塞内卡病毒病诊断试剂盒及试纸制造技术

本发明专利技术公开了塞内卡病毒病诊断试剂盒及试纸。该试剂盒包括包被抗原，所述包被抗原由eVP1‑1偶联物和/或eVP2‑1偶联物组成；所述eVP1‑1偶联物是由eVP1‑1和载体蛋白偶联得到的完全抗原；所述eVP2‑1偶联物是由eVP2‑1和载体蛋白偶联得到的完全抗原；所述eVP1‑1序列1所示的多肽，所述eVP1‑2是序列2所示的多肽。试剂盒特异性高、敏感性高，准确性高，操作简单、快速，适用于基层各级兽医部门和出入境检验检疫局对塞内卡病毒感染血清抗体的快速大量筛选检测。

Seneca Virus Disease Diagnostic Kit and Test Paper

【技术实现步骤摘要】
塞内卡病毒病诊断试剂盒及试纸
本专利技术涉及塞内卡病毒病诊断试剂盒及试纸。
技术介绍
A型塞内卡病毒(SenecavirusA，SVA)是一种无囊膜的单股正链RNA病毒，曾经被命名为“塞内卡谷病毒”(Senecavalleyvirus)。SVA属于小RNA病毒科、塞内卡病毒属，SVA基因组全长约7.3kb，由5’端非编码区(5’UTR)、一个编码多聚蛋自的开放阅读框(ORF)和3’端非编码区(3UTR)组成，具有小RNA病毒科病毒基因组的共同特点，即呈现L4-3-4分布。该病毒的结构蛋白由VP0、VP2、VP3和VP1，4种蛋白组成，尤其是VP1与VP2蛋白其抗原性较强、相对保守，可刺激动物机体产生特异性免疫反应，成为塞内卡病毒病的诊断靶抗原。SVA感染猪主要表现为口鼻、蹄冠部皮肤出现水泡、同时病猪伴有发烧和腹泻等症状。新生仔猪(7日龄以内)死亡率可达30％-70％，并伴有腹泻症状。该病的暴发已给全球养猪业造成了较大的经济损失。该病与口蹄疫(FMD)、猪水疱病(SVD)及猪水疱性口炎(VS)类似。由于猪塞内卡病毒病具有与口蹄疫、水泡性口炎和猪水疱病等严重危害养猪业的疫病相似的临床症状，因此需借助实验室检测技术对该病进行确诊。
技术实现思路
本专利技术所要解决的一个技术问题是如何高特异性和高灵敏性检测塞内卡病毒感染抗体以更准确地诊断塞内卡病毒病。为解决上述技术问题，本专利技术提供了塞内卡病毒病诊断试剂盒或检测塞内卡病毒抗体的试剂盒。本专利技术所提供的塞内卡病毒病诊断试剂盒或检测塞内卡病毒抗体的试剂盒，均包括包被抗原，所述包被抗原由eVP1-1偶联物和/或eVP2-1偶联物组成；所述eVP1-1偶联物是由eVP1-1和载体蛋白偶联得到的完全抗原；所述eVP2-1偶联物是由eVP2-1和载体蛋白偶联得到的完全抗原；所述eVP1-1是P11、P12或P13的多肽：P11、氨基酸序列为SEQIDNo.1的多肽，P12、氨基酸序列为SEQIDNo.1的第2-16位的多肽，P13、在P12的多肽的氨基末端或羧基末端连接氨基酸残基以与载体蛋白偶联得到的多肽；所述eVP1-2是P21、P22或P23的多肽：P21、氨基酸序列为SEQIDNo.2的多肽，P22、氨基酸序列为SEQIDNo.2的第2-15位的多肽，P23、在P22的多肽的氨基末端或羧基末端连接氨基酸残基以与载体蛋白偶联得到的多肽。其中，SEQIDNo.1由16个氨基酸残基组成，第1位的半胱氨酸残基是为了与载体蛋白连接添加的连接臂，其它氨基酸残基来源于塞内卡病毒VP1蛋白；SEQIDNo.2由15个氨基酸残基组成，第1位的半胱氨酸残基是为了与载体蛋白连接添加的连接臂，其它氨基酸残基来源于塞内卡病毒VP2蛋白。上述试剂盒中，所述包被抗原中，所述eVP1-1偶联物和所述eVP2-1偶联物的质量比本领域技术人员可根据对塞内卡病毒抗体检测效果确定，如可为4:6。上述试剂盒中，所述试剂盒可为诊断塞内卡病毒病的时间分辨荧光免疫分析试剂盒或检测塞内卡病毒抗体的时间分辨荧光免疫分析试剂盒。上述试剂盒中，所述试剂盒还包括进行时间分辨荧光免疫分析所需的其它试剂，如稀土元素标记的二抗。