【技术实现步骤摘要】
一种RNA依赖的RNA聚合酶制备方法与应用
本专利技术属于酶生产
，具体的，涉及一种RNA依赖的RNA聚合酶制备方法与应用。
技术介绍
RNA是真核细胞与原核细胞中的一种重要成分，它参与转录、翻译等多种重要的的功能，转录即基因组信息转移，基因组信息是指DNA信息，将这一信息由细胞核转移至细胞质，翻译是指将转录信息翻译为氨基酸或蛋白质，而RNA聚合酶是以一条DNA链或RNA为模板，三磷酸核糖核苷为底物、通过磷酸二酯键而聚合的合成RNA的酶，因为在细胞内与基因DNA的遗传信息转录为RNA有关，所以也称转录酶；在现有技术中，无法通过RNA模板高效合成RNA，因此导致该技术无法应用于工业化生产，为了解决这一问题，本专利技术提供了以下技术方案。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种RNA依赖的RNA聚合酶制备方法与应用。本专利技术需要解决的技术问题为：在现有技术中，无法以RNA为模板高效地合成RNA，导致无法适用于工业化的RNA聚合酶合成与生产。本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：一种RNA依赖的RNA聚合酶制备方法，包括如下步骤：a、选取番茄丛矮病毒科(To...
【技术保护点】
1.一种RNA依赖的RNA聚合酶制备方法，其特征在于，包括如下步骤：a、选取番茄丛矮病毒科的香石竹斑驳病毒属病毒作为原料；b、利用截短或突变除去病毒RNA的N‑末端的跨膜区，得到模板RNA；c、通过原核表达或真核表达在细胞内或细胞外进行RNA聚合酶的合成。
【技术特征摘要】
1.一种RNA依赖的RNA聚合酶制备方法，其特征在于，包括如下步骤：a、选取番茄丛矮病毒科的香石竹斑驳病毒属病毒作为原料；b、利用截短或突变除去病毒RNA的N-末端的跨膜区，得到模板RNA；c、通过原核表达或真核表达在细胞内或细胞外进行RNA聚合酶的合成。2.根据权利要求1所述的一种RNA依赖的RNA聚合酶制备方法，其特征在于，所述步骤b中通过突变除去N-末端的跨膜区的具体方法为缺失突变或点突变。3.根据权利要求1所述的一种RNA依赖的RNA聚合酶制备方法，其特征在于，所述番茄丛矮病毒科的香石竹斑驳病毒属病毒具体为芜菁皱缩病毒。4.根据权利要求1所述的一种RNA依赖的RNA聚合酶制备方法制备得到的RNA聚合酶，其特征在于，该RNA聚合酶用于在细胞内或细胞外制备目标RNA。5.根据权利要求4所述的RNA聚合酶的应用，其特征在于，在细胞外制备目标RNA时，首先RNA聚合酶通过原核表达或真核表达后纯化，成为酶制品，在细胞外的缓冲液环境中，利用目标模板RNA合成互补链RNA。6.根据权利要求4所述的RNA聚合酶的应用，其特征在于，在细胞内制备目标RNA时，将聚合酶模板RNA构建在真核表达载体中，在真核细胞内表达后，利用细胞内的目标模板RNA合成互补链RNA。7.根据权利要求6所述的RNA聚合酶的应用，其特征在于，将聚合酶模板RNA构建在真核表达载体中的方法为：S1、细胞的贴壁培养将待转染细胞加入培养瓶中，通过PBS缓冲液清洗待转染细胞，清洗结束后，向其中加入胰酶，通过胰酶消化分解胞外蛋白，从而使粘结在一起的细胞分离，再向培养瓶中加入血...
【专利技术属性】
技术研发人员：李正和，许凯，裘炀琳，
申请(专利权)人：李正和，许凯，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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