法纯化分离、再经浓缩、冻干后即得所述的醋酸阿托西班杂质II[Orn(Ac)8]；进一步，步骤1)所述的RinkAmideAM树脂的取代值为0.5～1.2mmol/g，优选0.8～1.0mmol/g；步骤2)中所述的裂解试剂为：三氟乙酸：乙二硫醇：苯甲硫醚：水＝90:2:5:3；液相环化反应时溶液pH值的范围为5.0～9.0，优选6.5～8.0，进一步优选为6.5～7.0。步骤3)中所述的反相高效液相色谱法纯化分离时，采用0.3％乙酸/纯化水作为流动相A、乙腈(色谱纯)作为流动相B，检测波长为230nm，用5％流动相B平衡10min，1min内升到36％，在60min内从36％升到40％直到洗脱结束，收集33min～37min组分。采用本专利技术的方法制得的醋酸阿托西班杂质II[Orn(Ac)8]的HPLC纯度达到96％以上，经结构确认和标定后可作为杂质对照品，用于醋酸阿托西班原料药和制剂的质量研究。本专利技术所述的醋酸阿托西班杂质III[二聚体1]的制备方法，包括如下步骤：1)以RinkAmideAM树脂为起始物料，溶胀后脱除Fmoc保护，按照固相多肽本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.醋酸阿托西班杂质的制备方法，其特征在于，所述的醋酸阿托西班杂质为杂质I[Asp

【技术特征摘要】
1.醋酸阿托西班杂质的制备方法，其特征在于，所述的醋酸阿托西班杂质为杂质I[Asp5,Gly9-OH]、杂质II[Orn(Ac)8]、杂质III[二聚体1]和杂质IV[二聚体2]，其肽序结构分别为：杂质I：c[Mpa-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-Asp-Cys]-Pro-Orn-Gly-OH、杂质II：c[Mpa-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-Asn-Cys]-Pro-Orn(Ac)-Gly-NH2、杂质III：杂质IV：2.一种醋酸阿托西班杂质I[Asp5,Gly9-OH]的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：1)以Wang树脂为起始物料，溶胀后以DIC/HOBt为缩合试剂，以DMAP为催化剂，Fmoc-Gly-OH的羧基与Wang树脂上的羟基形成酯键，得到Fmoc-Gly-Wang树脂，脱除Fmoc保护，以DIC/HOBt为缩合试剂，按照固相多肽合成法Fmoc/tBu合成策略依次偶联Fmoc-Orn(Boc)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-D-Tyr(Et)-OH、Mpa(Trt)-OH，即可得到醋酸阿托西班杂质I肽树脂；2)用裂解试剂(三氟乙酸/苯甲硫醚/EDT/H2O)裂解切割肽树脂，用甲基叔丁基醚作为沉降试剂，得到阿托西班杂质I线性肽；采用过氧化氢进行液相环化，得到醋酸阿托西班杂质I粗肽溶液；3)用反相高效液相色谱法纯化分离、再经浓缩、冻干后即得所述的醋酸阿托西班杂质I[Asp5,Gly9]。3.一种醋酸阿托西班杂质II[Orn(Ac)8]的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：1)以RinkAmideAM树脂为起始物料，溶胀后脱除Fmoc保护，以DIC/HOBt为缩合试剂，按照固相多肽合成法Fmoc/tBu合成策略依次偶联Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Orn(Ac)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-D-Tyr(Et)-OH、Mpa(Trt)-OH；即可得到醋酸阿托西班杂质II肽树脂；2)用裂解试剂(三氟乙酸/苯甲硫醚/EDT/H2O)裂解切割肽树脂，用甲基叔丁基醚作为沉降试剂，得到阿托西班杂质II线性肽；采用过氧化氢进行液相环化，得到醋酸阿托西班杂质II粗肽溶液；3)用反相高效液相色谱法纯化分离、再经浓缩、冻干后即得所述的醋酸阿托西班杂质II[Orn(Ac)8]。4.一种醋酸阿托西班杂质III[二聚体1]的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：1)以RinkAmideAM树脂为起始物料，溶胀后脱除Fmoc保护，按照固相多肽合成法Fmoc/tBu合成策略依次偶联Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Orn(Boc)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH/Fmoc-Cys(Acm)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-D-Tyr(Et)-OH、Mpa(Acm)-OH/Mpa(Trt)-OH，即可得到肽树脂Mpa(Acm)-D-Tyr(Et)-Ile-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-RinkAmideAM树脂或Mpa(Trt)-D-Tyr(Et)-Ile-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Acm)-Pro-Orn(Boc)-Gly-RinkAmideAM树脂；2)用裂解试剂(三氟乙酸/苯甲硫醚/EDT/H2O)裂解切割肽树脂，用甲基叔丁基醚...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴乾方，薄乐，蒋名更，云晓，凌振宏，
申请(专利权)人：海南中和药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：海南,46