一种用于检测目的抗原的免疫胶乳比浊法测定试剂盒制造技术

本申请提供一种用于检测目的抗原的免疫胶乳比浊法测定试剂盒，包括R1试剂、R2试剂，R1试剂包含促凝剂和缓冲液，R2试剂包含偶联有抗所述目的抗原的抗体的纳米微球和缓冲液，该纳米微球包括大纳米微球和小纳米微球，小纳米微球的平均粒径在50nm至250nm之间，大纳米微球的平均粒径在250nm至400nm之间，且大纳米微球的平均粒径与小纳米微球的平均粒径相差在50nm以上。由于平均粒径的差异，本发明专利技术的测定试剂盒对目的抗原的测定可兼顾灵敏度和线性范围，具有灵敏度高、检测范围宽的优点，而且检测性能媲美化学发光免疫分析法，避免化学发光分析仪封闭且昂贵等缺点，可以用于测定β‑HCG及其他抗原。

An immunolatex nephelometric assay kit for the detection of target antigens

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测目的抗原的免疫胶乳比浊法测定试剂盒
本专利技术涉及免疫分析医学
，具体涉及一种用于检测目的抗原如β-HCG的免疫胶乳比浊法测定试剂盒。
技术介绍
目前常用的检测目的抗原的方法有胶体金法、放射免疫分析法(RIA)、酶联免疫分析法(ELISA)、化学发光免疫分析法(CLIA)和免疫比浊法。胶体金法存在灵敏度低、重复性差、无法定量分析等缺点。RIA存在放射性污染、标记物半衰期短、对操作者具有放射性损伤，且操作繁琐、时间长等缺点。ELISA存在灵敏度低、检测范围窄等缺点。CLIA灵敏度高，检测范围宽，但需在封闭式全自动化学发光检测系统上使用，需要昂贵的全自动化学发光免疫分析仪，从而限制了推广使用。免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法。当目的抗原与抗体在特定稀释系统中反应而且比例合适(一般规定抗体过量)时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促聚剂(聚乙二醇等)的作用下，自液相析出，形成微粒，使反应液出现浊度。在抗体浓度固定的情况下，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加。通过测定反应液的浊度与一系列标准品的相应浊度对照，即可计算出检样中抗原的含量。免疫比浊法包括免疫透射比浊法、免疫散射比浊法。免疫胶乳比浊法是将待测的目的抗原相对应的抗体包被在胶乳颗粒上，使抗原抗体结合物的体积增大，光通过之后，透射光和散射光的强度变化更为显著，从而提高检测的灵敏度，但在实际检测中发现，检测的线性范围不够宽。
技术实现思路
本专利技术的目的在于对现有的免疫胶乳比浊法的缺陷而提出一种新型的免疫胶乳比浊法测定试剂盒，该测定试剂盒在检测中能兼顾检测的灵敏度和线性范围。本专利技术的目的通过如下的技术方案来实现：在本专利技术的一些实施方案中，提供一种用于检测目的抗原的免疫胶乳比浊法测定试剂盒，包括R1试剂、R2试剂，R1试剂包含促凝剂和缓冲液，R2试剂包含偶联有抗目的抗原的抗体的纳米微球和缓冲液，纳米微球包括大纳米微球和小纳米微球，小纳米微球的平均粒径在50nm至250nm之间，大纳米微球的平均粒径在250nm至400nm之间，且大纳米微球的平均粒径与小纳米微球的平均粒径相差在50nm以上。例如，小纳米微球的平均粒径可以为50nm、60nm、70nm、80nm、90nm、100nm、110nm、120nm、130nm、140nm、150nm、160nm、170nm、180nm、190nm、200nm、210nm、220nm、230nm、240nm、250nm，或者它们之间的任何数值，大纳米微球的平均粒径可以为260nm、270nm、280nm、290nm、300nm、310nm、320nm、330nm、340nm、350nm、360nm、370nm、380nm、390nm、400nm，或者它们之间的任何数值，且大纳米微球的平均粒径与小纳米微球的平均粒径相差在50nm以上，例如相差100nm、150nm、200nm、250nm、300nm、350nm。例如，小纳米微球的平均粒径可以为50nm，大纳米微球的平均粒径为350nm(平均粒径相差300nm)；或者小纳米微球的平均粒径可以为100nm，大纳米微球的平均粒径为400nm(平均粒径相差300nm)；或者小纳米微球的平均粒径可以为100nm，大纳米微球的平均粒径为350nm(平均粒径相差250nm)；或者小纳米微球的平均粒径可以为150nm，大纳米微球的平均粒径为350nm(平均粒径相差200nm)；或者小纳米微球的平均粒径可以为150nm，大纳米微球的平均粒径为300nm(平均粒径相差150nm)；或者小纳米微球的平均粒径可以为200nm，大纳米微球的平均粒径为300nm(平均粒径相差100nm)；或者小纳米微球的平均粒径可以为250nm，大纳米微球的平均粒径为300nm(平均粒径相差50nm)；或者小纳米微球的平均粒径可以为200nm，大纳米微球的平均粒径为250nm(平均粒径相差50nm)。大纳米微球与小纳米微球的重量比可以为1:10、1:5、1:2、1:1、2:1、5:1或10:1，或者上述比例之间的任何比例。本专利技术的测定试剂盒中使用的纳米微球可以是聚苯乙烯微球、聚丙烯酸微球和聚丙烯酸酯微球中的一种或多种，但也可以使用其他合适的纳米微球。具体地，大纳米微球的平均粒径与小纳米微球可以各自独立地为聚苯乙烯微球、聚丙烯酸微球和聚丙烯酸酯微球中的一种或多种。这些纳米微球可以市售获得，或者通过本领域公知的方法制备得到。