包含FcγRⅠ的嵌合抗原受体及其应用制造技术

本公开涉及生物医药领域，具体而言，涉及一种包含Fcγ受体Ⅰ的嵌合抗原受体及其应用。该嵌合抗原受体包含A)Fcγ受体Ⅰ胞外区，B)铰链区，C)跨膜域和D)胞内信号传导区。其可通过ADCC效应，提高抗体药物的治疗效果。

Chimeric Antigen Receptor Containing Fc Gamma R I and Its Application

【技术实现步骤摘要】
包含FcγRⅠ的嵌合抗原受体及其应用
本专利技术涉及生物医药领域，具体而言，涉及一种包含FcγRⅠ的嵌合抗原受体及其应用。
技术介绍
肿瘤尤其是恶性肿瘤是当今世界严重危害人类健康的疾病，在各种疾病所致死亡中高居第二位。而且近年来，其发病率呈明显上升趋势。恶性肿瘤治疗效果差，晚期转移率高，预后多不佳。目前临床上所采用的常规治疗方法如放、化疗和手术治疗虽然在很大程度上缓解了病痛，延长了生存时间，但这些方法均存在很大的局限性，其疗效难以进一步提高。大量研究表明，肿瘤在形成过程中，可通过多重机制，逃避免疫系统的监视，我们将这一过程称之为肿瘤组织的免疫逃逸或免疫编辑。T细胞在肿瘤免疫的过程中处于核心地位，如果能调动体内的杀伤武器，将是非常有效且安全的治疗策略。T细胞的活化启动和效应发挥的过程中至少需要两种信号存在，第一种信号是抗原特异性的，由主要组织相容性复合体(Majorhistocompatibilitycomplex，MHC)以及与其结合的抗原肽被T细胞受体(TcellreCeptor，TCR)识别并结合后，由TCR复合物向T细胞内传导激活信号；第二种激活信号是抗原非特异性的，是由抗原递呈细胞(antigenpresentingcell，APC)和T细胞上多种辅助分子之间的配对和相互作用而提供的，能够提供第二种激活信号的一类T细胞膜蛋白又被称为共刺激分子，在T细胞活化中发挥重要作用。人类中的多种治疗策略是基于使用治疗抗体。其中包括例如使用被开发用于减少靶细胞、特别是患病的细胞如病毒感染的细胞、肿瘤细胞或其它病原细胞包括异源的免疫活性细胞的治疗抗体。这样的抗体一般是IgG种类的单克隆抗体，典型的是IgG1和IgG3。这些抗体可以是重组抗体和人源化抗体，含有不同物种或来源或特异性的功能结构域。单克隆抗体(MAbs)已经在各种恶性肿瘤中表现出临床效力。单克隆抗体现在常用作用于治疗和/或预防癌症、自体免疫性疾病、血栓形成、炎症和感染的治疗剂。但是，有一些低抗体活性情况导致对癌症、自体免疫性疾病、炎症和感染的治疗作用不足。这样不足的药物作用可能导致治疗所需的剂量和成本提高。在这些情况下，增强单克隆抗体的治疗活性是重要的目标。目前FDA批准的用于肿瘤的单克隆抗体种类繁多，例如主要用于治疗非霍奇金淋巴瘤的利妥昔单抗，主要用于乳腺癌的曲妥珠单抗，主要用于结直肠转移癌的贝伐单抗和用于治疗淋巴瘤的BrentuximabVedotin等。这些抗体代表了人类治疗、特别是肿瘤治疗的一种新的有效的方法，但是它们并不总是能够表现出强的效力，这些单克隆抗体主要依赖于抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity，ADCC)效应杀死靶细胞。ADCC效应是指具有杀伤活性的细胞通过其表面表达的Fc受体(FcR)识别包被于靶抗原上的Fc段，直接杀伤靶细胞。癌症治疗过程中两种常用的手段是放疗和化疗，该方法不仅能够杀死肿瘤细胞，而且对病人的免疫细胞也会造成一定程度的损伤，因此导致ADCC效应减弱，单克隆抗体不能充分发挥治疗作用，治疗效果往往不是特别理想。治疗性单克隆抗体优选能发挥抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)，特别是在用于治疗癌症或其它细胞疾病时。也就是说，治疗性MAbs优选对它们的靶细胞，如靶癌细胞或淋巴细胞发挥细胞毒性效应。这样的抗体通过它们的Fc结构域结合至靶细胞表面上的抗原上，结合至效应细胞，如NK细胞和巨噬细胞的表面上的Fc受体上，由此在靶细胞上施加破坏。这种机制是抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)。或者，抗体通过经由Fc结构域活化补体来破坏细胞。这被称作补体依赖性细胞毒性(CDC)。经由Fc结构域发挥的这种抗体活性被称作效应子活性(effectoractivity)。Fc受体是在有助于免疫系统的保护功能的某些细胞(包括自然杀伤细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞和肥大细胞)的表面上发现的蛋白质。Fc受体结合到附着在受感染细胞、入侵病原体或癌细胞上的抗体上。它们的活性刺激吞噬或细胞毒性细胞以通过抗体介导的吞噬作用或ADCC破坏微生物、受感染细胞或癌细胞。一些病毒如黄病毒(flaviviruses)使用Fc受体以助于它们通过被称作抗体依赖性感染增强的机制感染细胞。Fc受体参与ADCC过程。例如，在ADCC过程中，自然杀伤(NK)细胞表面上的FcγRIII受体刺激NK细胞以从它们的颗粒中释放细胞毒性分子以杀死抗体覆盖的靶细胞。Fc受体(Fcreceptor,FcR)是能特异亲和免疫球蛋白(Ig)的Fc区域的一类重要的免疫细胞表面分子。广泛表达于免疫辅助细胞和免疫效应细胞，介导免疫细胞与免疫复合物及其他细胞之间的相互作用，触发并调控机体多种免疫学效应，包括抗原加工与提呈、免疫复合物的清除、抗体生成调节、肿瘤细胞的裂解、T细胞增殖与分化等，将体液免疫和细胞免疫联系起来，从整体上看将先天性免疫和获得性免疫联系起来。一方面FcR使抗体作为“标记物”，介导特定的细胞效应事件,如抗体依赖细胞介导的细胞毒(ADCC)作用和吞噬作用，另一方面，不同的FcR利用抗体作为整体免疫调节的调控者，它们传递的信号可诱导细胞表面受体的表达、细胞因子分泌和广泛的分化的改变。FcγRI(CD64)是70kD左右的跨膜糖蛋白，由胞内区、跨膜区和3个Ig样胞外区组成，主要分布于单核细胞、嗜中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞等多种免疫细胞，其中在单核细胞和巨噬细胞中表达较高。FcγRI对人IgG1、IgG3和小鼠IgG2a的亲和力较高，对人IgG4、IgG2的亲和力低下。IFN-γ和G-CSF可刺激中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞表达FcγRI的水平增加5～10倍，人FcγRI由huFcγRIA、huFcγRIB和加huFcγRIC3个同源基因编码形成4种转录体。huFcγRIA编码含3个Ig样结构域的跨膜受体，是唯一的高亲和力结合IgG单体的FcγR，在低抗体浓度下可结合免疫复合物，诱导免疫细胞对抗原的摄入加工及提呈等，在免疫细胞中，FcγRIA与FcRγ链形成复合体表达于细胞表面，并通过γ链的AM基序进行信号传导。huFcγRIb1和huFcγRIC因缺失跨膜区和胞内区形成可溶性受体。huFcγRIb2是huFcRIB的选择性剪接产物，缺失第三个胞外区，编码含2个Ig样结构域的跨膜受体，该受体只结合IgG复合物，而不能结合IgG单体，推断胞外区第三个Ig结构域可能对该受体的高亲和力起关键作用。现有技术进一步需要改进单克隆抗体的治疗效力。需要增强抗体的效应子功能，例如增强抗体的ADCC功能。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
基于以上问题，本公开旨在设计一种FcγRⅠ嵌合受体，通过在淋巴细胞表面表达FcγRⅠ嵌合受体，构建重组细胞。使用时向受试者给予有效量的该遗传修饰的细胞，同时给予抗体联合治疗，该方法可用于预防和/或治疗和/或辅助治疗肿瘤抗原表达相关疾病或者其他需要使用抗体治疗的疾病。本公开所提供的嵌合受体，其包含A)FcγRⅠ胞外区，B)铰链区，C)跨膜域和D)胞内信号传导区。在FcγRⅠ嵌合受体设计方面，本公开采用了一种类似于嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)技术的方法。CAR-CD19的T细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种嵌合抗原受体，其特征在于，其包含A)FcγRⅠ胞外区，B)铰链区，C)跨膜域和D)胞内信号传导区。

