一种肝素阿伦磷酸钠偶联物的合成方法及其药物技术

本发明专利技术涉及医药领域内一种肝素阿伦磷酸钠偶联物的合成方法及其药物，本发明专利技术的肝素阿伦磷酸钠偶联物的合成方法，步骤1：首先，将2‑氯‑4，6‑二甲氧基‑1，3，5‑三嗪溶于四氢呋喃中，并加入4‑甲基吗啉，室温下搅拌1～2h，通过过滤收集并用THF洗涤沉淀五次，真空干燥48h后即得到DMT‑MM缩合剂；步骤2：将肝素和缩合剂加入超纯水中，搅拌1h，然后将阿仑膦酸钠溶液加入肝素与缩合剂的混合溶液中，反应24～48h后，将溶液倒入透析袋中透析48～72h,并且每4h换一次水，最后将透析得到的产物冻干，即得到肝素阿仑膦酸钠偶联药物。本发明专利技术的方法中，通过肝素修饰阿仑膦酸钠，增加药物的溶解性，提高生物利用度，减小细胞毒性，有效抑制了破骨细胞的生成。

Synthesis and Drugs of Heparin-Allen Sodium Phosphate Coupling

【技术实现步骤摘要】
一种肝素阿伦磷酸钠偶联物的合成方法及其药物
本专利技术涉及医药领域，特别涉及一种肝素阿伦磷酸钠偶联物的合成方法。
技术介绍
癌症是威胁人体健康和生命的重要因素之一。据美国癌症学会2017癌症统计的年度报告，2017年，美国新增癌症病例1688780例，预计将有600920人死于癌症。虽然原发性骨肿瘤发生率较低，但由于骨特殊的环境，实体肿瘤容易转移到骨组织（尤其是前列腺癌、乳腺癌、肺癌和肾癌）。例如，在所有被诊断为乳腺癌的患者中，高达70％的患者将会发生骨转移。在那些转移性疾病仅限于骨骼的患者中，生活质量的下降和最终死亡几乎完全是由骨痛、高钙血症、病理性骨折和硬膜压迫等并发症引起的。阿仑膦酸钠是一种双磷酸盐（BPS），是目前防止骨质疏松症应用极为广泛的药物，能显著减轻疼痛，增加腰椎、股骨密度、减少骨折，而且阿仑膦酸钠对骨质疏松症具有明显的预防作用。阿仑膦酸钠也广泛运用于治疗恶性肿瘤诱发的高血钙症，还应用于治疗肿瘤诱发的骨病、骨损伤、骨痛，尤其是用于治疗多发性骨髓病及乳腺癌（SamuelD.Vasikaran,“Bisphosphonates:anoverviewwithspecialreferencetoalendronate”,Ann.Clin.Biochem,2001,38,608-623）。阿仑膦酸钠结构式阿仑膦酸钠一般为口服用药，双磷酸盐类为水溶性药物，在人体内很难通过脂质膜。在人体内通过血液循环进入骨内毛细血管到达药物作用靶点的浓度低。为了使药物达到有效治疗浓度，需要大剂量服用，会产生胃部不适、胃炎或溃疡。肝素是粘多糖硫酸酯类抗凝血药，是一种生物高分子，具有很好的生物相容性。一般是由猪或牛的肠黏膜中提取，可以用于治疗血栓栓塞疾病，尤其是深部静脉血栓、肺和系统栓塞症。也可以用于肿瘤病人的抗凝治疗、溶栓治疗、血管形成术后再狭窄的治疗等。。公开号为CN105085717A的专利说明书提供了一种肝素的双膦酸盐衍生物，通过酰胺键将阿仑膦酸钠与肝素结合在一起，提高了生物利用度，降低了其对正常细胞的毒副作用，与其相比，本专利制备了一种新的缩合剂，提高了催化效率，以及偶联物的产率，而且制备得到的产物对癌细胞的药效更强，靶向性更强，生物利用度更高。公开号为CN106821984A的专利说明书，制备了阿仑膦酸钠固体脂质纳米粒，此药物具有良好的缓控释作用，提高了阿仑膦酸钠生物利用度，并降低了阿仑膦酸钠的毒副作用。但由于这些现有技术存在制备成本高，工艺复杂，操作繁琐等问题，因而无法大规模生产。