核酸的聚烷氧基化方法，其能够回收和再利用过量的聚烷氧基化试剂技术

本发明专利技术涉及通过使第一反应物和第二反应物反应来制备包含核酸部分和非核酸部分的经修饰的核酸分子的方法，其中所述第一反应物包含非核酸部分和羧基，且其中所述第二反应物是氨基修饰的核酸分子，所述氨基修饰的核酸分子包含所述核酸部分和包含与所述核酸部分附接的氨基的氨基修饰，其中所述方法包括以下步骤：a)通过在水混溶性有机溶剂中的缩合试剂活化所述第一反应物，优选所述第一反应物的羧基，以及b)使步骤a)的活化的第一反应物，优选所述第一反应物的活化的羧基，与所述第二反应物，优选已溶解在水或水混溶性有机溶剂和水的混合物中的所述氨基修饰的核酸分子的氨基修饰的氨基相反应，由此形成所述经修饰的核酸分子。

Polyalkoxylation of nucleic acids, which can recover and reuse excessive polyalkoxylation reagents

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】核酸的聚烷氧基化方法，其能够回收和再利用过量的聚烷氧基化试剂本专利技术涉及通过使第一反应物和第二反应物反应来制备包含核酸部分和非核酸部分的经修饰的核酸分子的方法，其中所述第一反应物包含非核酸部分和羧基，且其中所述第二反应物是氨基修饰的核酸分子，所述氨基修饰的核酸分子包含所述核酸部分和包含与所述核酸部分附接的氨基的氨基修饰,由此方法获得的经修饰的核酸分子,由此方法获得的经修饰的核酸分子用于治疗,由此方法获得的经修饰的核酸分子用于诊断,以及由此方法获得的经修饰的核酸分子在用于分析样品的体外方法中的用途。药物(诸如核酸、肽、蛋白质和纳米颗粒)与其他部分(诸如聚烷氧基化合物)的缀合被广泛用于提高治疗应用的生物利用度、稳定性、安全性和功效。在寡核苷酸治疗领域内，适体和镜像适体(spiegelmers)(也称为镜像成像适体)通常是多烷氧基化的。聚乙二醇(缩写PEG)是一种常用的聚烷氧基化合物，已被食品和药物管理局批准作为静脉内、口服和皮肤施用的药物的一部分。通常，通过首先在固相上组装含有反应基团的核酸的方法制备聚烷氧基化核酸(Hoffmann等人,CurrentProtocolsinNucleic本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种方法，所述方法通过使第一反应物和第二反应物反应来制备包含核酸部分和非核酸部分的经修饰的核酸分子，其中所述第一反应物包含所述非核酸部分和羧基，且其中所述第二反应物是氨基修饰的核酸分子，所述氨基修饰的核酸分子包含所述核酸部分和包含与所述核酸部分附接的氨基的氨基修饰，其中所述方法包括以下步骤：a)通过在水混溶性有机溶剂中的缩合试剂活化所述第一反应物，优选所述第一反应物的羧基，以及b)使步骤a)的活化的第一反应物，优选所述第一反应物的活化的羧基，与所述第二反应物，优选已溶解在水或水混溶性有机溶剂和水的混合物中的所述氨基修饰的核酸分子的氨基修饰的氨基反应，由此形成所述经修饰的核酸分子。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.11.30 EP 16201391.61.一种方法，所述方法通过使第一反应物和第二反应物反应来制备包含核酸部分和非核酸部分的经修饰的核酸分子，其中所述第一反应物包含所述非核酸部分和羧基，且其中所述第二反应物是氨基修饰的核酸分子，所述氨基修饰的核酸分子包含所述核酸部分和包含与所述核酸部分附接的氨基的氨基修饰，其中所述方法包括以下步骤：a)通过在水混溶性有机溶剂中的缩合试剂活化所述第一反应物，优选所述第一反应物的羧基，以及b)使步骤a)的活化的第一反应物，优选所述第一反应物的活化的羧基，与所述第二反应物，优选已溶解在水或水混溶性有机溶剂和水的混合物中的所述氨基修饰的核酸分子的氨基修饰的氨基反应，由此形成所述经修饰的核酸分子。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述氨基修饰的核酸分子在季铵盐存在下溶解在水和水混溶性有机溶剂的混合物中。3.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中将步骤a)的活化的第一反应物添加至溶解在水中或水混溶性有机溶剂和水的混合物中的所述氨基修饰的核酸分子。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述第一反应物和/或所述非核酸部分选自包含以下各项的组：聚烷氧基化合物、肽、蛋白质、糖蛋白、核酸、碳水化合物部分以及不同于肽、蛋白质、糖蛋白、核酸和/或基于碳水化合物的部分的化学部分，优选所述第一反应物和/或所述非核酸部分是聚烷氧基化合物。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述氨基修饰的核酸分子适用于分析方法、诊断和/或治疗。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述氨基修饰的核酸分子选自包含以下各项的组：氨基修饰的适体、氨基修饰的镜像适体(Spiegelmer)、氨基修饰的免疫刺激核酸、氨基修饰的siRNA、氨基修饰的miRNA分子和氨基修饰的核酸反义分子，优选适体是由L-和/或D-核苷酸组成的适体和/或其中所述核酸部分选自包含以下各项的组：适体、镜像适体、免疫刺激性核酸、siRNA、miRNA分子和核酸反义分子，优选适体是由L-和/或D-核苷酸组成的适体。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中在步骤b)中使用超过所述氨基修饰的核酸分子的过量的所述活化的第一反应物的分子。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述过量表示为所述活化的第一反应物和所述氨基修饰的核酸分子的分子的摩尔比，其中所述摩尔比为约1.1至约10，优选约1.5至约3.5。9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中为了活化根据步骤a)的所述第一反应物，将所述第一反应物溶解在水混溶性有机溶剂中，并添加缩合剂和碱，优选地首先添加缩合剂随后添加碱，其中优选将所述缩合剂溶解在水混溶性有机溶剂中。10.根据权利要求9所述的方法，其中所述碱是非亲核碱。11.根据权利要求9至10中任一项所述的方法，其中在添加所述碱后，在0.25min至60min之间，优选在0.5min至20min之间，更优选在1.0min至5.0min之间，将由此获得的溶液添加至含有所述氨基修饰的核酸分子的溶液中，优选在添加所述碱后1.0min至5.0min之间，将包含所述缩合剂和所述碱的溶液添加至含有所述氨基修饰的核酸分子的溶液中。12.根据权利要求9至11中任一项所述的方法，其中所述缩合剂选自包含以下各项的组：a)鏻盐，如BOP、PyBOP、PyBrop、AOP、PyAOP、BrOP和PyClOP，b)脲盐，如HCTU、TCTU、TBTU、HBTU、HATU、TOTU和COMU，以及c)碳二亚胺，其中优选地所述缩合溶剂是PyBOP、TBTU、COMU、HBTU，更优选是HBTU。13.根据权利要求12所述的方法，其中所...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢卡斯·贝特格，
申请(专利权)人：诺克森制药有限公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE