一种提高药物蛋白稳定性的方法技术

本发明专利技术公开一种提高药物蛋白稳定性的方法，包括以下步骤：①配料：在反应容器添加盐型固态离子化合物和蛋白酶；②搅拌：使用循环泵往复抽吸释放药液，通过循环泵的吸入端吸入与喷出端喷出使药液在反应容器内形成旋流；③沉淀：加入非离子表面活性剂，循环泵继续工作往复抽吸释放药液，然后静置沉淀；④提纯：沉淀后的药液在抽取进入至提纯罐时加入蛋白酶，静置10‑20min后进行提纯工作。消除药物的免疫原性和免疫反应性，减少酶对药物分子的破坏，延长在体内的作用时间，在微酸性环境下，化学修饰的蛋白酶功能不受影响地可逆释放，实现对蛋白酶活性在不同条件刺激下的精确调控。

【技术实现步骤摘要】
一种提高药物蛋白稳定性的方法
本专利技术涉及医药
，具体为一种提高药物蛋白稳定性的方法。
技术介绍
随着基因重组技术的发展，药用蛋白质制剂的商品化生产已成为现实。作为药物成分的蛋白质的制备已经成为制药工业不可缺少的一部分。然而，蛋白质的不稳定性在很大程度上限制了其医学以及商业应用，蛋白质所具有的物理和化学特性使其在分离、纯化、贮存和运输中遇到特殊的困难，尤其是不稳定的蛋白质。根据现在技术发现，蛋白质的氨基与linker小分子AzMMMan发生共价反应，该linker分子再与具有进入细胞的阳离子聚合物或者靶向分子发生点击化学反应，形成的蛋白聚合物可以被运载到癌细胞内。同时，蛋白质与分子linker间形成的共价键在细胞的溶酶体酸性pH中可逆地断裂，使得蛋白质无痕迹释放到细胞质中。蛋白质有多种功能团，能够在同一时相内发生多种降解反应。蛋白质的复杂性主要带来两个问题：一是其十分不稳定，容易降解；二是对其降解途径的确认过程极为复杂。对于体积庞大来源复杂的蛋白质而言，了解它们主要降解途径就是测定其动力学参数，从而找出使蛋白质稳定、防止降解的方法。这样，就可以通过合理的设计制备出稳定的蛋白质制剂。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种提高药物蛋白稳定性的方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种提高药物蛋白稳定性的方法，包括以下步骤；①配料：在反应容器添加盐型固态离子化合物和蛋白酶；②搅拌：使用循环泵往复抽吸释放药液，通过循环泵的吸入端吸入与喷出端喷出使药液在反应容器内形成旋流；③沉淀：加入非离子表面活性剂，循环泵继续工作往复抽吸释放药液，然后静置沉淀；④提纯：沉淀后的药液在抽取进入至提纯罐时加入蛋白酶，静置10-20min后进行提纯工作。优选的，所述蛋白酶为两种组合物，分别为上氨基和AzMMMan。优选的，在所述步骤②中还加入有修饰剂。优选的，所述修饰剂为聚乙二醇、右旋糖苷或聚氨基酸。优选的，所述步骤②中工作时间为0.5h-1h。优选的，所述步骤③中加入非离子表面活性剂后循环泵工作时间为10-30min。优选的，所述步骤③中沉淀时间为1-2h。优选的，所述非离子表面活性剂为聚醚。优选的，所述盐型固态离子化合物为氰化钠、氮化镁或氮化钠的一种或几种组合。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：该提高药物蛋白稳定性的方法，通过添加盐型固态离子化合物，减缓蛋白酶的可逆性变性。该提高药物蛋白稳定性的方法，使用循环泵抽吸释放药液使药液在反应容器内形成旋流，进而有效的避免了蛋白质的构象产生严重的破坏效果，保证搅拌时蛋白质的稳定效果，同时增加的修饰剂可以改变生物分配行为和溶解行为，可以消除药物的免疫原性和免疫反应性，减少酶对药物分子的破坏，延长在体内的作用时间，增强药物的物理、化学和生物稳定性。该提高药物蛋白稳定性的方法，在微酸性环境下，化学修饰的蛋白酶功能不受影响地可逆释放，实现对蛋白酶活性在不同条件刺激下的精确调控。该提高药物蛋白稳定性的方法，提纯时加入蛋白酶，破碎细胞后释放到溶剂中时，通过加入的蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。具体实施方式基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例一：①配料：在反应容器添加盐型固态离子化合物和蛋白酶，蛋白酶为两种组合物，分别为上氨基和AzMMMan，盐型固态离子化合物为氰化钠，通过添加盐型固态离子与蛋白酶的结合，减缓蛋白酶的可逆性变性；②搅拌：使用循环泵往复抽吸释放药液，通过循环泵的吸入端吸入与喷出端喷出使药液在反应容器内形成旋流，此过程中加入有修饰剂，修饰剂为聚乙二醇，工作时间为0.5h，由于泡沫所具有的表面张力对一些蛋白质的构象具有破坏作用，而且泡沫所提供的非常大的表面使得空气氧化作用扩大，进而避免使用曝气和机械搅拌的方式对蛋白质进行搅拌混合，而使用循环泵抽吸在释放的工作方式，使蛋白质在反应容器内形成一个涡流，进而有效的避免了蛋白质的构象产生严重的破坏效果，保证搅