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种方法简单，对工艺要求低，可以大规模生产的肝素阿伦磷酸钠偶联物的合成方法，通过肝素修饰阿仑膦酸钠，增加药物的溶解性，提高生物利用度，减少药物对黏膜的刺激性，有效抑制了破骨细胞的生成，减小细胞毒性。本专利技术的目的是这样实现的，一种肝素阿伦磷酸钠偶联物的合成方法，包括如下步骤：步骤1：首先合成DMT-MM缩合剂：将2-氯-4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪溶于四氢呋喃中，并加入4-甲基吗啉，室温下搅拌1～2h，通过过滤收集并用THF洗涤沉淀五次，真空干燥48h后即得到DMT-MM缩合剂；步骤2：将肝素和缩合剂加入超纯水中，搅拌1h，然后将阿仑膦酸钠溶液加入肝素与缩合剂的混合溶液中，反应24～48h后，将溶液倒入透析袋中透析48～72h,并且每4h换一次水，最后将透析得到的产物冻干，即得到肝素阿仑膦酸钠偶联药物；反应过程如下：。进一步地，步骤1中，所述DMT-MM缩合剂合成的方法：将8～12g的2-氯-4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪溶于100ml的四氢呋喃中，再加入4～6ml的4-甲基吗啉，室温下搅拌1～2h，通过过滤收集并用四氢呋喃溶剂洗涤沉淀五次，真空干燥48h后即得到DMT-MM缩合剂。进一步地，步骤2中，所述肝素、DMT-MM缩合剂和阿仑膦酸钠的摩尔用量比为1：1.1～1.5：1～1.2。进一步地，步骤2中，所述肝素、DMT-MM缩合剂和阿仑膦酸钠的摩尔用量比为1：1.2：1。进一步地，所述肝素为低分子肝素、肝素钠或肝素钙。进一步地，所述透析袋的分子量为300～1000。进一步地，所述述透析袋的分子量为500～800。本专利技术的合成方法首先合成DMT-MM缩合剂，再以缩合剂作为催化剂，以活化肝素中的羧基，然后再加入阿仑膦酸钠，使其与肝素更快更多的结合在一起，此方法提高了肝素与阿仑膦酸钠在水溶液中的合成效率，因此本专利技术的肝素阿仑膦酸钠合成工艺简单，合成效率高，便于大规模生产。另外，本专利技术还提供一种采用上述方法合成的肝素阿伦磷酸钠偶联，作为用于治疗骨质疏松症、防治、阻止恶性肿瘤引起的溶骨性病变、高血钙症和减少骨吸收的药物。本专利技术的合成方法制备的肝素阿仑膦酸钠的偶合物，通过肝素修饰阿仑膦酸钠，增加药物的溶解性，提高生物利用度，减少药物对黏膜的刺激性，有效抑制了破骨细胞的生成，减小细胞毒性有效抑制了破骨细胞的生成，并且不会影响活化部分凝血活酶时间，可以防止出血等副作用，同时提高了其生物利用度，保留了阿仑膦酸钠组分在体内抗再吸收和体外破骨细胞形成抑制的最重要能力，也就是说肝素可以作为阿仑膦酸钠的有效抗再吸收药物。可用于治疗骨质疏松症、防治、阻止恶性肿瘤引起的溶骨性病变、高血钙症和减少骨吸收的药物系统中。附图说明图1是实施例1制备的肝素阿仑膦酸钠耦合物与鼠巨噬细胞共培养后的CCK8增殖测试图。图2实施例1制备的肝素阿仑膦酸钠耦合物加上30ng/mL的M-CSF和50ng/mL的RANKL与鼠巨噬细胞共培养5天，然后用4%多聚甲醛固定并用抗酒石酸酸性磷酸酶染色（TRAP）的图片。图3是实施例1制备的肝素阿仑膦酸钠耦合物与鼠巨噬细胞共培养后的破骨细胞面积与数量图。图4是实施例2制备的肝素阿仑膦酸钠耦合物与鼠巨噬细胞用30ng/mL的M-CSF和50ng/mL的RANKL培养，同时在第0,2,或4天时加入40μg/mL的AH，在第5天时的TRAP染色图。