利用ASC三维培养体系获得高活性Tregs细胞的方法技术

本发明专利技术涉及利用ASC三维培养体系获得高活性Tregs细胞的方法，该方法可以显著提高调节性T细胞(Tregs细胞)的纯度与免疫调节功能，所述方法首先取对数生长期的ASC种植在三维载体上，预活化处理后再使用γ射线对ASC进行辐照处理，作为饲养层；使用免疫磁珠法从外周血单个核细胞分选纯化得到CD4

A method of obtaining highly active Tregs cells by ASC three-dimensional culture system

【技术实现步骤摘要】
利用ASC三维培养体系获得高活性Tregs细胞的方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种利用ASC三维培养体系获得高活性Tregs细胞的方法。
技术介绍
慢性炎症在糖尿病和肥胖发生发展中的关键作用越来越被人们所认识。许多炎症因子如C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、血浆纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)及白细胞介素6(IL-6)等与糖尿病及其并发症有密切关联。糖尿病不仅是一个以高血糖为主要表现的疾病，也是一种慢性炎症类疾病。另外，慢性炎症不仅与肥胖相关，也和肿瘤附近的血管发生密切相关。使用调节性T细胞可有效抑制炎症反应，用于治疗1型和2型糖尿病及其它由炎性介导的疾病的治疗，已经成为研究热点。调节性T细胞(regulatoryTcells，Tregcells)是具有免疫调节功能的T细胞亚群，它在自身免疫耐受的获得中起着重要作用，基于Tregs细胞治疗具有作用时间持久、低毒和靶向特定抗原的特点，其被认为是最合适的免疫抑制剂。可以通过输注Tregs细胞治疗慢性炎症类疾病、自身免疫疾病和移植物抗宿主疾病(GVHD)。Tregs细胞主要存在于CD4+CD25+Foxp3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.利用ASC三维培养体系获得高活性Tregs细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)三维饲养层细胞体系的制备：抽取脂肪进行消化，过滤得到单细胞悬液；向其中加入ASC扩增培养基进行培养，得到传代细胞；将传代细胞滴加到三维培养载体上，加入ASC预活化培养基继续培养，最后连同三维培养载体一起经γ射线辐照，得到所述三维饲养层细胞体系；(2)免疫磁珠细胞分选法分离CD4

【技术特征摘要】
1.利用ASC三维培养体系获得高活性Tregs细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)三维饲养层细胞体系的制备：抽取脂肪进行消化，过滤得到单细胞悬液；向其中加入ASC扩增培养基进行培养，得到传代细胞；将传代细胞滴加到三维培养载体上，加入ASC预活化培养基继续培养，最后连同三维培养载体一起经γ射线辐照，得到所述三维饲养层细胞体系；(2)免疫磁珠细胞分选法分离CD4+CD25+T细胞：采集新鲜成人外周血，使用淋巴细胞分离液分离单个核细胞，加入抗CD4和CD25免疫磁珠进行分选，获得CD4+CD25+T细胞；(3)体外扩增培养：将步骤(2)中获得的CD4+CD25+T细胞加入到含有步骤(1)所得三维饲养层细胞体系的培养瓶中，加入CD4+CD25+T细胞扩增培养基进行共培养，得到所述高活性Tregs细胞。2.根据权利要求1所述的利用ASC三维培养体系获得高活性Tregs细胞的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述脂肪消化使用的为胶原酶和胰蛋白酶，胶原酶浓度为0.1％，胰蛋白酶的浓度为0.25％，其中胶原酶为I型胶原酶与II型胶原酶的等比例混合。3.根据权利要求2所述的利用ASC三维培养体系获得高活性Tregs细胞的方法，其特征在于，步骤(1)中，消化脂肪先使用脂肪体积1-3倍的胶原酶消化20-40min，然后加入脂肪体积1-3倍的胰蛋白酶消化10-20min，消化温度为36-38℃。4.根据权利要求1所述的利用ASC三维培养体系获得高活性Tregs细胞的方法，其特征在于，步骤(1)中，ASC扩增培养基和ASC预活化培养基均由αMEM培养基进行配制。5.根据权利要求1所述的利用ASC三维培养体系获得高活性Tregs细胞的方法，其特征在于，步骤(1)中，ASC扩增培养基的组成为：3％-20％的FBS；ASC预活化培养基...

【专利技术属性】
技术研发人员：李炳根，李栋，
申请(专利权)人：威海正生生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37