一种快速的茶树根系蛋白质提取方法技术

本发明专利技术公开了一种快速的茶树根系蛋白质提取方法，以新鲜茶树根系为材料，先对茶树的根系样品进行快速研磨，研磨后的样品采用提取缓冲液进行浸提，采用丙酮进行沉淀，沉淀后的蛋白质洗涤，冻干，采用裂解液进行裂解、离心、取上清即可获得茶树根系蛋白质。采用本发明专利技术提取的蛋白质，效率高、蛋白质数量多，采用2D‑PAGE进行分离后，分离效果好，蛋白质点清晰；采用LC/MS/MS对蛋白质进行鉴定，结果表明，采用本发明专利技术方法提取的蛋白质数量在2132～2309个之间。本发明专利技术的方法为茶树根系蛋白质组学研究奠定了重要的基础。

A Fast Method for Extracting Protein from Tea Roots

【技术实现步骤摘要】
一种快速的茶树根系蛋白质提取方法
本专利技术属于蛋白质提取
，具体涉及一种快速的茶树根系蛋白质提取方法。
技术介绍
21世纪初，随着茶叶经济效益的提升，茶园茶树大量开采，忽视茶园管理，导致茶园退化严重，茶树病虫害等加剧，茶叶单产水平及品质也逐年下降。为了有效保证茶叶产量，茶农大量施肥维持土壤肥力。然而，茶农发现仅靠施肥等措施并不能有效修复退化茶园，“土壤病”才是造成茶树的产量和品质下降的主要因素。于是，他们采用重植茶树的方法，即在茶树采摘7-9年后，挖除老茶树，深翻土壤，重新移植茶苗。这种措施虽然维持了茶农的经济利益，但是消耗了大量的人力物力财力。茶树根系与土壤接触紧密，土壤是如何影响茶树根系生长，影响茶树根系内部代谢变化，还鲜有报道。茶树根系内部代谢变化与根系蛋白质表达密切相关，近年来，众多学者也尝试运用蛋白质组学的方法分析土壤对茶树根系的影响，然而受限于茶树根系蛋白质提取方法的不成熟，目前茶树根系蛋白质组学研究还处于起步阶段。因此，开发一种快速的茶树根系蛋白质提取方法，对于茶园退化的研究与修复具有重要的作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种快速的茶树根系蛋白质提取方本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速的茶树根系蛋白质提取方法，其特征在于：其包括以下步骤：1) 取茶树根系，洗净，剪碎后称取2～3g茶树根系置于研钵中，添加0.08～0.1 g PVP，往研钵中加入液氮进行研磨，然后将研磨后的茶树根系倒入离心管中，加入15～20 mL预冷至4℃的提取缓冲液，漩涡振荡20～30 s，置于冰上3～5min，重复操作4～6次，离心，收集上清液；2) 将上述上清液加入25～30mL预冷至4℃的丙酮溶液，漩涡振荡10～20 s，置于‑20℃静置6～8 h，离心，弃上清保留沉淀，加入15～20mL预冷至4℃的丙酮溶液，漩涡振荡5～8 s，离心，弃上清保留沉淀，将沉淀置于真空冷冻干燥箱中干燥，获得...

【技术特征摘要】
1.一种快速的茶树根系蛋白质提取方法，其特征在于：其包括以下步骤：1)取茶树根系，洗净，剪碎后称取2～3g茶树根系置于研钵中，添加0.08～0.1gPVP，往研钵中加入液氮进行研磨，然后将研磨后的茶树根系倒入离心管中，加入15～20mL预冷至4℃的提取缓冲液，漩涡振荡20～30s，置于冰上3～5min，重复操作4～6次，离心，收集上清液；2)将上述上清液加入25～30mL预冷至4℃的丙酮溶液，漩涡振荡10～20s，置于-20℃静置6～8h，离心，弃上清保留沉淀，加入15～20mL预冷至4℃的丙酮溶液，漩涡振荡5～8s，离心，弃上清保留沉淀，将沉淀置于真空冷冻干燥箱中干燥，获得茶树根系蛋白干粉；3）取上述茶树根系蛋白干粉20mg，加入800～1000µL的裂解液，漩涡振荡，超声，离心，吸取上清液即为茶树根系蛋白质溶液。2.根据权利要求1所述一种快速的茶树根系蛋白质提取方法，其特征在于：步骤1）中，所述茶树根系剪成0.3～0.5cm的片段。3.根据权利要求1所述一种快速的茶树根系蛋白质提取方法，其特征在于：步骤1）中，所述研磨的具体操作为：往研钵中加入液氮，迅速研磨5～8s，加入液氮，迅速研磨8～10s，加入液氮，迅速研磨8～10s。4.根据权利要求1所述一种快速的茶树根系蛋白质提...

【专利技术属性】
技术研发人员：王海斌，陈晓婷，丁力，孔祥海，王裕华，张华彬，
申请(专利权)人：龙岩学院，
类型：发明
国别省市：福建,35