一种优化药物蛋白质的方法技术

本发明专利技术公开一种优化药物蛋白质的方法，包括以下步骤；⑴、将两种蛋白酶上氨基加入反应容器内，加入AzMMMan；⑵、使用震荡机构摇动容器，直至使内部液体混均；⑶、抽吸混均后的液体至发酵罐内培育，加入乳腺癌细胞和CAT‑DC‑HAase/PEG纳米材料，并且将发酵罐内抽吸成真空；⑷、流式细胞仪检测纳米材料的进细胞效率。根据蛋白表达量加入Ni‑NTA胶至上清中4度摇摆结合半小时。该优化药物蛋白质的方法，优化加工工序中成分的组成，延长在体内的作用时间，在微酸性环境下化学修饰的蛋白酶功能不受影响地可逆释放，实现对蛋白酶活性在不同条件刺激下的精确调控。

A Method for Optimizing Drug Protein

【技术实现步骤摘要】
一种优化药物蛋白质的方法
本专利技术涉及医药
，具体为一种优化药物蛋白质的方法。
技术介绍
蛋白质药物可分为多肽和基因工程药物、单克隆抗体和基因工程抗体、重组疫苗，与以往的小分子药物相比，蛋白质药物具有高活性、特异性强、低毒性、生物功能明确、有利于临床应用的特点，由于其成本低、成功率高、安全可靠，已成为医药产品中的重要组成部分。随着基因重组技术的发展，药用蛋白质制剂的商品化生产已成为现实。作为药物成分的蛋白质的制备已经成为制药工业不可缺少的一部分。然而，蛋白质的不稳定性在很大程度上限制了其医学以及商业应用，蛋白质所具有的物理和化学特性使其在分离、纯化、贮存和运输中遇到特殊的困难，尤其是不稳定的蛋白质。根据现在技术发现，蛋白质的氨基与linker小分子AzMMMan发生共价反应，该linker分子再与具有进入细胞的阳离子聚合物或者靶向分子发生点击化学反应，形成的蛋白聚合物可以被运载到癌细胞内。同时，蛋白质与分子linker间形成的共价键在细胞的溶酶体酸性pH中可逆地断裂，使得蛋白质无痕迹释放到细胞质中。蛋白质的复杂性主要带来两个问题：一是其十分不稳定，容易降解；二是对其降解途径的确认过程极为复杂，为了提高蛋白质的稳定性，现阶段多种实施方式去试验如何优化蛋白质。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种优化药物蛋白质的方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种优化药物蛋白质的方法，包括以下步骤；⑴、将两种蛋白酶上氨基加入反应容器内，加入AzMMMan；⑵、使用震荡机构摇动容器，直至使内部液体混均；⑶、抽吸混均后的液体至发酵罐内培育，加入乳腺癌细胞和CAT-DC-HAase/PEG纳米材料，并且将发酵罐内抽吸成真空；⑷、流式细胞仪检测纳米材料的进细胞效率。优选的，所述步骤⑵中震动时间不少于60min，间歇时间12S。优选的，所述步骤⑶中培育温度为26℃-32℃。优选的，所述步骤⑶中培育过程为2-20小时。优选的，所述步骤⑶中培育过程为13.5小时。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：该优化药物蛋白质的方法，优化加工工序中成分的组成，使最终的药物蛋白酶稳定性增强，可以消除药物的免疫原性和免疫反应性，减少酶对药物分子的破坏，延长在体内的作用时间，在微酸性环境下化学修饰的蛋白酶功能不受影响地可逆释放，实现对蛋白酶活性在不同条件刺激下的精确调控，增强药物的物理、化学和生物稳定性。具体实施方式下面结合试验阶段，最低温度和时间与最高温度和时间以及最佳温度和时间分别列出不同实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。尽管已经示出和描述了本专利技术的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本专利技术的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本专利技术的范围由所附权利要求及其等同物限定。实施例一：一种优化药物蛋白质的方法，包括以下步骤：⑴、将两种蛋白酶上氨基加入反应容器内，加入AzMMMan；⑵、使用震荡机构摇动容器，直至使内部液体混均，震动时间为20min，间歇时间12S；⑶、抽吸混均后的液体至发酵罐内培育，加入乳腺癌细胞和CAT-DC-HAase/PEG纳米材料，并且将发酵罐内抽吸成真空，培育过程为2小时；⑷、流式细胞仪检测纳米材料的进细胞效率；本实施例提供了蛋白质酶（CAT，HAase）与酸性可逆的linker小分子AzMMMan发生共价反应形成酰胺键，详细研究两种蛋白酶上氨基与AzMMMan反应的效率；定时抽取样本中的液体，用激光扫描共聚焦显微镜进行活细胞成像的研究；再研究对照组和治疗组在不同浓度下对4T1细胞的毒性作用，分组如下：Ce6（红外光+，红外光-），CAT-DC-HAase/PEG(红外光+，红外光-)，CAT-DC-HAase/PEG(红外光+，红外光+/过氧化氢+)，通过MTT检测各组对4T1细胞的毒性，通过对含氧血红蛋白与脱氧血红蛋白的测量来评估肿瘤组织的氧气含量）实时监测静脉注射CAT-DC-HAase/PEG纳米材料后以及对照组中肿瘤组织含氧情况的变化；免疫荧光染色静脉注射CAT-DC-HAase/PEG前后对肿瘤组织乏氧状况改善的效果。