本专利技术的测定试剂盒中使用的促凝剂为任何适合在免疫胶乳比浊法中使用的促凝剂。具体地，促凝剂为分子量8,000至300,000的PEG或PVP等。具体地，促凝剂的浓度为0.1％至5％(m/v)；优选地，促凝剂的浓度为0.2％至2％(m/v)。本专利技术的测定试剂盒中使用的缓冲剂为任何适合在免疫胶乳比浊法中使用的缓冲剂。具体地，R1试剂和R2试剂的缓冲液各自独立地选自磷酸缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、HEPES缓冲液、硼酸缓冲液、醋酸缓冲液中的一种或更多种。具体地，R1试剂和R2试剂的缓冲液的pH值各自独立地在5至9之间；优选地，R1试剂和R2试剂的缓冲液的pH值各自独立地在6.5至8之间。具体地，R1试剂和R2试剂的缓冲液的浓度各自独立地在10至500nM之间；优选地，R1试剂和R2试剂的缓冲液的浓度各自独立地在100至200nM。具体地，本专利技术的测定试剂盒中的R1试剂还包含NaCl、防腐剂和稳定剂中的一种或多种。优选地，NaCl的浓度在0.1至0.5M之间，防腐剂的浓度为0.05％至0.2％(m/v)，稳定剂浓度为0.05％至0.5％(m/v)。优选地，防腐剂为NaN3，稳定剂为BSA。在本专利技术的另一些实施方案中，本专利技术的测定试剂盒还包括校准品和质控品。该校准品包含浓度为0mIU/mL、10mIU/mL、20mIU/mL、50mIU/mL、100mIU/mL、200mIU/mL、300mIU/mL、500mIU/mL、1000mIU/mL、1500mIU/mL、3000mIU/mL的目的抗原，该质控品包含浓度为10至200mIU/mL的目的抗原和100至1000mIU/mL的目的抗原。具体地，校准品和质控品还包含缓冲液、防腐剂和稳定剂。优选地，校准品和质控品的缓冲液各自独立地为磷酸缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、HEPES缓冲液、硼酸缓冲液、醋酸缓冲液中的一种或更多种，其浓度范围和pH值范围可以参照R1试剂和R2试剂的缓冲液的浓度范围和pH值范围。优选地，防腐剂为NaN3，稳定剂为BSA。校准品和质控品可制备成液体形式或冻干粉形式。校准品的值可溯源至国际参考物质NIBSC75/551(英国NIBSC)。在本专利技术的一些具体实施方案中，目的抗原为β-HCG(人绒毛膜促性腺激素β亚基)，相应地，抗目的抗原的抗体为抗β-HCG抗体。本专利技术的有益效果：本专利技术的免疫胶乳比浊法测定试剂盒，通过使用平均粒径相差在50nm以上的大纳米微球和小纳米微球两种纳米微球，在偶联了抗目的抗原的抗体后，按合适比例混合配制R2试剂，与R1试剂一起使用对样品中的目的抗原的含量进行免疫胶乳比浊法测定，可兼顾灵敏度和线性范围，具有灵敏度高、检测范围宽的优点，而且本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测目的抗原的免疫胶乳比浊法测定试剂盒，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂，所述R1试剂包含促凝剂和缓冲液，所述R2试剂包含偶联有抗所述目的抗原的抗体的纳米微球和缓冲液，所述纳米微球包括大纳米微球和小纳米微球，所述小纳米微球的平均粒径在50nm至250nm之间，所述大纳米微球的平均粒径在250nm至400nm之间，且所述大纳米微球的平均粒径与所述小纳米微球的平均粒径相差在50nm以上。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测目的抗原的免疫胶乳比浊法测定试剂盒，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂，所述R1试剂包含促凝剂和缓冲液，所述R2试剂包含偶联有抗所述目的抗原的抗体的纳米微球和缓冲液，所述纳米微球包括大纳米微球和小纳米微球，所述小纳米微球的平均粒径在50nm至250nm之间，所述大纳米微球的平均粒径在250nm至400nm之间，且所述大纳米微球的平均粒径与所述小纳米微球的平均粒径相差在50nm以上。2.根据权利要求1所述的测定试剂盒，其特征在于，所述纳米微球选自聚苯乙烯微球、聚丙烯酸微球和聚丙烯酸酯微球中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的测定试剂盒，其特征在于，所述促凝剂为分子量8,000至300,000的PEG或PVP。4.根据权利要求1所述的测定试剂盒，其特征在于，按所述R1试剂的总重量，所述促凝剂的浓度在0.1至5重量％之间；优选地，按所述R1试剂的总重量，所述促凝剂的浓度在0.2至2重量％之间。5.根据权利要求1所述的测定试剂盒，其特征在于，所述R1试剂和所述R2试剂还包含缓冲液，所述R1试剂和所述R2试剂的所述缓冲液各自独立地选自磷酸缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、HEPES缓冲液、硼酸缓冲液、醋酸缓冲液中的一种或更多种，所述R1试剂和所述R2试剂的所述缓冲液的pH值各自独立地在5至9之间；优选地，所述R1试剂和所述R2试剂的所述缓冲液的pH值各自独立地在6.5至8之间。6.根据权利要求1所述的测定试剂盒，其特征在于，所述R1试剂和所述R2...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈小茹，严小莉，吴向东，
申请(专利权)人：深圳上泰生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44