一种检测吡虫啉的试纸条、吡虫啉半抗原的制备方法及检测吡虫啉残留的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测吡虫啉的试纸条，包括底板，底板的上设有样品吸收垫和吸水垫；底板上还设有结合物释放垫，结合物释放垫的一部分位于样品吸收垫与底板之间；被样品吸收垫覆盖，另一部分不被样品吸收垫覆盖且位于样品吸收垫与吸水垫之间；在结合物释放垫与吸水垫之间设有反应膜，反应膜上具有包被有吡虫啉半抗原‑载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，结合物释放垫上设有吡虫啉单克隆抗体‑胶体金标记物。

【技术实现步骤摘要】
一种检测吡虫啉的试纸条、吡虫啉半抗原的制备方法及检测吡虫啉残留的方法
本专利技术涉及吡虫啉检测，具体涉及一种检测吡虫啉的试纸条、吡虫啉半抗原的制备方法及检测吡虫啉残留的方法。
技术介绍
吡虫啉(IMI)是烟碱类超高效杀虫剂，具有广谱、高效、低毒、低残留，害虫不易产生抗性，对人、畜、植物和天敌安全等特点，并有触杀、胃毒和内吸等多重作用。目前，含IMI的农药产品已在120多个国家的140余种农作物上登记使用，应用范围涉及粮食、蔬菜、果树、茶叶等60余种作物，防治对象涉及同翅目、半翅目、缨翅目、双翅目、鞘翅目、鳞翅目等7个目50多种害虫。IMI的大量使用不仅对环境造成了严重影响，同时畜禽因长期食用含IMI残留的植物，使其在体内富集，最后经食物链进入人体，危害人体健康。土壤是农药在环境中的主要归属。农药无论以何种方式施用，大都会直接或间接进入土壤中。农药在土壤中的降解归宿是农药环境行为的重要部分。因此，测定土壤、门窗洞等砌体墙中吡虫啉残留量，对科学评估农药残留动态及其对环境现实和潜在的污染是必要的。从文献报道看，有关IMI残留的检测方法主要集中于高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、电化学分析法(EA)和免疫分析法(ELISA)四个方面，更倾向于色谱技术和免疫检测技术。尽管色谱法是目前公认的药物残留检测方法，但这类方法普遍存在着所需仪器昂贵、仪器操作技术要求高、样品前处理繁琐和分析耗时长、检测成本高、不适于现场实时检测等问题。而药物残留免疫检测技术在残留样本检测过程中的复杂程度、速度、灵敏度、准确性、特异性、单位时间内样本分析容量、检测成本等方面与仪器分析法的比较优势突出，几乎克服了仪器分析法所表现出来的所有不足，近年来已经在食品质量安全检测中得到了越来越广泛的应用，且逐渐被人们所认可。残留物的免疫学检测方法不仅检测限低、特异性强，而且操作简便、检测速度快、检测成本低，非常容易推广，是当前药物残留检测的研究热点。尽管国外已有IMI残留免疫学检测的文献报道，但均不同程度地存在着残留样本前处理程序复杂、费用高、检测限偏高，不能满足国际上IMI在食品中的MRLs等问题。因此，找到一个更有效的方法解决这些问题，是摆在我们面前亟待解决的重要问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种检测吡虫啉的试纸条、吡虫啉半抗原的制备方法及检测吡虫啉残留的方法，其能够快速对残留的吡虫啉进行检测，解决现有技术中的问题。本专利技术采用的技术方案，如下所示：一种检测吡虫啉的试纸条，包括底板，底板的上设有样品吸收垫和吸水垫；底板上还设有结合物释放垫，结合物释放垫的一部分位于样品吸收垫与底板之间；被样品吸收垫覆盖，另一部分不被样品吸收垫覆盖且位于样品吸收垫与吸水垫之间；在结合物释放垫与吸水垫之间设有反应膜，反应膜上具有包被有吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，结合物释放垫上设有吡虫啉单克隆抗体-胶体金标记物。作为一种优选方式，此试纸条装在试纸壳内，试纸壳上设有加样孔，加样孔内滴加的液体首先与样品吸收垫接触。作为一种优选技术方案，所述吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物是由吡虫啉半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白中任意一种。作为一种优选技术方案，所述吡虫啉单克隆抗体是以吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，是由吡虫啉单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌获得。作为一种优选技术方案，检测线的制备包括以下过程：步骤1，将吡虫啉半抗原与载体蛋白偶联，得到吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物；步骤2，将吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物包被在反应膜上构成检测线。作为一种优选技术方案，质控线的制备包括以下过程：步骤1，提取小鼠IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗体；步骤2：将羊抗鼠抗抗体包被在反应膜上构成质控线。作为一种优选技术方案，制备上述吡虫啉单克隆抗体-胶体金标记物包括以下过程：步骤1，制备吡虫啉单克隆抗体：用吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到吡虫啉单克隆杂交瘤细胞株；步骤2，用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；步骤3，将吡虫啉单克隆抗体加入胶体金中，得到吡虫啉单克隆抗体-胶体金标记物。作为一种优选技术方案，上述样品吸收垫用含0.5％牛血清白蛋白、pH为7.2、0.1mol/L磷酸盐缓冲液浸泡2h，37℃下烘干2h，牛血清白蛋白按体积分数计算。一种吡虫啉半抗原的制备方法，包括以下步骤：取6-氯-3-(氯甲基)吡啶-2-胺0.5g，加二甲基亚砜80ml溶解，加氢化钠0.27g，搅拌，加2-硝基亚氨基咪唑烷0.41g，油浴加热，90℃搅拌反应8h；停止反应，冷却至室温，加蒸馏水100ml，加乙酸乙酯80ml×3，萃取三次。合并有机相，蒸干，上硅胶柱，二氯甲烷/甲醇(v/v，10/1)洗脱分离，得到氨基吡虫啉半抗原产物。作为一种优选技术方案，吡虫啉半抗原的分子结构式为：一种检测吡虫啉残留的方法，包括以下步骤:S1:样本处理；S2:利用权利要求1～7任一项所述的检测吡虫啉的试纸条进行检测；S3:分析检测结果。此检测方法特别适合对土壤、门窗洞等砌体墙中吡虫啉残留进行检测。本专利技术的吡虫啉快速检测试纸条采用高度特异性的抗体抗原反应及竞争抑制免疫层析分析技术，将吡虫啉单克隆抗体-胶体金标记物固定于结合物释放垫上，样品中的吡虫啉在流动过程中，与结合物释放垫上的吡虫啉单克隆抗体-胶体金标记物结合，形成药物-抗体-胶体金标记物。样本中的药物与反应膜检测线上的吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物竞争结合吡虫啉单克隆抗体-胶体金标记物，根据检测线红色条带有无或颜色深浅来判断待测样品液中是否含有吡虫啉残留。检测时，样品经处理后滴入加样孔内，当吡虫啉在样品中的浓度低于检测限或为零时，单克隆抗体-胶体金标记物在层析过程中会与固定在反应膜上的吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物结合，在检测线(T)和质控线(C)内各出现一条红色条带；如果吡虫啉在样品中的浓度等于或高于检测限，单克隆抗体-胶体金标记物会与吡虫啉全部结合，从而在T线处因为竞争反应不会与吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物结合而不出现红色条带。本专利技术的试纸条具有灵敏度高、特异性强、成本低、操作简单、检测时间短、适合各种单位使用、储存简单、保质期长的优点。用本专利技术试纸条检测吡虫啉残留的方法简便、快速、直观、准确、适用范围广、成本低、易推广使用。附图说明图1为吡虫啉半抗原合成图。图2为试纸条剖面结构示意图。其中，附图标记如下所示：1-吸收垫，2-结合物释放垫，3-反应膜，4-吸水垫，5-检测线，6-质控线，7-底板。具体实施方式以下通过具体实施方案进一步描述本专利技术，本专利技术也可通过其它的不脱离本专利技术技术特征的方案来描述，因此所有在本专利技术范围内或等同本专利技术范围内的改变均被本专利技术包含。实施例如图1～2所示，一种检测吡虫啉的试纸条，包括底板、样品吸收垫、吸水垫、结合物释放垫、反应膜、检测线、质控线。其中，反应膜上具有包被有吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线。对于试纸条可部件的制备和组装过程进行一一陈述：1、吡虫啉半抗原的制备取6-氯-3-(氯甲基)吡啶-2-胺0.5g，加二甲基亚砜80ml溶解，加氢化钠本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测吡虫啉的试纸条，其特征在于，包括底板，底板的上设有样品吸收垫和吸水垫；底板上还设有结合物释放垫，结合物释放垫的一部分位于样品吸收垫与底板之间；被样品吸收垫覆盖，另一部分不被样品吸收垫覆盖且位于样品吸收垫与吸水垫之间；在结合物释放垫与吸水垫之间设有反应膜，反应膜上具有包被有吡虫啉半抗原‑载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，结合物释放垫上设有吡虫啉单克隆抗体‑胶体金标记物。

