仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒及其制备方法和诊疗应用技术

本发明专利技术公开了一种仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒及其制备方法和应用，该纳米粒包括磷脂单分子层、包封在磷脂单分子层内的光敏剂和胆固醇酯；在磷脂单分子层表面嵌有RGD肽修饰的载脂蛋白，在磷脂单分子层的磷脂分子间还散布有胆固醇。该纳米粒通过实体瘤的高通透性和滞留效应及载脂蛋白与清道夫受体高度亲和性实现在肿瘤部位的有效积累，并利用RGD与整合素受体高度亲和性进一步实现肿瘤靶向深层穿透。该纳米粒在近红外光的照射下可产生活性氧和高热，促进光敏剂从脂蛋白中快速释放，达到光动力和光热协同治疗的效果；同时近红外波长光触发产生的荧光可有效进行在体诊断，从而实现靶向治疗和诊断的双重功能。

【技术实现步骤摘要】
仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒及其制备方法和诊疗应用
本专利技术属于药物制剂
，具体涉及一种仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒及其制备方法和在肿瘤诊疗中的应用。
技术介绍
肿瘤已成为全球范围内严重威胁人类生命的多发病，根据最新研究报道，中国2016年约有430万人确诊肿瘤，其中280万人因此去世。恶性肿瘤以其诊疗(theranostics)时效性差被视为危害人类健康的重大疾病，亦成为近代医药学研究的热点。当前越来越多的研究致力于探索靶向或调控肿瘤微环境的诊断试剂及治疗药物。脂蛋白由脂质与蛋白质结合而成，内层为甘油三酯，周围绕以磷脂、蛋白质等，人体脂蛋白大体可分为以下四类：乳糜微粒、极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白。其中，高密度脂蛋白(highdensitylipoprotein，HDL)具有适合作为抗癌药物载体的多种特性，首先其非极性的脂质核心及极性的外层磷脂单层有利于保护运载药物免于破坏；同时可以避免网状内皮组织的识别和清除，具有更长的半衰期；此外其表面的部分载脂蛋白可与肿瘤细胞表面高表达的清道夫受体(scavengerreceptortypeBIreceptor，SR-BI)特异性结合，显著提高药物运载的肿瘤靶向性。重组HDL(reconstitutedHDL)由内源性分离或体外合成的载脂蛋白与磷脂在体外重组形成，拥有天然HDL作为抗癌药物载体的多种特性，具有很好的应用前景。然而，SR-BI不仅在肿瘤细胞表面高表达，而且在肝脏、肾脏等正常组织中也有较高分布，存在潜在的毒性和副作用。因此，需要选择具有更好肿瘤归巢性和穿透能力的选择性靶向配体才能进一步提高载体的靶向性。光动力学疗法(photodynamictherapy，PDT)是新发展起来的一种高效的肿瘤治疗手段。PDT可以选择性破坏辐射区的病变组织，对病灶周边的正常组织损伤较小，无明显的全身毒副作用，且具有抗癌广谱性的特点。PDT作用的发挥离不开光敏剂、激发光和氧气的有机结合；同时，近红外光的热效应还可将光热疗法(photothermaltherapy，PTT)与光动力学治疗相结合，从而获得更好的治疗效果。但是，其实际应用却受到光敏剂光漂白特性以及血液循环寿命短等缺陷的制约，并且大部分的光敏剂水溶性不够理想，浓度高时容易团聚或者与蛋白结合，最终影响诊疗效果。
技术实现思路
本专利技术的目的是一种仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒及其制备方法和应用，该纳米粒以仿生重组脂蛋白作为载体包封光敏剂，并在表面增加RGD肽(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)修饰。该纳米粒在近红外光的照射下可产生活性氧和高热，促进光敏剂从脂蛋白中快速释放，达到光动力和光热协同治疗的效果；同时近红外波长光触发产生的荧光可有效进行在体诊断，从而实现靶向治疗和诊断的双重功能。一种仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒，包括磷脂单分子层、包封在磷脂单分子层内的光敏剂和胆固醇酯；在磷脂单分子层表面嵌有RGD肽修饰的载脂蛋白，在磷脂单分子层的磷脂分子间还散布有胆固醇；所述RGD通过交联剂修饰在载脂蛋白上。进一步地，所述仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒，原料以重量百分比计包括：磷脂40％～60％，胆固醇2％～6％，胆固醇酯4％～10％，RGD肽2％～6％，交联剂1％～4％，光敏剂2％～6％和载脂蛋白20％～40％；所有原料的重量百分比之和为100％。进一步地，所述磷脂分子选自卵磷脂、脑磷脂、肌醇磷脂、磷脂酸或磷酯酰丝氨酸中的一种或几种；所述载脂蛋白为内源提取物，选自apoA-I、apoA-II、apoE、apoC或apoB-100中的一种或几种。进一步地，所述RGD肽为含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列的线性RGD肽或RGD环肽。进一步地，所述光敏剂选自卟啉类衍生物、酞菁类或卟酚类中的一种或几种。进一步地，所述交联剂为异型双功能交联剂，两端的反应基团为氨基和巯基，连接臂亚烷基的个数为2-20。上述仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒的制备方法，包括以下步骤：步骤1，将交联剂水溶液滴加至载脂蛋白的磷酸盐缓冲液中，进行反应，加入脱盐柱冷冻，离心，收集反应的活性中间体，再加入RGD的磷酸盐缓冲液，进行反应，反应液经透析，得到RGD肽修饰的载脂蛋白；步骤2，取磷脂、胆固醇、胆固醇酯混合，加入氯仿使之溶解，然后加入光敏剂的甲醇溶液，减压旋蒸后真空干燥除去残留溶剂，得到干燥脂膜，加入磷酸盐缓冲液，超声，得到LP/光敏剂；步骤3，将RGD肽修饰的载脂蛋白溶液与LP/光敏剂混合后孵育，得到仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒。