【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物化学领域，具体涉及一种抗环瓜氨酸肽抗体的检测试剂盒及其应用。
技术介绍
1、类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，ra)是一种常见的慢性自身免疫性疾病。在全世界大约有1％的人罹患此病。ra能引起关节的疼痛、僵直及肿胀。在发病2年内即可能出现不可逆的骨关节损伤，并可引起多种并发症，如神经系统疾病、心包炎、淋巴腺炎等。因此，及早诊断ra及给予缓解病情的药物治疗，对控制病情非常重要。1998年国外首次报道的抗环瓜氨酸肽抗体(anti-cyclic cirullinatedpeptide antibodies，抗ccp抗体)的检测对ra具有较高的敏感性和特异性，是ra新的血清标志物。
2、抗环瓜氨酸肽抗体(a-ccp)是以igg型为主的抗体，存在于类风湿性关节炎(ra)患者抗丝集蛋白相关抗体中，由b淋巴细胞分泌，特异性高，是ra诊断中的极具价值的辅助诊断指标。通过环瓜氨酸肽抗体检测来诊断ra的敏感性约为50％-75％，特异性相对较高，通常在90％以上。
3、市场上有各种方法学的抗环瓜氨酸肽抗体的检测试剂盒，如酶联免疫法、化学发光法、免疫比浊法等。虽然市场上有同类比浊法试剂盒，但这些试剂盒存在不同的问题，如有的试剂盒的制备方法繁琐，或每批试剂有差异，不能保证一致性，因此不能很好地保证测试结果的准确性；有的试剂盒检测范围不够宽，一般只能测到100-200iu/ml，测试高值样本还需稀释，增多检测的步骤，也增大出现误差的可能性，有的试剂盒特异性不够，有干扰时检测结果出现假阴性或假阳
技术实现思路
1、本专利技术提供一种抗环瓜氨酸肽抗体的检测试剂盒，旨在解决上述的技术问题。
2、本专利技术提供一种抗环瓜氨酸肽抗体的检测试剂盒，包括试剂r1和试剂r2，所述试剂r1包括用于捕获抗环瓜氨酸肽抗体的捕获蛋白、ph为5.5-8.5的缓冲剂、无机盐、表面活性剂、稳定剂、促凝剂和防腐剂，所述捕获蛋白所述蛋白a、蛋白g或其组合，1个所述蛋白a或蛋白g具有2-4个与所述抗环瓜氨酸肽抗体的fc段结合的位点，所述试剂r2包括环瓜氨酸肽胶乳微球、ph为6.5-9.0的缓冲剂、表面活性剂、稳定剂以及防腐剂。
3、进一步的，所述所述试剂r1包括0.5-5g/l的捕获蛋白、10-500mm的ph为5.5-8.5的缓冲剂、2-50g/l的无机盐、0.05-10g/l的表面活性剂、0.5-50g/l的稳定剂、2-50g/l的促凝剂和0.05-2g/l的防腐剂，所述试剂r2包括0.5-5g/l的环瓜氨酸肽胶乳微球、10-500mm的ph为6.5-9.0的缓冲剂、0.05-10g/l的表面活性剂、1-100g/l的稳定剂以及0.05-2g/l的防腐剂。
4、进一步的，所述蛋白a为天然蛋白或重组蛋白，所述蛋白g为去掉白蛋白及细胞表面结合位点的重组蛋白；
5、进一步的，所述蛋白a、所述蛋白g均为重组的融合蛋白。
6、进一步的，所述环瓜氨酸肽胶乳微球为胶乳微球和环瓜氨酸肽共价偶联的偶联物。
7、进一步的，所述胶乳微球为聚苯乙烯微球，所述聚苯乙烯微球的粒径为50-400nm，优选为150-300nm。
8、进一步的，所述胶乳微球的电荷量为10-150μeq/g，优选为20-50μeq/g。
9、进一步的，所述胶乳微球的表面修饰有基团。
10、进一步的，所述基团为羧基、氨基、醛基或氯甲基。
11、进一步的，所述环瓜氨酸肽为含瓜氨酸的环状多肽，且所述环状多肽远离瓜氨酸的末端连接有伯氨基。
12、进一步的，所述缓冲剂为磷酸盐、硼酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐、tris-hcl和good’s缓冲液中的任意一种或多种。
13、进一步的，所述防腐剂为叠氮钠、proclin300、苯甲酸盐类和庆大霉素中的任意一种或多种。
14、进一步的，所述表面活性剂为聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯、聚乙二醇对异辛基苯基醚和烷基酚聚氧乙烯醚中的任意一种或多种。
15、进一步的，所述无机盐为硫酸钠、氯化钠、硫酸钾和氯化铵中的任意一种或多种。
16、进一步的，所述促凝剂为聚乙二醇6000-5000或葡聚糖4000-50000。
17、进一步的，所述稳定剂为蔗糖、聚蔗糖、葡萄糖、海藻糖、牛血清白蛋白和酪蛋白中的任意一种或多种。
18、本专利技术还提供一种如上述的抗环瓜氨酸肽抗体的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述环瓜氨酸肽胶乳微球的制备方法包括以下步骤：
19、s1.使用缓冲液稀释所述胶乳微球，之后加入活化剂，室温震荡25-35分钟；
20、s2.使用缓冲液清洗所述胶乳微球2-3遍，之后对其进行定容至0.9-1.1％(w/v)浓度；
21、s3.向胶乳微球中加入环瓜氨酸肽立即混匀，室温摇床震荡1.8-2.2小时，加入甘氨酸，室温摇床震荡25-35分钟；
22、s4.离心去上清液，使用50mm的ph为7.5的tris-hcl缓冲液清洗微球2-3遍后，定容至1％(w/v)浓度，2-8℃保存。
23、进一步的，所述试剂r1在配制完成后需在2-8℃放置12-48小时。
24、本专利技术还提供一种抗环瓜氨酸肽抗体的检测方法，使用如上述的试剂盒，包括以下步骤：
25、(1)将样本或校准品加入试剂r1中，37℃孵育3分钟后读取吸光度a1；
26、(2)再加入试剂r2，37℃下孵育5分钟后读取吸光度a2，计算反应度δa，δa＝a2-a1；
