用于处理滚环扩增产物的方法技术

本公开尤其提供了一种用于处理包含滚环扩增(RCA)产物的膜的方法。在一些实施例中，此方法可包含：(a)获得多孔毛细管膜，其包含在所述膜内或所述膜上的荧光标记的RCA产物；(b)将可固化聚合物沉积在所述膜上；和(c)固化所述可固化聚合物以将所述RCA产物包封在固体中。在一些实施例中，所述可固化聚合物可以是硅氧烷并且在其固体形式下可以为透明的。还提供了用于进行所述方法的试剂盒和由所述方法制得的组合物。

A Method for Processing Rolling Ring Amplification Products

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于处理滚环扩增产物的方法交叉引用本申请要求2016年10月27日提交的第62/413,762号临时申请的权益，所述申请以全文引用的方式并入本文中。
技术介绍
可以通过将探针与核酸样品杂交、使与靶序列杂交的探针环化、使用滚环扩增(RCA)扩增环化的探针和量化RCA产物的数量来实施几种基于核酸的诊断测试。在这些方法中，RCA产物可以以各种不同方式量化。举例来说，理论上，RCA产物可以通过标记RCA产物、将样品沉积到玻璃载片表面上，以及计数载片上标记的产物的数量来量化。然而，只要将含有标记的RCA产物的溶液放在玻璃载片上，使标记的RCA产物扩散到表面，且然后计数附接到载片上的标记的RCA产物的数量需要几个小时而不是所有标记的RCA产物到达载片并计数。通过过滤器过滤RCA产物且然后计数通过过滤器捕获的标记的RCA产物的数量，可以在很大程度上解决这些问题。然而，在一些情况下以稳健的方式实施这种方法可能是具有挑战性的，因为许多荧光标记在其与空气接触时会迅速降解。此外，如果过滤器被润湿，RCA产物可以四处移动。这些挑战使得难以以高通量方式实施这些方法，特别是当样品必须物理移动(例如，倒置或旋转)时，不能总是立即进行分析，或者需要重新分析样品。相信本公开提供了一种对这些问题的解决方案。
技术实现思路
本公开尤其提供了一种用于处理包含滚环扩增(RCA)产物的膜的方法。在一些实施例中，所述方法可包含：(a)获得多孔毛细管膜，其包含在膜内或膜上的荧光标记的RCA产物；(b)将可固化聚合物沉积在膜上；和(c)固化可固化聚合物以将RCA产物包封在固体中。在一些实施例中，可固化聚合物可以是硅氧烷并且在其固体形式下可以为透明的。还提供了用于进行所述方法的一种试剂盒和由所述方法制得的一种组合物。将RCA产物包封在固体中(与使用液体或不使用液体相反)被认为是“固定”RCA产物，即将RCA产物固定在过滤器上，并且还防止荧光标记的RCA产物被外界空气氧化(即降解)。因此，通过将RCA产物包封在固体中，包含标记的RCA产物的过滤器可以在多个方向上快速移动(例如，倒置、旋转或传输)和/或储存很长一段时间(例如，数周、数月或甚至几年)。因此，本方法可以促进在工作流程中分析RCA产物，所述工作流程涉及在分析(例如，通过机器人)之前或在其中RCA产物不能总是立即量化的工作流程中快速多向移动过滤器。另外，本方法可以在其中可能需要在很长一段时间之后重新分析过滤器的工作流程中使用。鉴于以下描述，这些和其它潜在特征和优点可能变得显而易见。附图说明所属领域技术人员将理解，下面描述的附图仅用于说明目的。附图并非旨在以任何方式限制本教示的范围。图1示意性地示出了本方法的一些步骤。图2为显示实例1中描述的一些实验结果的直方图。图3为相对于细胞系混合物组成的两个通道的计数之间的比率的图。具体实施方式在描述各种实施例之前，应理解，本公开的教示不限于所描述的特定实施例，并且因此当然可以改变。还应了解，本文中所用的术语仅出于描述特定实施例的目的，且不旨在为限制性的，因为本教示的范围仅由所附权利要求书限制。本文所用的章节标题仅用于组织目的，并且不应理解为以任何方式限制所描述的主题。虽然结合各种实施例描述本专利技术教示，但是并不旨在将本专利技术教示限制于这类实施例。相反，如所属领域技术人员将理解的，本教示涵盖各种替代方案、修改以及等效物。除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的一般技术人员通常理解的含义相同的含义。尽管与本文所述的那些类似或等效的任何方法和材料也可用于实施或测试本教示，但是现在描述例示性方法和材料。对任何公开案的引用是针对申请日之前的其公开内容，并且不应解释为承认本权利要求书无权先于依靠先前专利技术的这个公开案。此外，所提供的公开案日期可以不同于可能需要独立确认的实际公开案日期。如所属领域的技术人员在阅读本专利技术之后将显而易见，本文中所描述和说明的个别实施例中的每一个具有离散组件和特征，其可以在不脱离本教示的范围或精神的情况下，容易地与其它若干实施例中的任一个的特征分离或与其组合。任何所述方法均可以所述事件的顺序或以逻辑上可能的任何其它顺序来进行。本文提及的所有专利和公开案，包括在此类专利和公开案中公开的所有序列，都明确地以引用的方式并入。在更详细地描述例示性实施例之前，阐述以下含义以说明说明书中使用的术语的含义和范围。应注意，除非上下文另外明确规定，否则如本文和所附权利要求书中所用的单数形式“一(a/an)”以及“所述”包括多个指示物。