用于生产重组融合蛋白的辅助蛋白、编码基因、重组融合蛋白、重组表达载体及制备方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了一种辅助蛋白，为氨基酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示的蛋白，或为与氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白具有85％以上同源性的蛋白，还公开了包含该辅助蛋白的重组融合蛋白、重组表达载体以及该重组融合蛋白的制备方法。本发明专利技术的优点在于，该辅助蛋白可用于生产多种氨基酸个数为20‑80个和/或等电点范围为3‑9的小分子多肽；该重组融合蛋白表达于细胞内，破壁后在4℃‑100℃均可稳定存在于上清液中，具有较佳的热稳定性，可在60℃‑100℃通过热破壁法即可获得大量重组融合蛋白，简化重组融合蛋白的提取流程，降低成本，再在合适条件下通过酶切割或化学切割使辅助蛋白与目的多肽断裂，即可获得稳定而有活性的目的多肽。

Auxiliary proteins, coding genes, recombinant fusion proteins, recombinant expression vectors and preparation methods for recombinant fusion proteins

【技术实现步骤摘要】
用于生产重组融合蛋白的辅助蛋白、编码基因、重组融合蛋白、重组表达载体及制备方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种用于生产重组融合蛋白的辅助蛋白、编码基因、重组融合蛋白、重组表达载体及制备方法。
技术介绍
对于很多种类的多肽和蛋白质，都可用包含编码所述多肽的核苷酸序列的表达载体、转化微生物或动植物宿主细胞表达。目的多肽的表达方法有多种，一种是直接将目的多肽分泌到胞外，另一种是在细胞内直接从目的多肽的天然N端开始表达，还有一种方法是在目的多肽的N端或C端加以辅助蛋白序列从而让辅助蛋白和目的多肽共同表达。大肠杆菌表达系统具有遗传背景清楚、操作简单、培养周期短、异源蛋白表达量高等优点，已经在当今生物制药行业广泛使用。然而，运用如此成熟的表达系统，仍然面临一些问题。例如，大部分小分子量多肽在大肠杆菌中直接表达时，通常表达量不高。由于其分子量小，大部分小分子量多肽直接表达时缺乏稳定而可溶的状态。此外，小分子量多肽在重组表达时，易被宿主胞内或胞外的蛋白酶或肽酶所降解，导致生成不同序列的目的多肽类似物杂质。一些多肽在大肠杆菌或是其他原核生物表达系统中可成功表达和富集的情况下，通常是以不溶的包本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于生产重组融合蛋白的辅助蛋白，其特征在于：为氨基酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示的蛋白，或为与氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白具有85％以上同源性的蛋白。

【技术特征摘要】
2018.07.31 CN 20181085850981.一种用于生产重组融合蛋白的辅助蛋白，其特征在于：为氨基酸序列如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2或SEQIDNO.3所示的蛋白，或为与氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的蛋白具有85％以上同源性的蛋白。2.根据权利要求1所述的辅助蛋白，其特征在于：该辅助蛋白为与氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的蛋白具有95％以上同源性的蛋白。3.根据权利要求1所述的一种辅助蛋白，其特征在于，所述辅助蛋白为人工修饰或包含C29S突变的硫氧还蛋白。4.一种权利要求1所述的辅助蛋白的编码基因，其特征在于：为核苷酸序列如SEQIDNO.4、SEQIDNO.5或SEQIDNO.6所示的基因。5.一种包含权利要求1所述的辅助蛋白的重组融合蛋白，其特征在于：所述重组融合蛋白包括从N端到C端依次连接的辅助蛋白—连接肽—目的多肽，所述辅助蛋白为权利要求1所述的辅助蛋白，所述目的多肽的等电点范围为3-9和/或氨基酸个数为20-80个，所述连接肽为蛋白酶切割位点或化学物质切割位点。6.根据权利要求5所述的重组融合蛋白，其特征在于：所述目的多肽包括促生长激素神经肽、血管紧张素I、血管紧张素II、胰高血糖素、胰高血糖素-1类似物、胰高血糖素样肽-2、生长激素、促胰液素以及前述物质的衍生物。7.根据权利要求6所述的重组融合蛋白，其特征在于：所述蛋白酶包括凝血酶、烟草蚀纹病毒蛋白酶、3C蛋白酶、肠激酶、胰蛋白酶和赖氨酰肽链内切酶，所述化学物质包括溴化氰、羟胺和甲酸。8.根据权利要求5-7任意一项所述的重组融合蛋白，其特征在于：所述连接肽包含六个组氨酸组成的组氨酸标签序列，所述组氨酸标签序列位于所述连接肽的氨基酸序列的N端或C端。9.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁莉，刘懿，
申请(专利权)人：成都英普博集生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51