实施例二：一种优化药物蛋白质的方法，包括以下步骤：⑴、将两种蛋白酶上氨基加入反应容器内，加入AzMMMan；⑵、使用震荡机构摇动容器，直至使内部液体混均，震动时间为40min，间歇时间12S；⑶、抽吸混均后的液体至发酵罐内培育，加入乳腺癌细胞和CAT-DC-HAase/PEG纳米材料，并且将发酵罐内抽吸成真空，培育过程为12小时；⑷、流式细胞仪检测纳米材料的进细胞效率；本实施例提供了蛋白质酶（CAT，HAase）与酸性可逆的linker小分子AzMMMan发生共价反应形成酰胺键，详细研究两种蛋白酶上氨基与AzMMMan反应的效率；定时抽取样本中的液体，用激光扫描共聚焦显微镜进行活细胞成像的研究；再研究对照组和治疗组在不同浓度下对4T1细胞的毒性作用，分组如下：Ce6（红外光+，红外光-），CAT-DC-HAase/PEG(红外光+，红外光-)，CAT-DC-HAase/PEG(红外光+，红外光+/过氧化氢+)，通过MTT检测各组对4T1细胞的毒性，通过对含氧血红蛋白与脱氧血红蛋白的测量来评估肿瘤组织的氧气含量）实时监测静脉注射CAT-DC-HAase/PEG纳米材料后以及对照组中肿瘤组织含氧情况的变化；免疫荧光染色静脉注射CAT-DC-HAase/PEG前后对肿瘤组织乏氧状况改善的效果。实施例三：一种优化药物蛋白质的方法，包括以下步骤：⑴、将两种蛋白酶上氨基加入反应容器内，加入AzMMMan；⑵、使用震荡机构摇动容器，直至使内部液体混均，震动时间为60min，间歇时间12S；⑶、抽吸混均后的液体至发酵罐内培育，加入乳腺癌细胞和CAT-DC-HAase/PEG纳米材料，并且将发酵罐内抽吸成真空，培育过程为20小时；⑷、流式细胞仪检测纳米材料的进细胞效率；本实施例提供了蛋白质酶（CAT，HAase）与酸性可逆的linker小分子AzMMMan发生共价反应形成酰胺键，详细研究两种蛋白酶上氨基与AzMMMan反应的效率；定时抽取样本中的液体，用激光扫描共聚焦显微镜进行活细胞成像的研究；再研究对照组和治疗组在不同浓度下对4T1细胞的毒性作用，分组如下：Ce6（红外光+，红外光-），CAT-DC-HAase/PEG(红外光+，红外光-)，CAT-DC-HAase/PEG(红外光+，红外光+/过氧化氢+)，通过MTT检测各组对4T1细胞的毒性，通过对含氧血红蛋白与脱氧血红蛋白的测量来评估肿瘤组织的氧气含量）实时监测静脉注射CAT-DC-HAase/PEG纳米材料后以及对照组中肿瘤组织含氧情况的变化；免疫荧光染色静脉注射CAT-DC-HAase/PEG前后对肿瘤组织乏氧状况改善的效果。实施例四：一种优化药物蛋白质的方法，包括以下步骤：⑴、将两种蛋白酶上氨基加入反应容器内，加入AzMMMan；⑵、使用震荡机构摇动容器，直至使内部液体混均，震动时间为45min，间歇时间12S；⑶、抽吸混均后的液体至发酵罐内培育，加入乳腺癌细胞和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种优化药物蛋白质的方法，其特征在于：包括以下步骤；⑴、将两种蛋白酶上氨基加入反应容器内，加入AzMMMan；⑵、使用震荡机构摇动容器，直至使内部液体混均；⑶、抽吸混均后的液体至发酵罐内培育，加入乳腺癌细胞和CAT‑DC‑HAase/PEG纳米材料，并且将发酵罐内抽吸成真空；⑷、流式细胞仪检测纳米材料的进细胞效率。

【技术特征摘要】
1.一种优化药物蛋白质的方法，其特征在于：包括以下步骤；⑴、将两种蛋白酶上氨基加入反应容器内，加入AzMMMan；⑵、使用震荡机构摇动容器，直至使内部液体混均；⑶、抽吸混均后的液体至发酵罐内培育，加入乳腺癌细胞和CAT-DC-HAase/PEG纳米材料，并且将发酵罐内抽吸成真空；⑷、流式细胞仪检测纳米材料的进细胞效率。2.根据权利要求1所述的一种优化药物蛋白质的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘小文，
申请(专利权)人：诸暨德齐生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33