一种凝固酶检测试纸的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种凝固酶检测试纸的制备方法，所用浸液中缓冲体系为反应提供一个良好的中性至弱碱性反应环境；分散剂单独或联合使用可以增加试纸的分散能力，有助于颜色的均匀分布；稳定剂可以保护样本中的酶类物质，提高检测的准确度；所用显色液中稳定剂和分散剂为试纸提高均匀度及稳定性提供一个良好的反应环境；本发明专利技术采用浸渍干燥机自动化干燥方法制备检测试纸，浸渍干燥方式具有便捷、省时、可自动化的优势，有效控制试纸制备过程中人工误差带来的影响，浸渍干燥机主副加热，对温度全面进行监控，温度设定在规定的范围内，可以大大减少试纸批次之间的误差，保证试纸制备的准确性、稳定性及均一性。

Preparation of a Coagulase Test Paper

【技术实现步骤摘要】
一种凝固酶检测试纸的制备方法
本专利技术属于体外诊断试剂
，具体涉及一种凝固酶检测试纸的制备方法。
技术介绍
细菌性阴道病(BV)是由多种细菌所致的无阴道粘膜炎症表现的临床综合征，临床上发病人数远远高于滴虫性阴道炎、真菌性阴道炎。由于BV与早产、绒毛膜羊膜炎、产后子宫内膜炎等产科及多种妇科疾病有关，因此越来越受到临床医生及学者的广泛重视。近年来的研究发现，引起阴道细菌感染的细菌有两大类，一类是由厌氧菌和兼性厌氧菌引起，临床上称细菌性阴道病(BV)；另一类是由需氧型菌引起，临床上称需氧阴道炎(AV)(是比利时著名妇产科专家Donders于2002年正式报道的一种下生殖道感染)，女性下生殖道多数为此两类细菌性感染，也是妇科门诊的常见病和多发病，此外常见的下生殖道感染主要还有外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)、滴虫性阴道炎(TV)等。细菌性阴道病(BV)易感染粪肠球菌、大肠埃希氏菌等需氧菌。而正常阴道是以乳酸杆菌为优势菌的正常微生物群，阴道pH<4.5，当患有需氧菌性阴道炎时，阴道乳酸杆菌减少而需氧菌繁殖导致阴道壁粘膜具有充血、水肿、脓性分泌物的炎性特征。细菌预成酶是细菌在生长繁殖过程中合成的一系列与生长代谢有关的酶类，这些酶类能分解多种底物，并且在有氧环境中较长时间的保留其活性。不同种属的细菌，其预成酶的种类不同。BV其主要预成酶为唾液酸苷酶，AV其主要预成酶为β-葡萄糖醛酸苷酶和凝固酶。BV的主要致病菌为粪肠球菌、大肠埃希氏菌，而大肠埃希菌代谢可产生凝固酶。目前国际公认的AV的诊断主要采用Gilbert提出的，经过Tempera等学者修订的综合诊断方法，其诊断标准为：①常阴道黄色分泌物；②阴道pH升高＞5.0；③分泌物有异味，KOH试验阴性；④阴道分泌物高倍镜检发现大量白细胞；⑤DonderAV评分＞1分。其中，AV评分为必备指标，但AV评分十分复杂，需综合阴道分泌物中乳酸杆菌分级、白细胞数量以及中毒白细胞所占比例、背景菌落数等指标，此法不适于在临床常规检验，特别是医院门诊等的使用。近年来，人们越来越重视对阴道疾病的研究，厌氧菌和兼性厌氧菌阴道炎患者阴道微生态环境均处于异常状态，其阴道微生态环境失衡特点主要表现为易感染粪肠球菌、大肠埃希氏菌等需氧菌，而乳酸杆菌等优势菌缺失明显并伴有阴道pH值升高(pH>6.0)，所以大部分阴道炎都是由这些致菌菌群之间的比例失调引起的内源性感染。此外，在国内的临床中，粪肠球菌和大肠埃希氏菌在阴道炎中感染率极高。而凝固酶鉴定阴道分泌物中需氧菌群，具有很高的敏感度和专属的特异性，特别是针对粪肠球菌和大肠埃希氏菌等需养菌群有一定的诊断意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种凝固酶检测试纸的制备方法，制备的检测试纸具有检测速度快，灵敏度高、特异性好的优势，与类似产品相比操作简单，适宜普及。