上述试剂盒中，所述稀土元素可为铕(Eu3+)、镝(De3+)、铽(Te3+)或钐(Sm3+)。上述试剂盒中，所述试剂盒还可为诊断塞内卡病毒病的酶联免疫试剂盒或检测塞内卡病毒抗体的酶联免疫试剂盒。上述试剂盒中，所述试剂盒可还包括进行酶联免疫分析所需的其它试剂，如酶标二抗。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了塞内卡病毒病诊断试纸或检测塞内卡病毒抗体的试纸。本专利技术所提供的塞内卡病毒病诊断试纸或检测塞内卡病毒抗体的试纸均包括包被抗原，所述包被抗原由上述eVP1-1偶联物和/或上述eVP2-1偶联物组成。上述试纸中，所述包被抗原中，所述eVP1-1偶联物和所述eVP2-1偶联物的质量比本领域技术人员可根据对塞内卡病毒抗体检测效果确定，如可为4:6。上述包被抗原、成套多肽或单独多肽在制备试剂盒中的应用也属于本专利技术的保护范围。所述试剂盒为塞内卡病毒病诊断试剂盒或检测塞内卡病毒抗体的试剂盒；所述成套多肽由上述eVP1-1和上述eVP2-1组成。所述单独多肽为上述eVP1-1或上述eVP2-1。上文中，所述成套多肽中所述eVP1-1和所述eVP2-1的质量比本领域技术人员可根据对塞内卡病毒抗体检测效果确定，如可为4:6。上述应用中，所述试剂盒可为诊断塞内卡病毒病的时间分辨荧光免疫分析试剂盒或检测塞内卡病毒抗体的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，所述试剂盒包括包被抗原，所述包被抗原由所述eVP1-1偶联物和/或所述eVP2-1偶联物组成。上述应用中，所述试剂盒可为诊断塞内卡病毒病的酶联免疫试剂盒或检测塞内卡病毒抗体的酶联免疫试剂盒，所述试剂盒包括上述包被抗原。上述包被抗原、上述成套多肽或上述单独多肽在制备试纸中的应用也属于本专利技术的保护范围。上述应用中，所述试纸可为塞内卡病毒病诊断试纸或检测塞内卡病毒抗体的试纸。上述应用中，所述试纸包括包被抗原，所述包被抗原由所述eVP1-1偶联物和/或所述eVP2-1偶联物组成。上述试剂盒或上述试纸在制备塞内卡病毒病监测试剂盒中的应用也属于本专利技术的保护范围。用塞内卡病毒的全长VP1重组蛋白或塞内卡病毒的全长VP2重组蛋白作为半抗原与载体蛋白偶联得到的偶联物作为包被原，不能有效地区分塞内卡病毒抗体与口蹄疫病毒抗体、猪水疱病病毒抗体和猪水泡性口炎病毒抗体。为了提高塞内卡病毒抗体检测的特异性，本专利技术从塞内卡病毒的全长VP1和塞内卡病毒的全长VP2分别选择优势抗原表位eVP1-1和eVP2-1，分别与载体蛋白偶联得到的偶联物(BSA-eVP1-1和/或BSA-eVP2-1)作为包被原，可以有效地区分塞内卡病毒抗体与口蹄疫病毒抗体、猪水疱病病毒抗体和猪水泡性口炎病毒抗体，提高了塞内卡病毒抗体检测的特异性。分别用BSA-eVP1-1和/或BSA-eVP2-1作为包被抗原制备的检测血清中的塞内卡病毒抗体的试剂盒可以将猪塞内卡病毒抗体阳性血清与猪口蹄疫病毒抗体阳性血清、猪水疱病病毒抗体阳性血清和猪水泡性口炎病毒抗体阳性血清进行准确区分。利用包被抗原为BSA-eVP1-1+BSA-eVP2-1的诊断塞内卡病毒病的时间分辨荧光免疫分析试剂盒或检测塞内卡病毒抗体的时间分辨荧光免疫分析试剂盒(本专利技术的试剂盒1)检测猪血清的方法(本专利技术TRFIA方法1)与猪塞内卡病毒血清中和试验方法的总符合率为96.67％(阳性符合率为97.78％，阴性符合率为5.56％)；利用包被抗原为BSA-eVP1-1的诊断塞内卡病毒病的时间分辨荧光免疫分析试剂盒或检测塞内卡病毒抗体的时间分辨荧光免疫分析试剂盒(本专利技术的试剂盒2)检测猪血清的方法(本专利技术TRFIA方法2)与猪塞内卡病毒血清中和试验方法的总符合率为91.11％(阳性符合率为85.56％，阴性符合率为96.67％)；利用包被抗原为BSA-eVP2-1的诊断塞内卡病毒病的时间分辨荧光免疫分析试剂盒或检测塞内卡病毒抗体的时间分辨荧光免疫分析试剂盒(本专利技术的试剂盒3)检测猪血清的方法(本专利技术TRFIA方法3)与猪塞内卡病毒血清中和试验方法的总符合率为92.78％(阳性符合率为90％，阴性符合率本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.