丝束蛋白T的医药用途制造技术

本发明专利技术提供了一种丝束蛋白T(Plastin3,PLS3)巯基亚硝基化修饰的医药用途，涉及心血管领域；人主动脉夹层的血管组织中Plastin3巯基亚硝基化修饰水平增加，在细胞水平，Ang II诱导内皮细胞中PLS3发生修饰，其修饰位点在半胱氨酸566位，在动物水平，用BAPN造主动脉夹层模型，内皮细胞特异性过表达PLS3‑C566A改善造模鼠主动脉夹层的形成以及主动脉舒张功能；本发明专利技术提供了丝束蛋白T在制备治疗主动脉夹层血管内皮功能障碍药物中的应用，特别是抑制丝束蛋白T半胱氨酸566的巯基亚硝基化修饰水平的生物载体在制备治疗主动脉夹层血管内皮功能障碍药物中的应用，本发明专利技术开拓了主动脉夹层血管功能障碍新的药物应用，对于主动脉夹层血管功能障碍的防治药品研发提供了有意义的参考。

Medical uses of tow protein T

【技术实现步骤摘要】
丝束蛋白T的医药用途
本专利技术属于主动脉夹层防治
，具体涉及调控丝束蛋白T（plastin3）的巯基亚硝基化修饰在主动脉夹层血管内皮功能障碍防治中的应用。
技术介绍
主动脉夹层是一种致死性的疾病，主动脉破裂会导致猝死。主动脉夹层起源于主动脉内膜撕裂，使中层暴露在血流中。高血压是主动脉夹层形成的主要危险因素，大约80%的主动脉夹层患者伴随高血压。在主动脉夹层患者中，体内AngII的水平明显升高。AngII可引起血管平滑肌细胞收缩和内皮细胞功能障碍，升高血压，促进血管重构，从而导致血管疾病。外科修复和对高血压的药物治疗能改主动脉夹层患者的临床疗效。但许多接受过药物治疗的患者仍然存在主动脉扩张最终伴随主动脉破裂。Jorge等近期报道称，主动脉iNOS（诱导型一氧化氮合酶）介导的一氧化氮(NO)生成在AngII（血管紧张素II）诱导的adamts1缺陷小鼠中主动脉瘤及马凡综合征的发病机制中具有重要作用。巯基亚硝基化是一种常见的蛋白修饰，是一氧化氮(NO)介导的信号转导和细胞功能的主要机制。iNOS介导的巯基亚硝基化作用已在许多疾病有研究。然而，蛋白质巯基亚硝基化修饰和潜在机制在主动脉夹层发生的病理生理过程中的作用尚不清楚。之前对主动脉夹层的研究侧重于描述主动脉中膜结构和平滑肌细胞的表型变化。然而，越来越多的证据表明，内皮功能障碍如内皮ROS生成、血管屏障破坏、eNOS解偶联等在主动脉夹层的发生和发展中具有重要作用。因此，明确主动脉夹层血管内皮功能障碍的调节机制，有助于寻找治疗主动脉夹层血管病变的新方案，对主动脉夹层的预防和治疗具有十分重要的意义。丝束蛋白T（plastin3）是丝束蛋白家族成员之一，主要在实体组织中表达。通过与肌动蛋白细丝结合，聚集并稳定肌动蛋白网络，参与调节细胞运动。研究显示Plastin3主要聚集在细胞伪足，Plastin3参与足细胞中AngII诱导的板状伪足的形成，此外，有研究表明，在脊髓性肌萎缩中，Plast丝束蛋白Tin3和另外一个肌动蛋白捆绑蛋白CORO1C相互作用，从而调节细胞内吞和肌动蛋白动力。但是，plastin3以及plastin3的巯基亚硝基化修饰在主动脉夹层血管病变中是否发挥调控作用及其具体机制目前尚未见报道。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术提供一种丝束蛋白T（plastin3）的医药用途，其具体为：首先，一种丝束蛋白T在制备治疗主动脉夹层血管内皮功能障碍药物中的应用。具体而言，上述丝束蛋白T的应用是指，抑制丝束蛋白T半胱氨酸566的巯基亚硝基化修饰水平的生物载体在制备治疗主动脉夹层血管内皮功能障碍药物中的应用；所述生物载体包括但不限于核苷酸序列如SEQIDNO.3所示的PLS3-C566A质粒。本申请通过转染修饰位点突变的plastin3质粒，抑制Plastin3发生修饰，可有效改善AngII导致的血管内皮功能障碍，证明了抑制丝束蛋白T半胱氨酸566的巯基亚硝基化修饰水平的生物载体可应用于制备治疗主动脉夹层血管内皮功能障碍药物。附图说明图1为临床主动脉夹层患者和未患心血管疾病的遗体捐献者的主动脉血管plastin3的巯基亚硝基化修饰水平检测示意图。plastin3（PLS3）的巯基亚硝基化修饰水平在主动脉夹层患者中明显增加。*P<0.05。图2为AngII（100nM）处理的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）24h的检测示意图，plastin3的巯基亚硝基化修饰水平明显增加。