图5是实施例2制备的肝素阿仑膦酸钠耦合物计算TRAP阳性的多核细胞（核≥3）的面积图和数量图。图6是实施例1制备的肝素阿仑膦酸钠耦合物用于治疗钛引起的骨缺损后的micro-CT以及组织形态切片图。图7实施例3制备的肝素阿仑膦酸钠耦合物与部分活化凝血酶原时间（APTT）之间的关系图。图8是实施例1制备的肝素阿仑膦酸钠耦合物用于治疗注射乳腺癌细胞后引起骨缺损的X光片图。图9是实施例1的肝素阿仑膦酸钠耦合物用于治疗注射乳腺癌细胞后引起骨缺损的3DmicroCT图。图10是实施例2制备的肝素阿仑膦酸钠耦合物用于治疗注射乳腺癌细胞后引起骨缺损的骨变化图。图11是实施例制备的的肝素阿仑膦酸钠耦合物用于治疗注射乳腺癌细胞后引起骨缺损的苏木精-伊红染色（H&E）图。具体实施方式实施例1：本实施例首先通过如下过程合成肝素阿伦磷酸钠偶联物：1）将23g2-氯-4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪（CDMT）溶于300ml四氢呋喃（THF）中；2）将13.2ml的4-甲基吗啉（NMM）加入步骤1）中溶液，强烈搅拌1h；通过过滤收集固体并用THF洗涤固体5次，真空干燥48h即得到DMT-MM缩合剂；3)将1g肝素，0.874g步骤2）制得的DMT-MM缩合剂溶于50ml超本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肝素阿伦磷酸钠偶联物的合成方法，包括如下步骤步骤1：首先合成DMT‑MM缩合剂：将2‑氯‑4，6‑二甲氧基‑1，3，5‑三嗪溶于四氢呋喃中，并加入4‑甲基吗啉，室温下搅拌1～2h，通过过滤收集并用THF洗涤沉淀五次，真空干燥48h后即得到DMT‑MM缩合剂；步骤2：将肝素和缩合剂加入超纯水中，搅拌1h，然后将阿仑膦酸钠溶液加入肝素与缩合剂的混合溶液中，反应24～48h后，将溶液倒入透析袋中透析48～72h,并且每4h换一次水，最后将透析得到的产物冻干，即得到肝素阿仑膦酸钠偶联药物；反应过程如下：

【技术特征摘要】
1.一种肝素阿伦磷酸钠偶联物的合成方法，包括如下步骤步骤1：首先合成DMT-MM缩合剂：将2-氯-4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪溶于四氢呋喃中，并加入4-甲基吗啉，室温下搅拌1～2h，通过过滤收集并用THF洗涤沉淀五次，真空干燥48h后即得到DMT-MM缩合剂；步骤2：将肝素和缩合剂加入超纯水中，搅拌1h，然后将阿仑膦酸钠溶液加入肝素与缩合剂的混合溶液中，反应24～48h后，将溶液倒入透析袋中透析48～72h,并且每4h换一次水，最后将透析得到的产物冻干，即得到肝素阿仑膦酸钠偶联药物；反应过程如下：。2.根据权利要求1所述肝素阿伦磷酸钠偶联物的合成方法，其特征在于，步骤1中，所述DMT-MM缩合剂合成的方法：将8～12g的2-氯-4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪溶于100ml的四氢呋喃中，再加入4～6ml的4-甲基吗啉，室温下搅拌1～2h，通过过滤收集并用四氢呋喃溶剂洗涤沉淀五次，真空干燥...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱沛志，吴亚萍，王进宇，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32