一种大麻HPLC指纹图谱测定方法技术

本申请提供了一种大麻HPLC指纹图谱测定方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)供试品溶液的制备：取大麻药材，粉碎，过筛，烘烤，取烘烤后的大麻药材粉末精密称定，加入提取剂，超声提取，放至室温，过微孔滤膜，取续滤液即得；(2)对照品溶液的制备：分别取大麻二酚酸、次大麻二酚、大麻萜酚、大麻二酚、Δ9‑四氢化次大麻酚、大麻环萜酚、四氢大麻酚、香叶基黄酮A对照品，加入甲醇溶解，制成对照品溶液；(3)测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入高效液相色谱仪，测定，并记录色谱图。

A Method for Determining the Fingerprint of Hemp by High Performance Liquid Chromatography

【技术实现步骤摘要】
一种大麻HPLC指纹图谱测定方法
本专利技术属于药品检测和HPLC检测
，具体地，本专利技术提供了一种大麻HPLC指纹图谱测定方法。
技术介绍
大麻CannabissativaL.，又名火麻、汉麻、线麻、胡麻、野麻，为桑科一年生草本植物。大麻中含有大麻酚类化合物及其衍生物、黄酮及其苷类化合物、生物碱类化合物、香豆素类化合物、萜类及甾醇类化合物、脂肪酸类化合物、菲类化合物及其他化合物。大麻酚类成分是大麻花叶的主要活性成分，主要包括THC(tetrahydrocannabinol，四氢大麻酚)、CBD(cannabidiol，大麻二酚)、CBC(cannabichromene，大麻环萜酚)、CBN(cannabinol，大麻酚)、CBG(cannabigerol，大麻萜酚)及其丙基同系物THCV、CBDV、CBCV和CBGV等。这些大麻酚类成分与固体成分的分离性能、溶解性、提取条件均有差别，同一样品处理方式下同一样品各大麻酚类成分的含量也经常出现差异，在不同批次样品中差异经常更为显著。目前对大麻的质量评价方法单一，主要为采用HPLC-UV来检测大麻中大麻多酚的含量。HPLC指纹图谱的测定方法已经广泛用于中药材、植物的测定，但由于上段所述的原因，HPLC指纹图谱用于大麻一直存在图谱拟合度差、测定效果不稳定的问题，因此其不足以系统、完整地评价大麻的质量。寻找能实现各大麻酚类成分普遍、稳定提取的方法进而建立可靠的大麻HPLC指纹图谱测定方法，从整体上对大麻质量进行评价，在农产品质量评价、食品药品检验中均有需求。
技术实现思路
为克服现有技术的不足，本专利技术旨在提供一种大麻HPLC指纹图谱测定方法，其能有效地反映大麻的质量，有利于对大麻进行整体监控，避免了质量控制的单一性和片面性。该方法稳定、可靠。一方面，本申请提供了一种大麻HPLC指纹图谱测定方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)供试品溶液的制备：取大麻药材，粉碎，过筛，烘烤，取烘烤后的大麻药材粉末精密称定，加入提取剂，超声提取，放至室温，过微孔滤膜，取续滤液即得；(2)对照品溶液的制备：分别取CBDA、CBDV、CBG、CBD、THCV、CBC、THC、香叶基黄酮A对照品，加入甲醇溶解，制成对照品溶液；(3)测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入高效液相色谱仪，测定，并记录色谱图。进一步地，步骤(1)中所述大麻药材为7-9月采摘的成熟工业大麻药材。进一步地，步骤(1)中所述大麻药材选自：大麻叶、大麻花、大麻根、大麻秸秆和大麻种子中的一种或两种以上以任意比例的组合；优选地，所述大麻药材为大麻花和/或大麻叶。进一步地，步骤(1)中所述大麻药材烘烤的温度为100-140℃(如100、110、115、120、125、130、140℃)；在本专利技术的一个实施例中，所述烘烤温度为120℃。进一步地，步骤(1)中所述大麻药材烘烤的时间为60-150分钟(如60、80、90、100、120、150分钟)；在本专利技术的一个实施例中，所述烘烤时间为90分钟。进一步地，步骤(1)中所述提取剂为有机溶剂，其中所述有机溶剂可选自：乙醇、甲醇、异丙醇、乙酸乙酯和丙酮中的一种或两种以上以任意比例的组合。在本专利技术的一个实施方式中，所述有机溶剂为乙醇。进一步地，步骤(1)中所述提取剂的浓度为90-98％(v/v，如90％、92％、94％、95％、96％、98％)；在本专利技术的一个实施例中，所述提取剂的浓度为95％。在本专利技术的一个实施例中，所述提取剂为95％乙醇。进一步地，步骤(1)中所述提取剂的用量为50-200ml/g大麻药材粉末(如50、60、70、80、100、150、200ml/g大麻药材粉末)；在本专利技术的一个实施例中，所述提取剂的用量为70ml/g大麻药材粉末。进一步地，步骤(1)中所述超声提取的功率为100-600W(如，100、200、300、400、500、600W)，频率为10-50kHz(如，10、20、30、40、50kHz)；在本专利技术的一个实施例中，所述超声提取的功率为400W，频率为30kHz。进一步地，步骤(1)中所述超声提取的时间为5-60分钟(如5、10、15、20、30、60分钟)；在本专利技术的一个实施例中，所述超声提取的时间为10分钟。在本专利技术的一个实施例中，所述步骤(1)为：取大麻花叶，粉碎，过筛，120℃烘烤90分钟，取烘烤后的大麻花叶粉末精密称定加入95％乙醇，95％乙醇的用量为70ml/g大麻花叶粉末，超声提取10分钟，放至室温，过0.22μm的微孔滤膜，取续滤液即得。进一步地，所述高效液相色谱仪采用混合型硅胶基质高效液相色谱填料，如C18、C8、CN键合硅胶填料。进一步地，所述测定采用梯度洗脱程序。进一步地，所述梯度洗脱程序如下：洗脱时间为0-15分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：25-30％(如25％、26％、27％、28％、29％、30％)，流动相B：余量；洗脱时间为15-30分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：由25-30％梯度变化为20-25％(如20％、22％、23％、24％、25％)，流动相B：余量；洗脱时间为30-45分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：20-25％(如20％、22％、23％、24％、25％)，流动相B：余量；洗脱时间为45-46分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：由20-25％梯度变化为25-30％，流动相B：余量；洗脱时间为46-56分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：25-30％，流动相B：余量。在本专利技术的一个实施例中，所述梯度洗脱程序如下：洗脱时间为0-15分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：30％，流动相B：余量；洗脱时间为15-30分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：由30％梯度变化为23％，流动相B：余量；洗脱时间为30-45分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：23％，流动相B：余量；洗脱时间为45-46分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：由23％梯度变化为30％，流动相B：余量；洗脱时间为46-56分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：30％，流动相B：余量。进一步地，所述的流动相A浓度的梯度变化为线性梯度变化(流动相的浓度变化与时间成线性关系)、指数梯度变化(流动相的浓度变化与时间成指数关系)或折线梯度变化(流动相的浓度变化与时间成无规则关系)；在本专利技术的一个实施例中，所述的流动相浓度的梯度变化为线性梯度变化。进一步地，所述的流动相A为0.01-0.5％(v/v，如0.01％、0.05％、0.1％、0.15％、0.2％、0.5％)甲酸水溶液；在本专利技术的一个实施例中，所述流动相A为0.1％甲酸水溶液。进一步地，所述的流动相B为0.01-0.5％(v/v，如0.01％、0.05％、0.1％、0.15％、0.2％、0.5％)甲酸乙腈溶液；在本专利技术的一个实施例中，所述流动相B为0.1％甲酸乙腈溶液。进一步地，所述高效液相色谱仪的流速为1.0-1.2ml/min(如1.0、1.1、1.2ml/min)；在本专利技术的一个实施例中，所述高效液相色谱仪的流速为1.0ml/min。进一步地，所述高效液相色谱仪的检测波长为208-220nm(如208、210、215、220nm)；在本专利技术的一个实施例中，所述高效本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种大麻HPLC指纹图谱测定方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)供试品溶液的制备：取大麻药材，粉碎，过筛，烘烤，取烘烤后的大麻药材粉末精密称定，加入提取剂，超声提取，放至室温，过微孔滤膜，取续滤液即得；(2)对照品溶液的制备：分别取大麻二酚酸、次大麻二酚、大麻萜酚、大麻二酚、Δ9‑四氢化次大麻酚、大麻环萜酚、四氢大麻酚、香叶基黄酮A对照品，加入甲醇溶解，制成对照品溶液；(3)测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入高效液相色谱仪，测定，并记录色谱图。