*P<0.05。图3为EA.hy926细胞转染PLS3-WT，PLS3-C349A和PLS3-C566A质粒24h，AngII（100nM）处理24h，检测plastin3巯基亚硝基化修饰水平的示意图。可以看出plastin3的巯基亚硝基化修饰发生在半胱氨酸566位。*P<0.05。图4为在HUVEC细胞中过表达PLS3-WT和PLS3-C566A质粒24h，再给予AngII（100nM）处理24h的检测示意图，检测发现，过表达PLS3-C566A能明显减弱AngII导致的内皮细胞板状伪足形成。*P<0.05。图5为在HUVEC细胞中过表达PLS3-WT和PLS3-C566A质粒24h，再给予AngII（100nM）处理24h的检测示意图，检测发现，过表达PLS3-C566A能明显减弱AngII导致的内皮细胞迁移。*P<0.05。图6为在HUVEC细胞中过表达PLS3-WT和PLS3-C566A质粒24h，再给予AngII（100nM）处理24h的检测示意图，检测发现，过表达PLS3-C566A能明显减弱AngII导致的内皮细胞血管生成。*P<0.05。图7为在HUVEC细胞中过表达PLS3-WT和PLS3-C566A质粒24h，再给予AngII（100nM）处理24h的检测示意图，检测发现，过表达PLS3-C566A能明显改善AngII导致的内皮细胞间连接的破坏。图8为在内皮特异性过表达PLS3-WT和PLS3-C566A，并用β-氨基丙腈（BAPN）诱导的主动脉夹层模型小鼠中，修饰位点突变和野生型小鼠的血管组织形态示意图。可以看修饰位点突变组血管结构明显好于野生型小鼠。图9为在内皮特异性过表达PLS3-WT和PLS3-C566A，并用β-氨基丙腈（BAPN）诱导的主动脉夹层模型小鼠中，修饰位点突变和野生型小鼠的HE和EVG染色结果图。可以看出修饰位点突变组血管结构明显好于野生型小鼠。图10为在内皮特异性过表达PLS3-WT和PLS3-C566A，并用β-氨基丙腈（BAPN）诱导的主动脉夹层模型小鼠中，修饰位点突变和野生型小鼠的血管组织中plastin3修饰水平的检测图。可以看出修饰位点突变组修饰水平明显低于野生型小鼠。*P<0.05。图11为在内皮特异性过表达PLS3-WT和PLS3-C566A，并用β-氨基丙腈（BAPN）诱导的主动脉夹层模型小鼠中，修饰位点突变和野生型小鼠主动脉血管舒张功能检测图。可以看修饰位点突变组血管舒张功能明显好于野生型小鼠。*P<0.05。具体实施方式下面的实施例可使本专业技术人员更全面地理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。以下实施例中涉及的人脐静脉内皮细胞是从南京医科大学附属逸夫医院提供的新生儿脐带中提取，已通过医院伦理委员会批准。以下实施例中，pcDNA3.1载体均由金唯智公司(Suzhou,China)购买；EA.hy926细胞购自上海中科院细胞库；Lipofectamine3000(#L3000015）购自Invitrogen公司；实施例1主动脉夹层与内皮细胞中plastin3相关性检测为了研究主动脉夹层是否影响内皮细胞中plastin3的修饰水平，检测了临床主动脉夹层患者和未患心血管疾病的遗体捐献者的主动脉血管plastin3的巯基亚硝基化修饰水平，生物素转化法（biotin-switch）联合Westernblot检测结果如图1所示，图1中，PLS3表示丝束蛋白T（plastin3）含量，SNO-PLS3表示巯基亚硝基化修饰的丝束蛋白T含量；由图1可见，在主动脉夹层患者中plastin3的巯基亚硝基化修饰水平明显增加。Westernblot检测方法为本领域常规技术，具体可参见文献：“Burn本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种丝束蛋白T在制备治疗主动脉夹层血管内皮功能障碍药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.一种丝束蛋白T在制备治疗主动脉夹层血管内皮功能障碍药物中的应用。2.抑制丝束蛋白T半胱氨酸566的巯基亚硝基化修饰水平的生物载体...

【专利技术属性】
技术研发人员：季勇，潘丽虹，林喆，谢利平，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32