拌时蛋白质的稳定效果，同时增加的修饰剂可以改变生物分配行为和溶解行为，可以消除药物的免疫原性和免疫反应性，减少酶对药物分子的破坏，延长在体内的作用时间，增强药物的物理、化学和生物稳定性；③沉淀：加入非离子表面活性剂，循环泵继续工作10min往复抽吸释放药液使其混均，然后静置沉淀，沉淀时间为1h，非离子表面活性剂为聚醚，能够防止沉淀时蛋白质吸附于表面，而抑制其凝聚和沉淀，阻止其变性；④提纯：沉淀后的药液在抽取进入至提纯罐时加入蛋白酶，静置10min后进行提纯工作，在蛋白质提取过程中，细胞内含有蛋白水解酶，破碎细胞后释放到溶剂中时，通过加入的蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解；该药物使用时在肿瘤微酸性环境下，化学修饰的蛋白酶功能不受影响地可逆释放，实现对蛋白酶活性在不同条件刺激下的精确调控，定时抽取样本中的液体，用激光扫描共聚焦显微镜进行活细胞成像的研究；再研究对照组和治疗组在不同浓度下对4T1细胞的毒性作用，分组如下：Ce6（红外光+，红外光-），CAT-DC-HAase/PEG(红外光+，红外光-)，CAT-DC-HAase/PEG(红外光+，红外光+/过氧化氢+)，通过MTT检测各组对4T1细胞的毒性，通过对含氧血红蛋白与脱氧血红蛋白的测量来评估肿瘤组织的氧气含量）实时监测静脉注射CAT-DC-HAase/PEG纳米材料后以及对照组中肿瘤组织含氧情况的变化；免疫荧光染色（以Pimonidazole为外源乏氧探针，HIF-1为内源乏氧探针）静脉注射CAT-DC-HAase/PEG前后对肿瘤组织乏氧状况改善的效果。实施例二：①配料：在反应容器添加盐型固态离子化合物和蛋白酶，蛋白酶为两种组合物，分别为上氨基和AzMMMan，盐型固态离子化合物为氰化钠，通过添加盐型固态离子与蛋白酶的结合，减缓蛋白酶的可逆性变性；②搅拌：使用循环泵往复抽吸释放药液，通过循环泵的吸入端吸入与喷出端喷出使药液在反应容器内形成旋流，此过程中加入有修饰剂，修饰剂为右旋糖苷，工作时间为0.8h，由于泡沫所具有的表面张力对一些蛋白质的构象具有破坏作用，而且泡沫所提供的非常大的表面使得空气氧化作用扩大，进而避免使用曝气和机械搅拌的方式对蛋白质进行搅拌混合，而使用循环泵抽吸在释放的工作方式，使蛋白质在反应容器内形成一个涡流，进而有效的避免了蛋白质的构象产生严重的破坏效果，保证搅拌时蛋白质的稳定效果，同时增加的修饰剂可以改变生物分配行为和溶解行为，可以消除药物的免疫原性和免疫反应性，减少酶对药物分子的破坏，延长在体内的作用时间，增强药物的物理、化学和生物稳定性；③沉淀：加入非离子表面活性剂，循环泵继续工作20min往复抽吸释放药液使其混均，然后静置沉淀，沉淀时间为1.5h，非离子表面活性剂为聚醚，能够防止沉淀时蛋白质吸附于表面，而抑制其凝聚和沉淀，阻止其变性；④提纯：沉淀后的药液在抽取进入至提纯罐时加入蛋白酶，静置15min后进行提纯工作，在蛋白质提取过程中，细胞内含有蛋白水解酶，破碎细胞后释放到溶剂中时，通过加入的蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解；该药物使用时在肿瘤微酸性环境下，化学修饰的蛋白酶功能不受影响地可逆释放，实现对蛋白酶活性在不同条件刺激下的精确调控本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高药物蛋白稳定性的方法，其特征在于：包括以下步骤：①配料：在反应容器添加盐型固态离子化合物和蛋白酶；②搅拌：使用循环泵往复抽吸释放药液，通过循环泵的吸入端吸入与喷出端喷出使药液在反应容器内形成旋流；③沉淀：加入非离子表面活性剂，循环泵继续工作往复抽吸释放药液，然后静置沉淀；④提纯：沉淀后的药液在抽取进入至提纯罐时加入蛋白酶，静置10‑20min后进行提纯工作。

【技术特征摘要】
1.一种提高药物蛋白稳定性的方法，其特征在于：包括以下步骤：①配料：在反应容器添加盐型固态离子化合物和蛋白酶；②搅拌：使用循环泵往复抽吸释放药液，通过循环泵的吸入端吸入与喷出端喷出使药液在反应容器内形成旋流；③沉淀：加入非离子表面活性剂，循环泵继续工作往复抽吸释放药液，然后静置沉淀；④提纯：沉淀后的药液在抽取进入至提纯罐时加入蛋白酶，静置10-20min后进行提纯工作。2.根据权利要求1所述的一种提高药物蛋白稳定性的方法，其特征在于：所述蛋白酶为两种组合物，分别为上氨基和AzMMMan。3.根据权利要求1所述的一种提高药物蛋白稳定性的方法，其特征在于：在所述步骤②中还加入有修饰剂。4.根据权利要求3所述的一种提高药物蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘小文，张希灿，
申请(专利权)人：诸暨德齐生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33