【技术特征摘要】
1.一种大麻HPLC指纹图谱测定方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)供试品溶液的制备：取大麻药材，粉碎，过筛，烘烤，取烘烤后的大麻药材粉末精密称定，加入提取剂，超声提取，放至室温，过微孔滤膜，取续滤液即得；(2)对照品溶液的制备：分别取大麻二酚酸、次大麻二酚、大麻萜酚、大麻二酚、Δ9-四氢化次大麻酚、大麻环萜酚、四氢大麻酚、香叶基黄酮A对照品，加入甲醇溶解，制成对照品溶液；(3)测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入高效液相色谱仪，测定，并记录色谱图。2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)中所述大麻药材选自：大麻叶、大麻花、大麻根、大麻秸秆和大麻种子中的一种或两种以上以任意比例的组合，优选为大麻花和/或大麻叶；步骤(1)中所述提取剂为有机溶剂，其中所述有机溶剂选自：乙醇、甲醇、异丙醇、乙酸乙酯和丙酮中的一种或两种以上以任意比例的组合，优选为乙醇。3.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)中所述大麻药材烘烤的温度为100-140℃，烘烤时间为60-150分钟；所述提取剂的浓度为90-98％；所述提取剂的用量为50-200ml/g大麻药材粉末；所述超声提取的功率为100-600W，频率10-50kHz；所述超声提取的时间为5-60分钟。4.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)中所述大麻药材烘烤的温度为120℃，烘烤时间为90分钟；所述提取剂为95％乙醇；所述提取剂的用量为70ml/g大麻药材粉末；所述超声提取的功率为400W，频率30kHz，所述超声提取的时间为10分钟。5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中，所述高效液相色谱仪采用混合型硅胶基质高效液相色谱填料，优选为C18、C8或CN键合硅胶填料；所述测定采用梯度洗脱程序，所述梯度洗脱程序如下：洗脱时间为0-15分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：25-30％，流...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭昕，张景，孙武兴，王曙宾，邢俊波，
申请(专利权)人：汉义生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11