27、(3)以校准品的浓度为横坐标，以反应度δa为纵坐标，作校准曲线，将样本的反应度代入校准曲线得到的结果为样本中抗环瓜氨酸肽的浓度。
28、本专利技术还提供一种如上述的试剂盒在检测样本抗环瓜氨酸肽抗体中的应用，所述样本为血液。
29、与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
30、1、本专利技术的试剂盒中的试剂配制方法简单，成本低，只需r1中添加适量的蛋白a或蛋白g，无需复杂的标记工艺，减少了生产的批间差，从而能很好地保证测试结果的准确性；
31、2、本专利技术的试剂盒中的试剂r1捕获样本中所有的抗环瓜氨酸肽igg抗体，被试剂r2的环瓜氨酸肽结合，由于环瓜氨酸肽的瓜氨酸表位远离胶乳微球结合端，没有空间位阻，因此检测特异性强；
32、3、本专利技术的试剂盒的蛋白a或蛋白g有2-4个位点结合抗环胍氨酸肽抗体，使抗体和环瓜氨酸肽胶乳微球结合的颗粒增大更明显，提高了检测灵敏度，且能够直接测试样本中高浓度的抗环胍氨酸肽抗体，结果准确，无需稀释，提高了检测范围；
33、4、本专利技术的试剂盒配套全自动生化分析仪或特定蛋白分析仪，可批量快速测试，适合临床上广泛应用。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种抗环瓜氨酸肽抗体的检测试剂盒，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括用于捕获抗环瓜氨酸肽抗体的捕获蛋白、pH为5.5-8.5的缓冲剂、无机盐、表面活性剂、稳定剂、促凝剂和防腐剂，所述捕获蛋白所述蛋白A、蛋白G或其组合，1个所述蛋白A或蛋白G具有2-4个与所述抗环瓜氨酸肽抗体的Fc段结合的位点，所述试剂R2包括环瓜氨酸肽胶乳微球、pH为6.5-9.0的缓冲剂、表面活性剂、稳定剂以及防腐剂。
2.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述所述试剂R1包括0.5-5g/L的捕获蛋白、10-500mM的pH为5.5-8.5的缓冲剂、2-50g/L的无机盐、0.05-10g/L的表面活性剂、0.5-50g/L的稳定剂、2-50g/L的促凝剂和0.05-2g/L的防腐剂，所述试剂R2包括0.5-5g/L的环瓜氨酸肽胶乳微球、10-500mM的pH为6.5-9.0的缓冲剂、0.05-10g/L的表面活性剂、1-100g/L的稳定剂以及0.05-2g/L的防腐剂。
3.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述蛋白A为天然蛋白或重组蛋白，所述
4.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述环瓜氨酸肽胶乳微球为胶乳微球和环瓜氨酸肽共价偶联的偶联物。
5.如权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述胶乳微球为聚苯乙烯微球，所述聚苯乙烯微球的粒径为50-400nm；
6.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲剂为磷酸盐、硼酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐、Tris-HCl和Good’s缓冲液中的任意一种或多种；
7.一种如权利要求1-6任一项所述的抗环瓜氨酸肽抗体的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述环瓜氨酸肽胶乳微球的制备方法包括以下步骤：
8.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述试剂R1在配制完成后需在2-8℃放置12-48小时。
9.一种抗环瓜氨酸肽抗体的检测方法，其特征在于，使用如权利要求1-7任一项所述的试剂盒，包括以下步骤：
10.一种如权利要求1-6任一项所述的试剂盒在检测样本抗环瓜氨酸肽抗体中的应用，其特征在于，所述样本为血液。
...【技术特征摘要】
1.一种抗环瓜氨酸肽抗体的检测试剂盒，其特征在于，包括试剂r1和试剂r2，所述试剂r1包括用于捕获抗环瓜氨酸肽抗体的捕获蛋白、ph为5.5-8.5的缓冲剂、无机盐、表面活性剂、稳定剂、促凝剂和防腐剂，所述捕获蛋白所述蛋白a、蛋白g或其组合，1个所述蛋白a或蛋白g具有2-4个与所述抗环瓜氨酸肽抗体的fc段结合的位点，所述试剂r2包括环瓜氨酸肽胶乳微球、ph为6.5-9.0的缓冲剂、表面活性剂、稳定剂以及防腐剂。
2.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述所述试剂r1包括0.5-5g/l的捕获蛋白、10-500mm的ph为5.5-8.5的缓冲剂、2-50g/l的无机盐、0.05-10g/l的表面活性剂、0.5-50g/l的稳定剂、2-50g/l的促凝剂和0.05-2g/l的防腐剂，所述试剂r2包括0.5-5g/l的环瓜氨酸肽胶乳微球、10-500mm的ph为6.5-9.0的缓冲剂、0.05-10g/l的表面活性剂、1-100g/l的稳定剂以及0.05-2g/l的防腐剂。
3.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述蛋白a为天然蛋白...
【专利技术属性】
技术研发人员：张宁，刘亚伦，陈小茹，吴向东，
申请(专利权)人：深圳上泰生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。