一种同时检测昆仑雪菊色素合成前体的液相色谱方法技术

本发明专利技术公开了一种同时检测昆仑雪菊色素合成前体的液相色谱方法，包括以下步骤：将儿茶素、表儿茶素、二氢杨梅素和杨梅素分别制成对照品储备液，再依次稀释不同倍数，建立不同浓度梯度的对照品溶液；分别吸取所述对照品储备液或所述对照品溶液混合得到混合对照品溶液；采用高效液相色谱仪对对照品溶液进样分析，记录峰面积，以对照品含量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；再对混合对照品溶液进行液相色谱分析。本发明专利技术可在单一波长下同时检测原花色素合成前体儿茶素、表儿茶素、二氢杨梅素和杨梅素，具有操作方法简单、检测速度快、灵敏度高、重现性好等特点。

Simultaneous determination of precursors of Chrysanthemum Chrysanthemum pigments in Kunlun by liquid chromatography

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测昆仑雪菊色素合成前体的液相色谱方法
本专利技术涉及中药成分分析
，尤其涉及一种同时检测昆仑雪菊色素合成前体的液相色谱方法。
技术介绍
昆仑雪菊又名蛇目菊、双色金鸡菊，隶属雪菊属菊科蛇目菊属。雪菊原产于美国中西部地区，在我国部分地区作为保健茶和药材大面积栽培。野生雪菊生长在昆仑山脉海拔3000米雪线的部分地区，花期短，产量少。雪菊作为药用菊花的一种，其主要成分黄酮类物质和咖啡酸衍生物具有抗氧化的作用，同时还有清热解毒和降压降脂等功效。对昆仑雪菊化学成分的研究主要集中在总黄酮、总皂苷、总多糖和氨基酸含量的测定，也有研究比较昆仑雪菊与其它商品菊花如杭菊、贡菊中绿原酸、木樨草苷、3,5-二咖啡酰奎宁酸和槲皮苷几种单一活性成分的差异。但本申请人发现雪菊中类黄酮含量丰富，其主要化学成分不限于中国药典规定的上述三种成分(绿原酸、木犀草苷、3,5-二咖啡酰奎宁酸)。雪菊相对其它品种药用菊花色泽更深，暗示可能含有更丰富的原花青素和花色苷物质。本申请人寻找一种对原花青素合成前体(儿茶素、表儿茶素)以及花青素合成前体(二氢杨梅素、杨梅素)进行同时检测的方法，从而可以去建立新的昆仑雪菊活性成分检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种同时检测昆仑雪菊色素合成前体的液相色谱方法。一种同时检测昆仑雪菊色素合成前体的液相色谱方法，包括以下步骤：S1、将儿茶素、表儿茶素、二氢杨梅素和杨梅素分别制成对照品储备液，再依次稀释不同倍数，建立不同浓度梯度的对照品溶液；分别吸取所述对照品储备液或所述对照品溶液混合得到混合对照品溶液；S2、采用高效液相色谱仪对对照品溶液进样分析，记录峰面积，以对照品含量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；再对混合对照品溶液进行液相色谱分析。优选地，S1中，儿茶素对照品储备液质量分数为1mg/mL，表儿茶素对照品储备液质量分数为1mg/mL，二氢杨梅素对照品储备液质量分数为1mg/mL，杨梅素对照品储备液质量分数为0.1mg/mL，对照品储备液的溶剂均为甲醇。优选地，S2中，液相色谱条件如下：C18色谱柱，柱温为20-30℃，进样量为5-10μL，流动相流速为0.5-1.2mL/min，检测时间为60min，检测波长为280nm。优选地，S2中，流动相为乙腈(A)-0.1％甲酸(B)，采用梯度洗脱，洗脱程序如下：S2中对对照品溶液进行分析，其保留时间、回归方程、相关系数及线性范围如下：对照品保留时间/min回归方程R2线性范围/μg儿茶素18.65y＝2400x+141.70.9940.6250-5.000表儿茶素24.36y＝1339x-25.040.9990.6250-5.000二氢杨梅素26.46y＝4469x+12.830.9990.0125-0.500杨梅素42.55y＝2786x+14.040.9990.0250-0.500本专利技术的显著优点在于：采用本专利技术可不经样品前处理直接进样分析，而且操作简便，可实现在单一波长下对四种色素合成前体的同时检测，同时本专利技术不仅满足雪菊中儿茶素、表儿茶素、二氢杨梅素和杨梅素的检测需要，还能够用于雪菊中其它黄酮醇、黄酮烷、二氢黄酮类物质的检测，操作方法简单、检测速度快、灵敏度高、重现性好。附图说明图1为实施例1所得高效液相色谱图。图2为实施例2所得高效液相色谱图。图3为实施例3所得高效液相色谱图。图4为实施例4所得高效液相色谱的对比图，其中a是30℃的液相色谱图；b是20℃的液相色谱图。图5为实施例5所得高效液相色谱图。图6为实施例6所得高效液相色谱图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步解说。