【技术特征摘要】
1.一种检测吡虫啉的试纸条，其特征在于，包括底板，底板的上设有样品吸收垫和吸水垫；底板上还设有结合物释放垫，结合物释放垫的一部分位于样品吸收垫与底板之间；被样品吸收垫覆盖，另一部分不被样品吸收垫覆盖且位于样品吸收垫与吸水垫之间；在结合物释放垫与吸水垫之间设有反应膜，反应膜上具有包被有吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，结合物释放垫上设有吡虫啉单克隆抗体-胶体金标记物。2.根据权利要求1所述的一种检测吡虫啉的试纸条，其特征在于，所述吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物是由吡虫啉半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白中任意一种。3.根据权利要求1所述的一种检测吡虫啉的试纸条，其特征在于，所述吡虫啉单克隆抗体是以吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，是由吡虫啉单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌获得。4.根据权利要求1所述的一种检测吡虫啉的试纸条，其特征在于，检测线的制备包括以下过程：步骤1，将吡虫啉半抗原与载体蛋白偶联，得到吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物；步骤2，将吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物包被在反应膜上构成检测线。5.根据权利要求1所述的一种检测吡虫啉的试纸条，其特征在于，质控线的制备包括以下过程：步骤1，提取小鼠IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗体；步骤2：将羊抗鼠抗抗体包被在反应膜上构成质控线...

【专利技术属性】
技术研发人员：张亮，徐鹏，熊先贵，贾慧娴，彭凯俊，王思忠，陈尚海，曾小虎，李宁，吴小胜，崔海峰，赵正苗，
申请(专利权)人：成都市房屋安全事务中心成都市白蚁防治研究中心，
类型：发明
国别省市：四川,51