举例来说，术语“引物”是指一种或多种引物，即单一引物和多种引物。还应注意，权利要求书可经起草而排除任何任选的要素。这样，本陈述旨在用作使用这种排除性术语，如结合权利要求要素而叙述的“唯一”、“仅仅”等，或使用“否定”限制的前置基础。如本文所用，术语“过滤”是指将含有分析物(例如，滚环扩增产物)的液体移动通过过滤器以使得一些分析物被过滤器保留的动作。在过滤中，至少一些液体从过滤器的一侧转移到另一侧。如本文所用，术语“滚环扩增”或“RCA”是指使用链置换聚合酶产生环状核酸模板的线性多联拷贝的等温扩增。RCA在分子生物学领域中为众所周知的，并且在各种公开案中有所描述，包括但不限于Lizardi等人(《自然遗传学(Nat.Genet.)》199819:225-232)、Schweitzer等人(《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.)》200097:10113-10119)、Wiltshire等人(《临床化学(Clin.Chem.)》200046:1990-1993)和Schweitzer等人(《生物技术当前观点(Curr.Opin.Biotech)》200112:21-27)，其以引用的方式并入本文中。如本文所用，术语“滚环扩增产物”是指滚环扩增反应的多联产物。如本文所用，术语“荧光标记的滚环扩增产物”是指通过例如将荧光标记的寡核苷酸与滚环扩增产物杂交或其它方式(例如，在扩增期间通过将萤光核苷酸并入产物中)而荧光标记的滚环扩增产物。如本文所用，术语“多孔毛细管膜”是指具有相对密集的单个毛细管的膜，所述毛细管跨越膜的厚度，即从膜的一侧到另一侧，从而允许液体而不是粒子，从膜的一侧通向另一侧。多孔毛细管膜的实例包括但不限于例如阳极氧化铝膜(参见下文)、纳米通道玻璃膜、轨道蚀刻膜和聚四氟乙烯。纳米通道玻璃膜由玻璃制成并具有高密度的均匀通道，其中直径为15微米至15纳米(参见，例如，Tonucci等人，《在纳米光子学II中的发展，AIP会议论文集(AdvancesinNanophotonicsII，AIPConferenceProceedings)》，2007959:59-71；Pearson等人，《科学(Science)》1995270:68-70和Tonucci等人，《科学(Science)》1992258:783-785以及美国专利5,306,661；5,332,681；5,976,444；6,087,274；6,376,096；6,483,640；和6,599,616，其以引用的方式并入)。轨道蚀刻膜由透明聚合物(例如，聚碳酸酯、聚对苯二甲酸乙二酯或聚酰亚胺等)制成，所述聚合物含有直径在0.0本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于处理包含滚环扩增(RCA)产物的膜的方法，其包含：(a)获得多孔毛细管膜，其包含在所述膜内或所述膜上的荧光标记的RCA产物；(b)将可固化聚合物沉积在所述膜上；和(c)固化所述可固化聚合物以将所述RCA产物包封在固体中。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.10.27 US 62/413,7621.一种用于处理包含滚环扩增(RCA)产物的膜的方法，其包含：(a)获得多孔毛细管膜，其包含在所述膜内或所述膜上的荧光标记的RCA产物；(b)将可固化聚合物沉积在所述膜上；和(c)固化所述可固化聚合物以将所述RCA产物包封在固体中。2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(c)中产生的所述固体为透明的。3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(b)的所述可固化聚合物包含固化剂。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(b)的所述可固化聚合物包含稀释剂以降低粘度。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述膜为阳极氧化铝膜，并且其中(c)的所述固体具有润湿特性，使得所述膜为透明的。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述可固化聚合物为硅氧烷。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述硅氧烷与固化剂以及任选地硅氧烷油稀释剂混合。8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述固化步骤(c)通过外部刺激引发。9.根据权利要求8所述方法，其中所述外部刺激为热、潮湿或光。10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述荧光标记的RCA产物通过以下制得：通过所述膜过滤所述RCA产物以产生所述膜内...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·豪厄尔，O·厄曼，F·佩尔松，L·欧劳森，
申请(专利权)人：瓦纳迪斯诊断公司，
类型：发明
国别省市：瑞典,SE