实施例1一种同时检测昆仑雪菊色素合成前体的液相色谱方法，包括以下步骤：S1、分别称取绿原酸对照品、儿茶素对照品、表儿茶素对照品、二氢杨梅素对照品、木犀草苷对照品、3,5-二咖啡酰奎宁酸对照品、杨梅素对照品和槲皮苷对照品各1mg，溶于甲醇中形成质量分数为1mg/mL的绿原酸对照品储备液、质量分数为1mg/mL的儿茶素对照品储备液、质量分数为1mg/mL的表儿茶素对照品储备液、质量分数为0.1mg/mL的二氢杨梅素对照品储备液、质量分数为0.5mg/mL的木犀草苷对照品储备液、质量分数为1mg/mL的3,5-二咖啡酰奎宁酸对照品储备液、质量分数为0.1mg/mL的杨梅素对照品储备液和质量分数为1mg/mL的槲皮苷对照品储备液；将上述对照品储备液根据情况依次稀释不同倍数，建立不同浓度梯度的对照品溶液；S2、采用高效液相色谱仪将对照品溶液分别进样分析，上述液相色谱条件如下：C18色谱柱，柱温为20℃，进样量为10μL，流动相流速为1.2mL/min，检测波长为280nm，流动相为乙腈(A)-0.1％甲酸(B)，采用梯度洗脱，具体如下：时间乙腈(A)0.1％甲酸(B)0-5min5-10％95-90％5-20min10-15％90-85％20-25min15-20％85-80％25-35min20-25％80-75％35-55min25-60％75-40％55-60min60-5％40-95％记录峰面积，以对照品含量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，具体对照品曲线如下表所示：分别吸取不同体积S1所得对照品储备液或对照品溶液混合(具体为：质量分数为1mg/mL的绿原酸对照品储备液、质量分数为1mg/mL的儿茶素对照品储备液、质量分数为1mg/mL的表儿茶素对照品储备液、质量分数为0.1mg/mL的二氢杨梅素对照品储备液、质量分数为0.5mg/mL的木犀草苷对照品储备液、质量分数为1mg/mL的3,5-二咖啡酰奎宁酸对照品储备液、质量分数为0.1mg/mL的杨梅素对照品储备液和质量分数为1mg/mL的槲皮苷对照品储备液各200μL)得到混合对照品溶液，采用高效液相色谱仪对10μL混合对照品溶液进样分析，其结果如图1所示，由图1可知：绿原酸、儿茶素、木樨草苷和杨梅素可以完全分离，但表儿茶素和二氢杨梅素未达到基线分离，槲皮苷和3,5-二咖啡酰奎宁酸峰重叠。同时根据实施例1中对照品曲线可知：中国药典一部菊花项下规定的绿原酸、木犀草苷、3,5-二咖啡酰奎宁酸三种质量标准物质以及类黄酮化合物槲皮苷的浓度与对应峰面积成较好的线性关系，最低检测限都达到微克级；而儿茶素、表儿茶素、二氢杨梅素和杨梅素四种色素合成前体的相关系数较高，其中二氢杨梅素和杨梅素的最低检测限分别达到0.0125μg和0.025μg。实施例2与实施例1不同之处在于，液相色谱条件中的流动相流速为1.0mL/min，其结果如图2所示，由图2可知：由于咖啡酸类和黄酮类结构中含有多个羟基，故其在反相色谱柱上的保留性质相近，与实施例1相比，表儿茶素和二氢杨梅素刚好基线分离，表明低流速能促进这类多羟基物质的分离，但槲皮苷和3,5-二咖啡酰奎宁酸保留时间仍重叠。实施例3与实施例1不同之处在于，液相色谱条件中的流动相流速为0.8mL/min，其结果如图3所示，由图3可知：槲皮苷和3,5-二咖啡酰奎宁酸峰开始分离。实施例4与实施例3不同之处在于，液相色谱条件中的柱温为30℃，其结果如图4所示，其中a是30℃的液相色谱图；b是20℃的液相色谱图。由图4可知：由于继续降低本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同时检测昆仑雪菊色素合成前体的液相色谱方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将儿茶素、表儿茶素、二氢杨梅素和杨梅素分别制成对照品储备液，再依次稀释不同倍数，建立不同浓度梯度的对照品溶液；分别吸取所述对照品储备液或所述对照品溶液混合得到混合对照品溶液；S2、采用高效液相色谱仪对对照品溶液进样分析，记录峰面积，以对照品含量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；再对混合对照品溶液进行液相色谱分析。

【技术特征摘要】
1.一种同时检测昆仑雪菊色素合成前体的液相色谱方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将儿茶素、表儿茶素、二氢杨梅素和杨梅素分别制成对照品储备液，再依次稀释不同倍数，建立不同浓度梯度的对照品溶液；分别吸取所述对照品储备液或所述对照品溶液混合得到混合对照品溶液；S2、采用高效液相色谱仪对对照品溶液进样分析，记录峰面积，以对照品含量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；再对混合对照品溶液进行液相色谱分析。2.根据权利要求1所述同时检测昆仑雪菊色素合成前体的液相色谱方法，其特征在于，S1中，儿茶素对照品储备液质量分数为1mg/mL，表儿茶素对照品储备液质量分数为1mg/mL，二氢杨梅素对照品储备液质量分数为1mg/mL，杨梅素对照品储备液质量...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋程，
申请(专利权)人：皖西学院，
类型：发明
国别省市：安徽,34