【技术实现步骤摘要】
一种检测非洲猪瘟病毒抗原荧光微球免疫试纸卡及制备方法和应用
本专利技术涉及一种检测非洲猪瘟病毒抗原荧光微球免疫试纸卡，具体涉及一种检测非洲猪瘟病毒抗原荧光微球免疫试纸卡及制备方法和应用，属于病毒疫病诊断技术和动物检疫
技术介绍
非洲猪瘟(ASF)是猪的一种高度接触性传染病，高致病性的ASFV感染家猪后死亡率可达100％，该病一直在许多非洲国家流行，目前已传播到格鲁齐亚、亚美尼亚、阿塞拜疆和俄罗斯等邻国，2018年8月该病进入我国，给我国养猪业造成巨大损失。由于目前无疫苗用于ASF防疫，因此快速、准确的诊断对防止该病的传播、流行十分重要。世界动物卫生组织(OIE)推荐的ASF抗原诊断技术包括病原检测、核酸鉴定和病毒抗原检测。在病原检测常用的技术中，血吸附试验是经典的ASF诊断方法之一，敏感性较高，但需要临时制备和培养猪骨髓细胞，不仅费时、操作繁琐，而且不能用于非血吸附性毒株的诊断；检测ASFV抗原的荧光抗体试验可用于可疑病猪组织和白细胞样品的检测，不仅适用于非血吸附性毒株的鉴定，而且能与其它病毒感染进行鉴别诊断，但需要制备冰冻切片或涂片，技术难度较大，而且...
【技术保护点】
1.一种检测非洲猪瘟病毒抗原荧光微球免疫试纸卡，其特征在于，包括PVC底板，在PVC底板上按顺序依次固定有样品垫、荧光垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；荧光垫内有荧光标记抗ASFV p30抗原的一个表位的单克隆抗体Mab1；硝酸纤维素膜表面划有检测线和质控线，检测线为针对ASFV p30抗原另一表位的单克隆抗体Mab2，质控线为羊抗小鼠IgG抗体。
【技术特征摘要】
1.一种检测非洲猪瘟病毒抗原荧光微球免疫试纸卡，其特征在于，包括PVC底板，在PVC底板上按顺序依次固定有样品垫、荧光垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；荧光垫内有荧光标记抗ASFVp30抗原的一个表位的单克隆抗体Mab1；硝酸纤维素膜表面划有检测线和质控线，检测线为针对ASFVp30抗原另一表位的单克隆抗体Mab2，质控线为羊抗小鼠IgG抗体。2.根据权利要求1所述的一种检测非洲猪瘟病毒抗原荧光微球免疫试纸卡，其特征在于，所述抗ASFVp30单克隆抗体Mab1和Mab2针对的抗原表位均位于p30aa145-aa154，且体Mab1和Mab2具体针对的表位不同。3.根据权利要求1所述的一种检测非洲猪瘟病毒抗原荧光微球免疫试纸卡，其特征在于，分泌单克隆抗体Mab1的杂交瘤细胞保藏于武汉大学保藏中心，地址：中国.武汉.武汉大学，保藏编号为：CCTCCNO:C2018158，分类命名为：杂交瘤细胞株6G12，保藏日期为：2018.9.5；分泌单克隆抗体Mab2的杂交瘤细胞保藏于武汉大学保藏中心，地址中国.武汉.武汉大学，保藏编号为：CCTCCNO:C2018159，分类命名为：杂交瘤细胞株3H6，保藏日期为：2018.9.5。4.根据权利要求1所述的一种检测非洲猪瘟病毒抗原荧光微球免疫试纸卡，其特征在于，检测线的Mab2工作浓度为1.0mg/mL，质控线的羊抗鼠IgG抗体工作浓度为1.0mg/ml，Mab2抗体和羊抗鼠IgG抗体划膜时喷涂量均为1μL/cm，且检测线与质控线之间距离为5mm。5.根据权利要求1所述的一种检测非洲猪瘟病毒抗原荧光微球免疫试纸卡的制备方法，其特征在于，荧光标记抗ASFVp30抗原的单克隆抗体Mab1，包括以下步骤：S1、将未处理的荧光垫浸泡于处理液中，取出后，恒温干燥，制得预处理的荧光垫；S2、将铕荧光微球加入EDC溶液中，振荡活化荧光微球；S3、于纯化单克隆抗体Mab1中，加入标记液缓冲液，混合均匀后，加入活化的荧光微球，恒温振荡；S4、平衡PDMiniTrapG-25脱盐柱后，制得标记的荧光微球溶液；S5、将标记的荧光微球...
【专利技术属性】
技术研发人员：张鑫宇，刘潇羽，党红军，熊新灿，孙怀昌，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。