佐匹克隆半抗原、抗原、抗体、胶体金层析检测装置及其用途制造方法及图纸

本发明专利技术提供了一种佐匹克隆半抗原、由该半抗原偶联载体蛋白得到的佐匹克隆抗原、利用该佐匹克隆抗原免疫动物得到的佐匹克隆抗体、以及由此制备的佐匹克隆胶体金层析检测装置和其用途，本发明专利技术利用层析式免疫胶体金原理，通过试纸条中检测线与质控线之间的比色来半定量检测中成药或保健食品中非法添加的佐匹克隆的含量，该检测装置能够快速、准确地检测出中成药或保健食品中非法添加的佐匹克隆，能满足监管部门、检测机构现场监督执法的需要。与现有技术相比，本发明专利技术具有敏度高、特异性强、成本低、操作简单、检测时间短、保质期长的优点。本发明专利技术可应用于中成药或保健食品等中非法添加的佐匹克隆的快速检测。

Zopiclone hapten, antigen, antibody, colloidal gold chromatographic detection device and its application

【技术实现步骤摘要】
佐匹克隆半抗原、抗原、抗体、胶体金层析检测装置及其用途
本专利技术涉及生物检测领域。更具体地，本专利技术涉及一种佐匹克隆半抗原、佐匹克隆抗原、佐匹克隆抗体以及包括上述抗原和抗体的胶体金层析检测装置及其用途。
技术介绍
随着现代社会竞争的日渐激烈，来自学习、生活、就业等压力也随之加大，焦虑和失眠成为困扰人们的常见问题。很多人不得不借助镇静安神类精神药物来维持正常的睡眠和生活，但是由于镇静催眠类药物，如佐匹克隆、艾司唑仑、巴比妥、地西泮等等，都属于二类精神药物，使用受到严格限制，于是具有镇静催眠功效的中药制剂以及保健食品可能成为患者的首选。但是不法分子为了突显产品疗效,在镇静安神类中成药、保健食品中非法添加佐匹克隆、艾司唑仑、巴比妥、地西泮化学成分的现象非常普遍。佐匹克隆是新一代环吡咯酮类镇静催眠药，亦是第三代镇静催眠药的代表。目前，镇静安神类中成药、保健食品中非法添加佐匹克隆违禁化学药物的检测方法有液相色谱(LC)、高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)，以及薄层色谱法(TLC)、近红外光谱法(NIR)、拉曼光谱法(Ramanspectroscopy，RS)等。LC和LC-MS/MS检测具有精度高、分离效率高、选择性好、假阳性率低、重现性好等优点，但操作复杂、设备昂贵，对操作人员技术要求高，且不能立即显示结果等问题，不适用于快速的在线检测和监控。TLC、NIR及RS，操作简单，分析速度快，但灵敏度差，多个成分之间经常会有干扰，专属性不好，且中成药及复杂食品基质容易出现假阳性的情况，一般需要运用专属性更高的方法予以进一步确认。免疫学检测分析技术以其高灵敏、特异性高、快速、操作简便等优点在非法添加检测领域已被广泛应用比起仪器等检验方法有很多优势。综上，本领域亟需一种快速简便、灵敏度高、可检测镇静安神类保健食品或声称具有相应保健功效的食品、中成药中非法添加的佐匹克隆的快速检测方法。
技术实现思路
针对相关技术中的问题，本专利技术提供了一种佐匹克隆胶体金层析检测装置，所述装置包括佐匹克隆抗原和佐匹克隆抗体，其能够特异性地、快速地检测出中成药或保健食品中非法添加的佐匹克隆，并且具有使用方便、灵敏度高的优点。根据本专利技术的第一方面，本专利技术提供了一种佐匹克隆半抗原，所述佐匹克隆半抗原的结构式为：根据本专利技术的第二方面，本专利技术提供了一种佐匹克隆抗原，所述佐匹克隆抗原包括本专利技术提供的佐匹克隆半抗原，以及与所述佐匹克隆半抗原偶联的载体蛋白。在一个实施方案中，所述载体蛋白包括牛血清白蛋白、人血清白蛋白、鸡卵清白蛋白或血蓝蛋白。根据本专利技术的第三方面，本专利技术提供了一种佐匹克隆抗体，所述佐匹克隆抗体为特异性针对本专利技术第二方面提供的佐匹克隆抗原的抗体。在一个实施方案中，所述佐匹克隆抗体为佐匹克隆单克隆抗体或佐匹克隆多克隆抗体。根据本专利技术的第四方面，本专利技术还提供了本专利技术第一方面的佐匹克隆半抗原、本专利技术第二方面的佐匹克隆抗原、本专利技术第三方面的佐匹克隆抗体在免疫学检测中的应用。根据本专利技术的第五方面，本专利技术提供了一种佐匹克隆胶体金层析检测装置，包括试纸条和反应杯，其中，所述试纸条包括反应膜，所述反应膜上有检测线和质控线，并且其中，所述检测线包被有本专利技术第二方面的佐匹克隆抗原，并且其中，所述反应杯中含有胶体金标记的本专利技术第三方面的佐匹克隆抗体。在一个实施方案中，所述质控线包被有特异性针对本专利技术第三方面的佐匹克隆抗体的第二抗体。根据本专利技术的第六方面，本专利技术还提供了一种检测样品中佐匹克隆的方法，所述方法包括使用本专利技术第五方面的胶体金层析检测装置对样品中的佐匹克隆进行检测。在一个实施方案中，所述样品为中成药或保健食品。