上述仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒在制备肿瘤诊疗制剂上的应用。本专利技术在使用仿生重组脂蛋白作为载体的基础上，增加RGD修饰，并在脂蛋白内包封光敏剂制成纳米粒。一方面，该纳米粒通过实体瘤的高通透性和滞留效应(enhancedpermeabilityandretentioneffect，EPR效应)、载脂蛋白与清道夫受体高度亲和性实现在肿瘤部位的有效积累，并利用RGD与整合素受体高度亲和性进一步实现肿瘤靶向深层穿透。另外，该纳米粒在近红外光的照射下可产生活性氧和高热，促进光敏剂从脂蛋白中快速释放，达到光动力和光热协同治疗的效果；同时近红外波长光触发产生的荧光可有效进行在体诊断，从而实现靶向治疗和诊断的双重功能。附图说明图1为本专利技术的仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒的制备过程示意图；图2为本专利技术的仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒的透射电镜图；图3为本专利技术的仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒的体外释放曲线；图4为本专利技术的仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒的血清稳定性考察；图5为本专利技术的仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒的贮存稳定性考察；图6为本专利技术的仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒的体外热成像考察；图7为本专利技术的仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒的细胞毒性考察；图8为本专利技术的仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒的细胞凋亡考察；图9为本专利技术的仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒的瘤球穿透能力考察；图10为本专利技术的仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒的体内热成像考察；图11为本专利技术的仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒的体内分布。具体实施方式下面结合具体实施例和附图对本专利技术的技术方案做进一步说明。本专利技术公开了一种仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒。在使用仿生重组脂蛋白作为载体基础上，利用具有更好肿瘤归巢性和穿透能力的选择性靶向配体RGD，来进一步提高载体的靶向性。RGD是一类含有特异性精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp)序列的肽，可与肿瘤细胞表面或肿瘤新生血管上的整合素受体特异性识别，经肿瘤部位蛋白酶裂解产生CRGDK/R，与肿瘤细胞表面NRP-1具有高亲和力，通过受体介导内吞作用实现肿瘤深层渗透。因此，偶联RGD的纳米药物载体能够深层次的穿透肿瘤到达肿瘤组织内部，并且能够直接将药物递送到细胞质作用于药物靶点，从而实现对肿瘤疾病的有效治疗。该纳米粒粒径为20-200nm，具有良好的稳定性和显著的肿瘤靶向穿透能力。该纳米粒可以加生理盐水、或磷酸盐缓冲液、或5％葡萄糖溶液溶解，通过静脉注射、或肌肉注射、或透皮给药方式，用于肿瘤疾病的治疗。所构建的仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒递送系统，具有如下特征：1、基于“脂蛋白仿生学”进行载体设计，使之具备生物安全性及高效运载能力。高密度脂蛋白独特的亲水性-疏水本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒，其特征在于：包括磷脂单分子层、包封在磷脂单分子层内的光敏剂和胆固醇酯；在磷脂单分子层表面嵌有RGD肽修饰的载脂蛋白，在磷脂单分子层的磷脂分子间还散布有胆固醇；所述RGD肽通过交联剂修饰在载脂蛋白上。

【技术特征摘要】
1.一种仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒，其特征在于：包括磷脂单分子层、包封在磷脂单分子层内的光敏剂和胆固醇酯；在磷脂单分子层表面嵌有RGD肽修饰的载脂蛋白，在磷脂单分子层的磷脂分子间还散布有胆固醇；所述RGD肽通过交联剂修饰在载脂蛋白上。2.根据权利要求1所述的仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒，其特征在于：原料以重量百分比计包括：磷脂40%～60%，胆固醇2%～6%，胆固醇酯4%～10%，RGD肽2%～6%，交联剂1%～4%，光敏剂2%～6%和载脂蛋白20%～40%；所有原料的重量百分比之和为100%。3.根据权利要求1所述的仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒，其特征在于：所述磷脂分子选自卵磷脂、脑磷脂、肌醇磷脂、磷脂酸或磷酯酰丝氨酸中的一种或几种；所述载脂蛋白为内源提取物，选自apoA-I、apoA-II、apoE、apoC或apoB-100中的一种或几种。4.根据权利要求1所述的仿生重组脂蛋白/光敏剂纳米粒，其特征在于：所述RGD肽为含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列的线性RGD肽或RGD环肽...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁杨，周建平，盛钰，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32