一种具有pH响应果胶-阿霉素/雷公藤红素纳米粒子的制备制造技术

本发明专利技术公开了一种新型两亲性果胶‑阿霉素纳米粒子的制备，以果胶(PET)为载体，果胶(PET)的羧基与阿霉素(DOX)氨基以酰胺键连接，利用自组装原理与雷公藤红素(CSL)共同溶解到有机溶剂中，得到聚合物胶束，通过超声、离心、洗涤、透析、冷冻干燥等步骤，制备有pH响应的聚合物载药纳米粒子果胶‑阿霉素/雷公藤红素(PET‑DOX/CSL)，本发明专利技术较现有研究，使果胶从单一辅料或交联剂转化为纳米药物载体，得到果胶负载疏水药物的纳米粒子具有靶向传送，分散性好，载药量高，稳定性高，生物相容性好，缓释药物等特点，且包裹两种药物具有协同作用。由于其粒径较小且分散均匀，很容易通过“渗透和滞留”(EPR)效应聚集在肿瘤组织，具有天然的被动靶向作用，能够提高肿瘤部位的药物，可以降低药物突释带来的毒副作用，抑制多种癌细胞的生长，使癌细胞凋亡，以显著改进肿瘤的临床治疗，具有广阔发展前景。

Preparation of Pectin-Adriamycin/Tripterygium Wilfordii Nanoparticles with pH Response

The invention discloses the preparation of a novel amphiphilic pectin adriamycin nanoparticle. The carboxyl group of pectin (PET) is connected with doxorubicin (DOX) amino group by amide bond, and the polymer micelle is dissolved into organic solvent by self-assembly principle and triptolide (CSL), and the polymer micelle is prepared by steps of ultrasound, centrifugation, washing, dialysis and freeze-drying. Responsive polymer drug-loaded nanoparticles pectin -doxorubicin/tripterygium wilfordii (PET -DOX/CSL). Compared with existing studies, the present invention enables pectin to be transformed from a single excipient or cross-linking agent into a nanodrug carrier and obtains pectin-loaded hydrophobic drug nanoparticles with the characteristics of targeted delivery, good dispersion, high drug loading, high stability, good biocompatibility, sustained-release drugs, etc., and encapsulates two drugs. These drugs have synergistic effects. Because of its small size and uniform dispersion, it is easy to gather in the tumor tissue through the \penetration and retention\ (EPR) effect. It has a natural passive targeting effect. It can improve the drug at the tumor site, reduce the toxic and side effects caused by drug sudden release, inhibit the growth of various cancer cells, and make cancer cell apoptosis, so as to significantly improve the clinical treatment of cancer, and has broad prospects for development.

【技术实现步骤摘要】
一种具有pH响应果胶-阿霉素/雷公藤红素纳米粒子的制备
：本专利技术涉及药物靶向递送系统，具体涉及一种具有pH响应果胶-阿霉素/雷公藤红素纳米粒子的制备，属于生物制药和高分子材料