本专利技术的有益效果：本专利技术利用层析式免疫胶体金原理，通过试纸条中检测线与质控线之间的比色来半定量检测诸如中成药或保健食品等样品中非法添加的佐匹克隆的含量。该检测装置能够快速、准确地检测出诸如中成药或保健食品等样品中非法添加的佐匹克隆，能满足监管部门、检测机构现场监督执法的需要。与现有技术相比，本专利技术具有敏度高、特异性强、成本低、操作简单、检测时间短、保质期长的优点。本专利技术可应用于诸如中成药或保健食品等样品中非法添加的佐匹克隆的快速检测。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是根据本专利技术的实施方案的胶体金层析检测装置中的试纸条的剖面结构示意图。图2是根据本专利技术的实施方案的胶体金层析检测装置中的微孔反应杯的示意图。图3是根据本专利技术的实施方案的结果判定的示意图。图4是根据本专利技术的实施方案的佐匹克隆半抗原的质谱图。图5是根据本专利技术的实施方案的载体蛋白BSA、OVA、佐匹克隆半抗原、相应的佐匹克隆抗原的吸收曲线。具体实施方式下面将结合本专利技术的实施方案和附图，对本专利技术进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施方案仅仅是本专利技术的一部分实施方案，而不是全部的实施方案。基于本专利技术中的实施方案，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施方案，都属于本专利技术保护的范围。根据本专利技术的第一方面，本专利技术提供了一种佐匹克隆半抗原，其中所述佐匹克隆半抗原的结构式为：如本领域技术人员所理解的，所谓半抗原，是指这样的一类小分子物质：其单独存在时并不能诱导免疫应答，即不具备免疫原性，但当其与大分子蛋白质或非抗原性的多聚赖氨酸等载体交联或结合后可获得免疫原性，从而诱导免疫应答。这类小分子物质可与应答效应产物结合，具备抗原性，即免疫反应性，但是不具有免疫原性。结合到本专利技术，容易理解，佐匹克隆半抗原针对佐匹克隆抗体(单抗隆抗体或多克隆抗体均可)具有免疫反应性，但是不具备免疫原性。换言之，佐匹克隆半抗原可以与其相对应的佐匹克隆抗体结合发生抗原-抗体反应；然而，在将该佐匹克隆半抗原接种到动物体内进行免疫时，不能单独刺激动物产生相应的抗体。由于佐匹克隆作为半抗原，并不能产生良好的免疫反应性，因此在将其用作半抗原时需要对其进行修饰。但是需要注意的是，该修饰应尽可能地少，并且尽可能多地保留能与抗体结合的位点。在本专利技术中，通过丁二酸酐修饰佐匹克隆中间体(CAS:43200-81-3)来得到佐匹克隆半抗原分子，具体的制备过程如下实施例中详细描述的，合成路线如下式所示：如上所述，佐匹克隆半抗原仅具有免疫反应性，而不具有免疫原性，并不能单独地刺激动物产生相应的抗体。因此，为了赋予佐匹克隆半抗原以免疫原性，需要将佐匹克隆半抗原与大分子蛋白质等载体偶联、结合或者交联在一起，由此产生既具有免疫反应性又具有免疫原性的佐匹克隆偶联抗原。半抗原与载体分子之间的偶联、结合或者交联方法是本领域已知的，例如本申请实施例部分所示例的方法。因此，根据本专利技术的第二方面，本专利技术提供了一种佐匹克隆抗原，包含本专利技术第一方面提供的佐匹克隆半抗原，以及与所述佐匹克隆半抗原偶联的载体蛋白。本专利技术所提及的术语“载体”是任何能够与半抗原偶联、结合或者交联并由此产生既具有免疫原性又具有免疫反应性的物质，包括例如大分子蛋白质或者非抗原性的多聚赖氨酸等。作为示例，可以使用的载体包括，但不限于，大分子蛋白质，例如牛血清白蛋白(BSA)、人血本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种佐匹克隆半抗原，其中，所述佐匹克隆半抗原的结构式为：

【技术特征摘要】
1.一种佐匹克隆半抗原，其中，所述佐匹克隆半抗原的结构式为：2.一种佐匹克隆抗原，其中，所述佐匹克隆抗原包含：权利要求1所述的佐匹克隆半抗原，以及与所述佐匹克隆半抗原偶联的载体蛋白。3.根据权利要求2所述的佐匹克隆抗原，其中，所述载体蛋白包括牛血清白蛋白、人血清白蛋白、鸡卵清白蛋白或血蓝蛋白。4.一种佐匹克隆抗体，其中，所述佐匹克隆抗体为特异性针对权利要求2或3所述的佐匹克隆抗原的抗体。5.根据权利要求4所述的佐匹克隆抗体，其中，所述佐匹克隆抗体为佐匹克隆单克隆抗体或佐匹克隆多克隆抗体。6.权利要求1所述的佐匹克隆半抗原、权利要求2或3所述的佐匹克隆抗原、权利要求4或5所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：王炳志，杨星星，李细清，许稳健，金虹，张鑫，高荣健，谢迪琴，万秋玲，
申请(专利权)人：深圳市易瑞生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44