一种高效的茶树叶片蛋白质提取方法技术

本发明专利技术公开了一种高效的茶树叶片蛋白质提取方法，以新鲜茶树叶片，采用TCA/丙酮混合液进行提取，分离、静置，进一步对静置后的沉淀进行清洗纯化，低温真空冷冻干燥，获得粗蛋白，再采用裂解液裂解粗蛋白，离心取上清获得纯蛋白溶液。本发明专利技术有效提高了提取所获得的蛋白质数量，采用2D‑PAGE进行分离后，分离效果好，能有效将蛋白质分离，蛋白质点清晰；采用LC/MS/MS对蛋白质进行鉴定，结果表明，采用本发明专利技术方法提取的蛋白质数量在4117～4218个之间。本发明专利技术方法为茶树叶片蛋白质组学研究奠定了重要的基础。

An Efficient Method for Protein Extraction from Tea Leaves

【技术实现步骤摘要】
一种高效的茶树叶片蛋白质提取方法
本专利技术属于蛋白质提取
，具体涉及一种高效的茶树叶片蛋白质提取方法。
技术介绍
茶叶是我国重要的经济作物之一，香气是作为茶叶评价等级的重要指标。因此，近年来众多学者从不同角度研究茶叶香气形成的原因，以期通过人工调节的方法提高茶叶香气物质含量，提高茶叶的品质。其中，蛋白质组学是用于研究茶树叶片物质代谢的重要方法，利用蛋白质组学方法，可有效分析茶树叶片代谢过程变化，寻找茶树叶片香气合成途径中关键酶，进而进行调控。然而，由于茶树叶片含有大量的粗纤维和次生代谢物，因此严重影响了茶树叶片蛋白质的提取与分离，限制了茶叶蛋白质组学的进一步研究。近年来，众多学者开展大量茶树叶片蛋白质提取方法的研究，然而效果不佳，提取的蛋白质数量有限仅有2000个左右的蛋白质点，远远不能满足蛋白质组学研究的需求。因此，开发一种高效的茶树叶片蛋白质提取方法对于茶树叶片蛋白质组学的研究具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种高效的茶树叶片蛋白质提取方法，采用该方法可高效提取茶树叶片中的蛋白质，所获得蛋白质数量多，分离效果好。为了达成上述目的，本专利技术采用的主要技本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效的茶树叶片蛋白质提取方法，其特征在于：其包括以下步骤：1）茶树叶片的初步研磨、提取、静置取茶树叶片，剪成片状，称取4～5g茶树叶片置于研钵中，添加0.08～0.12g PVP，往研钵中加入液氮进行研磨，将研磨后的茶树叶片倒入离心管中，加入TCA/丙酮混合液A，然后漩涡振荡，离心，静置10～12h；所述TCA/丙酮混合液A是采用丙酮溶液进行配制，其中TCA含量为15%，巯基乙醇含量为0.1%，丙酮含量为84.9%；2）茶树叶片粗蛋白质纯化将静置后的样品离心，弃去上清液，加入TCA/丙酮混合液B，漩涡振荡，离心，弃去上清液，收集沉淀；所述TCA/丙酮混合液B是采用丙酮溶液进行配制，其中...

【技术特征摘要】
1.一种高效的茶树叶片蛋白质提取方法，其特征在于：其包括以下步骤：1）茶树叶片的初步研磨、提取、静置取茶树叶片，剪成片状，称取4～5g茶树叶片置于研钵中，添加0.08～0.12gPVP，往研钵中加入液氮进行研磨，将研磨后的茶树叶片倒入离心管中，加入TCA/丙酮混合液A，然后漩涡振荡，离心，静置10～12h；所述TCA/丙酮混合液A是采用丙酮溶液进行配制，其中TCA含量为15%，巯基乙醇含量为0.1%，丙酮含量为84.9%；2）茶树叶片粗蛋白质纯化将静置后的样品离心，弃去上清液，加入TCA/丙酮混合液B，漩涡振荡，离心，弃去上清液，收集沉淀；所述TCA/丙酮混合液B是采用丙酮溶液进行配制，其中TCA含量为12%，巯基乙醇含量为0.08%，丙酮含量为87.2%；3）茶树叶片粗蛋白干燥将上述收集的沉淀置于-80℃环境中20～25min，然后将沉淀置于真空冷冻干燥箱中干燥10～12h，获得茶树叶片粗蛋白干粉；4）茶树叶片蛋白的溶解与分离取上述茶树叶片粗蛋白干粉100mg，加入蛋白质样品裂解液1200～1500µL，然后漩涡振荡，超声，离心，收集上清液即为茶树叶片蛋白质溶液。2.根据权利要求1所述一种高效的茶树叶片蛋白质提取方法，其特征在于：步骤1）中，所述茶树叶片剪成1～1.5cm的片状。3.根据权利要求1所述一种高效的茶树叶片蛋白质提取方法，其特征在于：步骤1）中，所述研磨的具体步骤为：往研钵中加入液氮，迅速研磨8～10s，加入液氮，迅速研磨10～12s，加入液氮，迅速研磨12～14s，加入液氮，迅速研磨15～18s。4.根据权利要求1所述一种高效的茶树叶片蛋白质提取方法，其特征在于：步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：王海斌，陈晓婷，王裕华，张华彬，丁力，孔祥海，
申请(专利权)人：龙岩学院，
类型：发明
国别省市：福建,35