一种类贻贝粘蛋白的纯化工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种类贻贝粘蛋白的纯化工艺，属于蛋白纯化领域。该纯化工艺包括以下步骤：(1)破胞；(2)酸提；(3)加盐除杂：在步骤(2)的浓缩液中加入盐至终浓度为0.20～0.80M，离心，收集上清液，在上清液中加入盐至终浓度为1～3M，离心，收集沉淀；(4)酶催化氧化；(5)离子交换层析。利用本发明专利技术的纯化工艺获得了高收率、高纯度、高多巴含量的类贻贝粘蛋白。本发明专利技术的纯化工艺步骤简短、成本低廉，在大规模生产类贻贝粘蛋白中具有广阔的应用前景。类贻贝粘蛋白中具有广阔的应用前景。类贻贝粘蛋白中具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种类贻贝粘蛋白的纯化工艺


[0001]本专利技术属于蛋白纯化领域，具体涉及一种类贻贝粘蛋白的纯化工艺。

技术介绍

[0002]贻贝是一种广泛分布于沿海和近海的甲壳类海洋生物，其足丝腺能分泌足丝，并通过足丝形成的足丝盘将贻贝固定在各种基材表面。其足丝的主要成分为贻贝足丝蛋白(Mytilus edulis foot protein，MFP)，也称为贻贝粘蛋白(mussel adhesive protein，MAP)，该蛋白具有高强度、高韧性和防水性。贻贝粘蛋白还具有耐腐蚀性强、生物相容性良好、不会产生免疫反应等特点，在海洋工程、生物医学及表面化学等领域具有广泛的应用前景。
[0003]大量的研究表明，贻贝粘蛋白能粘附于几乎所有的固体材料表面的关键在于其结构中所富含的3，4
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二羟基苯丙氨酸(简称DOPA，又称多巴)功能元。多巴是一种侧基为儿茶酚(邻苯二酚)官能团的氨基酸，其中的苯酚基团具有很强的金属螯合能力，能在材料表面形成不可逆的有机金属络合物，还能与蛋白质等极性聚合物形成很强的氢键，多巴对贻贝粘蛋白的防水性黏合及内聚本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种类贻贝粘蛋白的纯化工艺，其特征在于：包括以下步骤：(1)破胞：表达类贻贝粘蛋白的工程菌发酵培养后，收集发酵液，破胞，离心，收集沉淀；(2)酸提：在步骤(1)的沉淀中加入酸，搅拌，离心，收集上清液，超滤浓缩，得到浓缩液；(3)加盐除杂：在步骤(2)的浓缩液中加入盐至终浓度为0.20～0.80M，离心，收集上清液，在上清液中加入盐至终浓度为1～3M，离心，收集沉淀；(4)酶催化氧化：将步骤(3)的沉淀在酪氨酸酶的作用下进行酶催化氧化反应，反应结束后收集反应产物；(5)离子交换层析：将步骤(4)的反应产物利用离子交换层析法提纯。2.根据权利要求1所述的纯化工艺，其特征在于：步骤(1)中，所述破胞的方法为：在发酵液中加入非离子型表面活性剂，搅拌破胞；搅拌破胞的温度为75～90℃，时间为10～25min；所述离心的速度为10000
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g～16000
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g；步骤(2)中，所述沉淀与酸的质量比为1：(0.1～0.6)，所述酸为有机酸；所述搅拌的时间为12～20h；离心前还在搅拌后的液体中加入了1～9倍体积的水；所述离心的速度为10000
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g～16000
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g；所述超滤浓缩时采用的超滤膜的截留分子量为3～10KD，浓缩倍数为5～20倍；所述浓液中酸的质量分数为0.5％～5％。3.根据权利要求2所述的纯化工艺，其特征在于：步骤(1)中，所述搅拌破胞的温度为85℃，时间为15min；所述非离子型表面活性剂为Triton X
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100和/或Triton X
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114，所述非离子型表面活性剂的质量终浓度为0.2％～1％；步骤(2)中，所述沉淀与酸的质量比为1：(0.3～0.4)，所述有机酸为醋酸和/或柠檬酸。4.根据权利要求1所述的纯化工艺，其特征在于：步骤(3)中，所述盐为氯化钠，在浓缩液中加入氯化钠至终浓度为0.30～0.35M，在上清液中加入的氯化钠的终浓度为1.50～1.75M；收集上清液前离心的速度为10000
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g～16000
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘杨昌，杨明颜，饶峻，彭钰洁，唐玲莉，袁夕茹，李端华，王辂，赵晨，
申请(专利权)人：成都英普博集生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：