为了实现上述目的，本专利技术的技术方案具体如下：一种凝固酶检测试纸的制备方法，包括以下步骤：步骤1、浸液的制备所述浸液包括底物、缓冲溶液、稳定剂和分散剂；将所述底物溶解到含有缓冲溶液、稳定剂和分散剂的溶液中，得到所述浸液；所述底物为甘氨酰-精氨酸-4-甲氧基-β-萘胺盐酸盐、甘氨酰-精氨酸-β-萘胺、香豆素衍生物或伞形酮衍生物；所述缓冲溶液为Tris-HCl缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液或硼酸-硼砂缓冲液；所述稳定剂为蔗糖、海藻糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖或阿拉伯糖；所述分散剂为PVP-K30、PVP-K90、PEG-2000、PEG-4000和PEG-6000中的一种或多种；步骤2、检测试纸的制备用步骤1制备的浸液采用浸渍干燥机自动化干燥方法浸润滤纸，制备得到所述检测试纸；浸渍干燥机温度设定：浸液：开机后将设备温度主加热设定60-80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到60-80℃，各干燥室温度≥60℃时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：7.0-11.0Hz；步骤3、显色液的制备所述显色液包括显色剂、稳定剂和分散剂；所述显色剂、稳定剂和分散剂溶解到硫酸溶液或蒸馏水中，制备得到所述显色液；所述显色剂为二甲氨基肉桂醛、对二甲氨基苯甲醛、固蓝B盐、固红B盐、固蓝BB盐、固蓝RR盐、固红T或者固红TR；所述稳定剂为TritonX-100或者TritonX-200；所述分散剂为PVP-K30或者PVP-K90；所述显色液配合所述检测试纸共同检测分泌物中的凝固酶成分。在上述技术方案中，所述步骤2的具体步骤如下：步骤1、按开机流程将浸渍干燥机打开，将设备温度主加热设定60-80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到60-80℃，各干燥室温度达到≥60℃时开始浸液；步骤2、将浸液使用的滤纸进行悬挂，浸液槽安装好；步骤3、将步骤1配制好的浸液倒入浸渍槽中，浸液量应在浸渍槽的1/2处，然后将剩余的浸液倒入盛药瓶中，调节浸液注入的速度，将盛药瓶密封；步骤4、开启走纸开关，用压纸轮将滤纸浸入浸液中，记录浸液位置高度；浸渍干燥机走速设定：7.0-11.0Hz；步骤5、浸液烘干过程注意观察浸液剂量，干燥室温度符合要求；步骤6、浸液的滤纸全部从干燥室走出，关闭走纸开关，将滤纸做好标识，放入装有干燥剂的自封袋中并放入干燥器中待用。在上述技术方案中，所述主加热设定为65℃-75℃。在上述技术方案中，所述底物为甘氨酰-精氨酸-4-甲氧基-β-萘胺盐酸盐、甘氨酰-精氨酸-β-萘胺、甘氨酰-精氨酸-7-氨基-4-甲基香豆素、Z-甘氨酰-精氨酸-对硝基苯胺或者甘氨酰-精氨酸-7-氨基-4-甲基伞形酮。在上述技术方案中，所述底物的浓度为1.0-10.0mg/mL，缓冲溶液的浓度为100-500mM、pH为5.0-10.0，稳定剂的浓度为1.00-20.00mg/mL，分散剂的浓度为1.00-20.00mg/mL。在上述技术方案中，所述缓冲溶液的浓度为200-400mM、pH为6.0-9.0。在上述技术方案中，步骤3中所述显色剂的浓度为1.0-5.0mg/mL，稳定剂的浓度为1.0-5.0mg/mL，分散剂的浓度为1.0-5.0mg/mL，硫酸溶液的浓度为0.1-3.0mg/mL。在上述技术方案中，检测体系pH值为6.0-9.0在上述技术方案中，所述滤纸的类型为7218型滤纸、31ET型滤纸、3MM型滤纸、319型滤纸或者526型滤纸。本专利技术的有益效果是：本专利技术提供的凝固酶检测试纸的制备方法，所用浸液中缓冲体系为反应提供一个良好的中性至弱碱性反应环境；分散剂PVP-K30、PVP-K90、PEG-2000PEG-4000、PEG-6000单独或联合使用可以增加试纸的分散能力，有助于颜色的均匀分布；稳定剂蔗糖、海藻糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖、阿拉伯糖等可以保护样本中的酶类物质，提高检测的准确度；所用显色液中TritonX-100或TritonX-200；PVP-K30或PVP-K90，为试纸提高均匀度及稳定性提供一个良好的反应环境；本专利技术提供的一种凝固酶检测试纸的制备方法，采用浸渍干燥机自动化干燥方法制备检测试纸，浸渍干燥方式具有便捷、省时、可自动化的优势，有效控制试纸制备过程中人工误差带来的影响，浸渍干燥机主副加热，对温度全面进行监控，温度设定在规定的范围内，可以大大减少试纸批次之间的误差，保证试纸制备的准确性、稳定性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种凝固酶检测试