【技术特征摘要】
1.一种嵌合抗原受体，其特征在于，其包含A)FcγRⅠ胞外区，B)铰链区，C)跨膜域和D)胞内信号传导区。2.根据权利要求1所述的嵌合受体，其特征在于，所述FcγRⅠ胞外区的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示；可选的，所述FcγRⅠ嵌合受体还包括信号肽区，优选所述信号肽区的氨基酸序列如SEQIDNO：6所示；可选的，所述铰链区选自CD8α的hinge区；优选其氨基酸序列为SEQIDNO：2所示。3.根据权利要求1所述的嵌合受体，其特征在于，所述跨膜域选自T细胞受体的α、β或ζ链、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154、KIRDS2、OX40、CD2、CD27、LFA-1(CD11a、CD18)、ICOS(CD278)、4-1BB(CD137)、GITR、CD40、BAFFR、HVEM(LIGHTR)、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、CD160、CD19、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA1、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、TNFR2、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、SLAMF6(NTB-A、Ly108)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、PAG/Cbp、NKp44、NKp30、NKp46、NKG2D、和NKG2C中的一种；优选为CD28，更优选其氨基酸序列为SEQIDNO：3所示。4.根据权利要求1所述的嵌合受体，其特征在于，所述胞内信号传导区选自CD27、CD28、4-1BB(CD137)、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴细胞功能相关的抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、特异性结合CD83的配体、CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、HVEM(LIGHTR)、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、CD160、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Ly108)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、NKp44、NKp30、NKp46、PKCθ、FcεRIγ、ZAP70、和CD3ζ中的任一种，或其任意组合，优选为4-1BB以及CD3ζ；更可选的，所述4-1BB的氨基酸序列如SEQIDNO：4所示；更可选的，所述CD3ζ的氨...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪洋，
申请(专利权)人：南京融捷康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32