塞内卡病毒病诊断试剂盒或检测塞内卡病毒抗体的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括包被抗原，所述包被抗原由eVP1‑1偶联物和/或eVP2‑1偶联物组成；所述eVP1‑1偶联物是由eVP1‑1和载体蛋白偶联得到的完全抗原；所述eVP2‑1偶联物是由eVP2‑1和载体蛋白偶联得到的完全抗原；所述eVP1‑1是P11、P12或P13的多肽：P11、氨基酸序列为SEQ ID No.1的多肽，P12、氨基酸序列为SEQ ID No.1的第2‑16位的多肽，P13、在P12的多肽的氨基末端或羧基末端连接氨基酸残基以与载体蛋白偶联得到的多肽；所述eVP1‑2是P21、P22或P23的多肽：P21、氨基酸序列为SEQ ID No.2的多肽，P22、氨基酸序列为SEQ ID No.2的第2‑15位的多肽，P23、在P22的多肽的氨基末端或羧基末端连接氨基酸残基以与载体蛋白偶联得到的多肽。

【技术特征摘要】
1.塞内卡病毒病诊断试剂盒或检测塞内卡病毒抗体的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括包被抗原，所述包被抗原由eVP1-1偶联物和/或eVP2-1偶联物组成；所述eVP1-1偶联物是由eVP1-1和载体蛋白偶联得到的完全抗原；所述eVP2-1偶联物是由eVP2-1和载体蛋白偶联得到的完全抗原；所述eVP1-1是P11、P12或P13的多肽：P11、氨基酸序列为SEQIDNo.1的多肽，P12、氨基酸序列为SEQIDNo.1的第2-16位的多肽，P13、在P12的多肽的氨基末端或羧基末端连接氨基酸残基以与载体蛋白偶联得到的多肽；所述eVP1-2是P21、P22或P23的多肽：P21、氨基酸序列为SEQIDNo.2的多肽，P22、氨基酸序列为SEQIDNo.2的第2-15位的多肽，P23、在P22的多肽的氨基末端或羧基末端连接氨基酸残基以与载体蛋白偶联得到的多肽。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒为诊断塞内卡病毒病的时间分辨荧光免疫分析试剂盒或检测塞内卡病毒抗体的时间分辨荧光免疫分析试剂盒。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒为诊断塞内卡病毒病的酶联免疫试剂盒或检测塞内卡病毒抗体的酶联免疫试剂盒。4.塞内卡病毒病诊断试纸或检测塞内卡病毒抗体的试纸，其特征在于：所述试纸包括包被抗原，所述包被抗原由权利要求1中所述的eVP1-1偶联物和/或权利要求1中所述的eVP2-1偶联物组成。5.权利要求1中所述的包被抗原、成套多肽或单独多肽在制备试剂盒中的应用，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙雨，蒋菲，王传彬，肖颖，宋晓晖，赵晓春，杨林，王睿男，央珍，王美君，白崇生，李硕，刘林青，李晓霞，曾邦权，邹联斌，王文，肖开提·阿不都克里木，刘健鹏，林汉亮，扎西卓玛，徐琦，苏晓慧，刘玉良，毕一鸣，马英，亢文华，秦菊，薛文，马晓燕，任娟，李舵，杨天意，孙航，
申请(专利权)人：中国动物疫病预防控制中心农业农村部屠宰技术中心，
类型：发明
国别省市：北京,11