技术介绍
：阿霉素是常用一线化疗药物，具有极强的药理活性，抗肿瘤谱广，对乳腺癌、肺癌等多种实体肿瘤均有显著疗效，起作用机制主要是阿霉素分子嵌入DNA，抑制核酸的合成。但是该药静脉注射后，毒副作用大，存在严重的剂量依赖的心脏毒性以及骨髓抑制等不良反应，且长期应用阿霉素易出现耐药性，而且给药后血浆半衰期极短、溶解度低，降低了疗效，导致治疗指数偏低，使阿霉素的临床应用受到了很大的限制。因此，构建一种新型靶向递药系统，增加阿霉素在肿瘤组织的富集，降低阿霉素在正常组织的分布，降低药物不良反应，延缓药物载体释放，减少阿霉素的毒性，有效提高阿霉素的治疗是十分必要的。果胶这种高分子材料作为药物载体具有优化药物的药代动力学、增加药物在靶器官的含量、降低毒副作用、增加药物对细胞膜的通透性、克服体内生物屏障等优点，已经广泛应用于生物大分子药物及抗癌类药物的输运系统中。但是未经修饰的果胶无法满足实际应用的需求(如无法有效携载药物和络合目的基因，无法应对体内pH变化、血清等复杂的环境，无法靶向输运到有效部位等)，天然多糖进行改性研究成为了一个越来越引人关注的焦点。尽管果胶作为药物载体材料在该领域的应用引起了大家的关注，但果胶与阿霉素通过酰胺键连接形成具有pH响应的载药纳米粒子，再通过自组装原理包裹药物的研究尚未见报道。
技术实现思路
：本专利技术的目的是针对现有技术的不足，提供一种具有pH响应果胶-阿霉素/雷公藤红素纳米粒子的制备方法，果胶与阿霉素通过酰胺键连接，通过自组装原理形成果胶-阿霉素/雷公藤红素纳米粒子，避免了果胶无法应对体内pH变化运输到指定部位等问题，增加阿霉素在病灶的富集并起到缓释作用。所述的自组装的pH响应纳米药物的制备，以果胶为载体，果胶的羧基与阿霉素的羟基通过酰胺键相连，所述自组装的果胶-阿霉素/雷公藤红素纳米粒子具有如下结构：一种具有pH响应果胶-阿霉素/雷公藤红素纳米粒子制备的技术方案如下：(1)称取阿霉素盐酸盐溶于缓冲溶液中，得阿霉素脱盐酸盐溶液，经过滤干燥得到阿霉素固体粉末A。(2)精密称取一定量果胶(PET)(酯化度50％～75％)，溶于5ml二甲基亚砜(DMSO)中，在水浴30℃搅拌30min,使果胶溶解,得溶液B。(3)取一定量的步骤(2)中的溶液B,依次加入一定量阿霉素、激活剂NHS、EDC·HCl，氮气保护室温下避光反应。(4)反应后的溶液在DMSO中透析24h除去未反应的阿霉素，然后再用蒸馏水透析24h除去DMSO和其它杂质，最后将透析后的溶液冷冻干燥，得红色固体C。(5)取一定量粉末果胶/阿霉素结合物C和合适用量的雷公藤红素溶于0.5～1ml的二甲基亚砜，溶解30min，逐滴滴入高速搅拌的去离子水(5～10ml)中，搅拌10min后，将混合物溶液转移到透析袋中，在去离子水中透析12h，冷冻干燥得到的粉紫色固体粉末产物其为酰胺键键合的一种果胶-阿霉素/雷公藤红素结合物的载药纳米粒子。优选地，步骤(1)所述阿霉素盐酸盐与磷酸缓冲溶液比例为1：3～1：4。优选地，步骤(1)所述缓冲溶液pH值为6.5～8.5的磷酸缓冲溶液(PBS)。优选地，步骤(3)按质量比，盐酸阿霉素：果胶＝1：2～1：3.5。优选地，步骤(3)避光反应时间：24h。优选地，步骤(3)中质量比为1：2.4。优选地，步骤(3)中质量比为1：1.4。本专利技术的一种果胶-阿霉素/雷公藤红素结合物的载药纳米粒子，PET与DOX键合的同时，自组装过程还包裹CSL，增大了载药量，纳米粒子稳定，粒径小具有EPR效应，通过渗透和滞留，联合DOX和CSL协同作用靶向作用于肿瘤部位。本专利技术的制备方法简单环保，未使用任何表面活性剂，只需在水介质中形成纳米粒子，有广阔的工业应用前景。具体实施步骤：(1)阿霉素脱盐酸称取阿霉素盐酸盐18mg溶于6ml磷酸缓冲溶液中，其中磷酸缓冲溶液的pH值8.4。经过滤干燥得到阿霉素固体粉末。(2)溶解果胶精密称取50mg果胶(PET)(酯化度50％～75％)，溶于5ml二甲基亚砜(DMSO)中，在水浴30℃搅拌30min,使果胶溶解。(3)果胶阿霉素结合物的制备取一定量的步骤(2)中的溶液B,依次加入激活剂0.00762gNHS，0.0126gEDC·HCl，氮气保护室温下避光反应24h。反应后的溶液在DMSO中透析24h除去未反应的阿霉素，然后再用蒸馏水透析24h除去DMSO和其它杂质，最后将透析后的溶液冷冻干燥，得红色固体C。(4)果胶阿霉素与雷公藤红素自组装取一定量粉末果胶/阿霉素结合物和合适用量的雷公藤红素溶于0.5～1ml的二甲基亚砜，溶解30min，逐滴滴入高速搅拌的去离子水(5～10ml)中，搅拌10min后，将混合物溶液转移到透析袋中，在去离子水中透析12h，冷冻干燥得到的粉紫色固体粉末产物其为酰胺键键合的一种果胶-阿霉素/雷公藤红素结合物的载药纳米粒子。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于果胶/阿霉素结合物载药纳米粒子的制备方法，其特征在于，以抗肿瘤药物阿霉素作为疏水段以果胶作为亲水段，与阿霉素氨基反应成酰胺键，自组装形成具有pH响应的果胶‑阿霉素/雷公藤红素载药纳米粒子。

【技术特征摘要】
1.一种基于果胶/阿霉素结合物载药纳米粒子的制备方法，其特征在于，以抗肿瘤药物阿霉素作为疏水段以果胶作为亲水段，与阿霉素氨基反应成酰胺键，自组装形成具有pH响应的果胶-阿霉素/雷公藤红素载药纳米粒子。2.所述果胶-阿霉素/雷公藤红素载药纳米粒子结构如下：。3.如权利要求1所述的一种两亲性果胶-阿霉素/雷公藤红素纳米粒子的制备步骤如下：(1)称取阿霉素盐酸盐溶于缓冲溶液中，得阿霉素脱盐酸盐溶液，经过滤干燥得到阿霉素固体粉末A。(2)精密称取一定量果胶(PET)(酯化度50％～75％)，溶于5ml二甲基亚砜(DMSO)中，在水浴30℃搅拌30min,使果胶溶解,得溶液B。(3)取一定量的步骤(2)中的溶液B,依次加入一定量阿霉素、激活剂NHS、EDC·HCl，氮气保护室温下避光反应。(4)反应后的溶液在DMSO中透析24h除去未反应的阿霉素，然后再用蒸馏水透析24h除去DMSO和其它杂质，最后将透析后的溶液冷冻...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯晓芸，陶英华，雷建都，
申请(专利权)人：北京林业大学，
类型：发明
国别省市：北京,11