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、浸液的制备所述浸液包括底物、缓冲溶液、稳定剂和分散剂；将所述底物溶解到含有缓冲溶液、稳定剂和分散剂的溶液中，得到所述浸液；所述底物为甘氨酰‑精氨酸‑4‑甲氧基‑β‑萘胺盐酸盐、甘氨酰‑精氨酸‑β‑萘胺、香豆素衍生物或伞形酮衍生物；所述缓冲溶液为Tris‑HCl缓冲液、磷酸二氢钾‑氢氧化钠缓冲液或硼酸‑硼砂缓冲液；所述稳定剂为蔗糖、海藻糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖或阿拉伯糖；所述分散剂为PVP‑K30、PVP‑K90、PEG‑2000、PEG‑4000和PEG‑6000中的一种或多种；步骤2、检测试纸的制备用步骤1制备的浸液采用浸渍干燥机自动化干燥方法浸润滤纸，制备得到所述检测试纸；浸渍干燥机温度设定：浸液：开机后将设备温度主加热设定60‑80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到60‑80℃，各干燥室温度≥60℃时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：7.0‑11.0Hz；步骤3、显色液的制备所述显色液包括显色剂、稳定剂和分散剂；所述显色剂、稳定剂和分散剂溶解到硫酸溶液或蒸馏水中，制备得到所述显色液；所述显色剂为二甲氨基肉桂醛、对二甲氨基苯甲醛、固蓝B盐、固红B盐、固蓝BB盐、固蓝RR盐、固红T或者固红TR；所述稳定剂为Triton X‑100或者Triton X‑200；所述分散剂为PVP‑K30或者PVP‑K90；所述显色液配合所述检测试纸共同检测分泌物中的凝固酶成分。...

【技术特征摘要】
1.一种凝固酶检测试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、浸液的制备所述浸液包括底物、缓冲溶液、稳定剂和分散剂；将所述底物溶解到含有缓冲溶液、稳定剂和分散剂的溶液中，得到所述浸液；所述底物为甘氨酰-精氨酸-4-甲氧基-β-萘胺盐酸盐、甘氨酰-精氨酸-β-萘胺、香豆素衍生物或伞形酮衍生物；所述缓冲溶液为Tris-HCl缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液或硼酸-硼砂缓冲液；所述稳定剂为蔗糖、海藻糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖或阿拉伯糖；所述分散剂为PVP-K30、PVP-K90、PEG-2000、PEG-4000和PEG-6000中的一种或多种；步骤2、检测试纸的制备用步骤1制备的浸液采用浸渍干燥机自动化干燥方法浸润滤纸，制备得到所述检测试纸；浸渍干燥机温度设定：浸液：开机后将设备温度主加热设定60-80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到60-80℃，各干燥室温度≥60℃时开始浸液；浸渍干燥机走速设定：7.0-11.0Hz；步骤3、显色液的制备所述显色液包括显色剂、稳定剂和分散剂；所述显色剂、稳定剂和分散剂溶解到硫酸溶液或蒸馏水中，制备得到所述显色液；所述显色剂为二甲氨基肉桂醛、对二甲氨基苯甲醛、固蓝B盐、固红B盐、固蓝BB盐、固蓝RR盐、固红T或者固红TR；所述稳定剂为TritonX-100或者TritonX-200；所述分散剂为PVP-K30或者PVP-K90；所述显色液配合所述检测试纸共同检测分泌物中的凝固酶成分。2.根据权利要求1所述的凝固酶检测试纸的制备方法，其特征在于，所述步骤2的具体步骤如下：步骤1、按开机流程将浸渍干燥机打开，将设备温度主加热设定60-80℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到60-80℃，各干燥室温度达到≥60℃时开始浸液；步骤2、将浸液使用的滤纸进行悬挂，浸液槽安装好；步骤3、将步骤1配制好的浸液倒入浸渍槽中，浸液...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱子是，崔秀丽，孙德亚，林月，何浩会，孙成艳，
申请(专利权)人：迪瑞医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22